用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑、試劑盒及方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑、試劑盒及方法，涉及科研和醫(yī)學(xué)草酸檢測(cè)領(lǐng)域，該試劑包括pH值為4.0～7.5的緩沖溶液、濃度為1～50umol/L的Amplex red熒光染料、濃度為0.1～2U/ml的辣根過氧化物酶HRP和濃度為0.01～1.0U/ml的草酸氧化酶，該方法包括以下步驟，收集、純化待測(cè)樣品，得到純化待測(cè)液后，分為若干份，配制標(biāo)定待測(cè)液，將每份標(biāo)定待測(cè)液分為兩組：測(cè)定組和對(duì)比組，向測(cè)定組加入草酸測(cè)定試劑，得到熒光待測(cè)組；向?qū)Ρ冉M加入草酸背景試劑得到對(duì)比待測(cè)組后測(cè)定熒光值，得到草酸的檢出限為1.5～3nmol/L。本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)高通量檢測(cè)、在科學(xué)研究與臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)中使用，該方法的靈敏度較高，可靠性較好。
【專利說明】用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑、試劑盒及方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及科研和醫(yī)學(xué)草酸檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測(cè)尿液和血液中草酸 含量的試劑、試劑盒及方法。

【背景技術(shù)】
[0002] Ox (oxalic acid，草酸）是一種分子式為C2O4H2、分子量為90. 04的二元有機(jī)酸。 人體中的草酸包括外源性草酸和內(nèi)源性草酸，外源性草酸是指通過飲食攝入的草酸，內(nèi)源 性草酸是指人體肝臟自身代謝產(chǎn)生的草酸，正常人體內(nèi)的外源性草酸和內(nèi)源性草酸的含量 基本相同。草酸在人體內(nèi)為最終產(chǎn)物，無法被進(jìn)一步代謝降解，只能經(jīng)過血液循環(huán)至泌尿系 統(tǒng)排出體外。
[0003] 人體內(nèi)血液和尿液中的草酸含量過高時(shí)，容易與鈣離子形成不溶性的草酸鈣晶 體，草酸鈣晶體容易在膀胱、腎臟等器官內(nèi)沉積、形成結(jié)石。因此，通過檢測(cè)人體血液或尿液 中的草酸含量，能夠判斷患者是否罹患草酸鈣形成的結(jié)石，進(jìn)而幫助醫(yī)生給出合適的治療 方案。
[0004] 現(xiàn)有的臨床檢測(cè)草酸的方法包括高效液相色譜法、離子色譜法、辣根過氧化物酶 顯色法、酶電極法和酶聯(lián)免疫法，現(xiàn)有的方法在使用時(shí)，存在以下缺陷：
[0005] (1)離子色譜法使用的DX120色譜系統(tǒng)裝配有型號(hào)為IonPacASll的分析色譜柱， 離子色譜法測(cè)試時(shí)，先將待測(cè)血漿樣品放入超濾離心管，在溫度為4°C的條件下離心30min 除去待測(cè)樣品中的血清蛋白，得上清液，向上清液中加入濃度2mol/L的鹽酸進(jìn)行酸化，該 方法測(cè)得健康人血漿中草酸的濃度為I. 47±0. 15umol/L、SD大鼠血漿中草酸的濃度為 9. 88±0. 91umol/L。色譜系統(tǒng)設(shè)備的成本較高，檢測(cè)過程容易受到操作過程和外界環(huán)境影 響，得到的結(jié)果準(zhǔn)確度較低；色譜系統(tǒng)每次只能檢測(cè)一個(gè)樣品，不能實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)，因而 難以在科學(xué)研究與臨床檢測(cè)中的使用。
[0006] (2)美國(guó)Trinity公司研發(fā)的草酸測(cè)試試劑盒采用HRP(辣根過氧化物酶）顯色 法，通過大麥草酸氧化酶將待測(cè)樣品中的草酸氧化為二氧化碳和過氧化氫，過氧化氫在HRP 作用下與 MBTH(3-methyl-2_benzothiazolinone hydrazone)和 DMAB(3_(dimethylamino) benzoic acid)反應(yīng)生成化合物indamine dye，由于Indamine dye在590nm處有特征吸收 峰，因此，能夠根據(jù)Indamine dye反應(yīng)前后在590nm處吸收峰的變化值計(jì)算得到樣品中草 酸的含量。
[0007] 大麥草酸氧化酶的最適pH為3. 2，HRP的最適pH為5. 0?5. 2,兩者的最適pH值差 別較大，在實(shí)際使用時(shí)，難以使得大麥草酸氧化酶和HRP均達(dá)到較高的活性，此外，Indamine dye的靈敏度較低，誤差較大，只能檢測(cè)草酸含量較高的樣品，難以用于血液樣品的檢測(cè)； 尿液中含有維生素C等物質(zhì)，容易干擾Indamine dye的靈敏度，因此，需要對(duì)待測(cè)的尿液進(jìn) 行多次純化，步驟比較繁瑣，因而難以在臨床檢測(cè)中應(yīng)用。
[0008] (3)方躍等人用丙酮提取法從香蕉皮中提取草酸氧化酶-丙酮粗提物后，與戊二 醛交聯(lián)并偶合于氧電極，制成香蕉皮_丙酮粉漿草酸組織傳感器，用于尿樣中草酸測(cè)定，該 傳感器的工作曲線線性范圍為10?500umol/L，檢測(cè)限為2. 5umol/L，效壽命可維持30天。 該傳感器的操作比較復(fù)雜、穩(wěn)定性較差、且有效壽命較短，難以在臨床檢測(cè)中的使用。
[0009] (4)上海研謹(jǐn)生物科技有限公司用純化的大鼠草酸抗體包被微孔板，制成固相抗 體，向包被單抗的微孔中依次加入大鼠草酸，再與HRP標(biāo)記的草酸抗體結(jié)合，形成抗體-抗 原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB (3, 3'，5, 5' -四甲基聯(lián)苯胺）顯色，TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下 測(cè)定吸光度。由于草酸的分子量較小，與單抗作用后容易脫落，形成的抗體_抗原-酶標(biāo)抗 體復(fù)合物經(jīng)過徹底洗滌后，有效成分的含量較低，該方法檢測(cè)的靈敏度較低，可靠性較差。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種用于檢測(cè)尿液和血液中 草酸含量的試劑，其特征在于：包括pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液、濃度為1?50umol/L的 Amplex red熒光染料、濃度為0. 1?2U/ml的辣根過氧化物酶HRP和濃度為0. 01?I. OU/ ml的草酸氧化酶。
[0011] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述試劑包括PH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液、濃度為 5?20umol/L的Amplex red突光染料、濃度為0. 5?2U/ml的HRP和濃度為0. 1?0. 5U/ ml的草酸氧化酶。
[0012] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述試劑包括pH值為5. 4的緩沖溶液、濃度為IOumol/ L的Amplex red熒光染料、濃度為lU/ml的HRP和濃度為0. lU/ml的草酸氧化酶。
[0013] 一種用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑盒,包括若干試劑瓶,每個(gè)試劑瓶中 放置有一種或多種試劑，試劑包括pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液、濃度為1?50umol/L的 Amplex red熒光染料、濃度為0. 1?2U/ml的HRP和濃度為0. 01?I. OU/ml的草酸氧化 酶，至少1瓶試劑瓶包括pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液；至少1瓶試劑瓶包括濃度為1? 50umol/L的Amplex red熒光染料；至少1瓶試劑瓶包括濃度為0. 1?2U/ml的HRP ;至少 1瓶試劑瓶包括濃度為〇. 01?I. OU/ml的草酸氧化酶。
[0014] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述試劑盒包括若干試劑瓶，每個(gè)試劑瓶中放置有一 種或多種試劑，試劑包括pH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液、濃度為5?20umol/L的Amplex red熒光染料、濃度為0. 5?2U/ml的HRP和濃度為0. 1?0. 5U/ml的草酸氧化酶；至少1 瓶試劑瓶包括pH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液，至少1瓶試劑瓶包括濃度為5?20umol/L 的Amplex red熒光染料；至少1瓶試劑瓶包括濃度為0. 5?2U/ml的HRP ;至少1瓶試劑 瓶包括濃度為〇. 1?〇. 5U/ml的草酸氧化酶。
[0015] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，包括放置有pH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液的試劑瓶， 房子有濃度為5?20umol/L的Amplex red熒光染料的試劑瓶，放置有濃度為0. 5?2U/ml 的HRP的試劑瓶，放置有濃度為0. 1?0. 5U/ml的草酸氧化酶的試劑瓶。
[0016] 一種用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，包括以下步驟：
[0017] A、向每升pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液中加入1?50umol Amplex red、100? 2000U HRP和10?1000U草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑；
[0018] 向每升pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液中加入1?50umol Amplex red、和100? 2000U HRP，得到草酸背景試劑；
[0019] 向每升pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液中加入IOmmol草酸，得到標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑；
[0020] B、收集、純化待測(cè)樣品，得到純化待測(cè)液；將純化待測(cè)液均分為若干份，向若干份 純化待測(cè)液中依次加入不同體積的標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，直至純化待測(cè)液中草酸的濃度為〇? 100um〇l/L，得到若干份草酸濃度不同標(biāo)定待測(cè)液；
[0021] C、將每份標(biāo)定待測(cè)液平均分配為兩組，將一組均作為測(cè)定組，另一組均作為對(duì)比 組，向測(cè)定組加入草酸測(cè)定試劑并混合均勻，得到熒光待測(cè)組；向?qū)Ρ冉M加入草酸背景試 齊U，混合均勻，得到對(duì)比待測(cè)組后；在溫度為15°C?40°C的條件下，將熒光待測(cè)組和對(duì)比待 測(cè)組孵育20?60min ;
[0022] D、測(cè)定孵育后的熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組的熒光值，根據(jù)熒光值計(jì)算純化待測(cè)液 中草酸的濃度；所述草酸濃度的檢出限為1. 5?3nmol/L。
[0023] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，步驟C包括以下步驟：依次將若干份標(biāo)定待測(cè)液點(diǎn)入 酶標(biāo)板的孔中，每份標(biāo)定待測(cè)液至少點(diǎn)入4個(gè)孔，將每份標(biāo)定待測(cè)液對(duì)應(yīng)的孔平均分為兩 組：測(cè)定組和對(duì)比組，向測(cè)定組中所有的孔內(nèi)均加入50?90ul的草酸測(cè)定試劑，混合均勻， 得到熒光待測(cè)組；向?qū)Ρ冉M中所有的孔內(nèi)均加入與草酸測(cè)定液體積相同的草酸背景試劑， 得到對(duì)比待測(cè)組，將熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組均放置于溫度為15°C?40°C的條件下孵育 20 ?60min〇
[0024] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，步驟D包括以下步驟：在激發(fā)光為538nm、發(fā)射光為 590nm的條件下，測(cè)定孵育后的熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組的熒光值，計(jì)算得到熒光待測(cè)組中 每份標(biāo)定待測(cè)液的平均熒光值，作為草酸測(cè)定樣品平均熒光值；計(jì)算得到對(duì)比待測(cè)組中每 份標(biāo)定待測(cè)液的平均熒光值作為草酸對(duì)比樣品平均熒光值；
[0025] 根據(jù)公式"樣品草酸熒光值=草酸測(cè)定樣品平均熒光值-草酸對(duì)比樣品平均熒光 值"，計(jì)算每份標(biāo)定待測(cè)液對(duì)應(yīng)的草酸熒光值，以熒光值為縱軸，草酸濃度為橫軸，根據(jù)所有 標(biāo)定待測(cè)液的草酸熒光值和對(duì)應(yīng)的草酸濃度作圖，得到待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；標(biāo)準(zhǔn)曲線 中，Y為縱軸的取值，X軸為橫軸的取值，當(dāng)Y = 0時(shí)，|X|為純化待測(cè)液中草酸的濃度。
[0026] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述得到待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線之后，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線 中Y = 0時(shí)，|X|的值之前，還包括以下步驟：計(jì)算待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合優(yōu)度R2值， 根據(jù)R2計(jì)算R，若R >0.98,則為正常，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線中Y = O時(shí)，|X|的值；若R <0.98， 為異常，重復(fù)執(zhí)行步驟B?步驟C。
[0027] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，所述草酸含量的檢出限為2. 5nmol/L。
[0028] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0029] (1)本發(fā)明中的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑、試劑盒及方法，其檢出限 為1. 5?3nmol/L，血草酸濃度回收率為96. 51?102. 38%，尿草酸濃度回收率為96. 95? 103%，與現(xiàn)有技術(shù)中Indaminedye的靈敏度較低，誤差較大，只能檢測(cè)草酸含量較高的樣 品，難以用于血液樣品的檢測(cè)相比，本發(fā)明方法靈敏度較高，誤差較小，能夠同時(shí)應(yīng)用于尿 液和血液樣品的檢測(cè)。
[0030] (2)本發(fā)明中用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，將純化后的樣品直接加入 試劑盒中，通過熒光儀檢測(cè)反應(yīng)后的試劑的熒光，進(jìn)而確定尿液和血液中草酸的濃度，與現(xiàn) 有技術(shù)中通過離子色譜或者香蕉皮丙酮粉漿草酸組織傳感器檢測(cè)，步驟比較繁瑣，檢測(cè)時(shí) 間較長(zhǎng)，成本較高，難以高通量檢測(cè)相比，本發(fā)明方法的步驟比較簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間較短，不僅 成本較低，而且能夠?qū)崿F(xiàn)高通量檢測(cè)，能用于臨床檢測(cè)。
[0031] (3)本發(fā)明的草酸氧化酶在pH值為4. 0?7. 5的條件下均能保持較高的活性，與 辣根過氧化物酶兼容性好。草酸氧化酶在氧氣的作用下將待測(cè)樣品中的草酸氧化為二氧 化碳及過氧化氫，過氧化氫在辣根過氧化物酶的作用下與Amplex Red反應(yīng)，生成最終產(chǎn)物 Resorufin (試鹵靈，9-羥基-3-異吩惡嗪酮或7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），該熒光物質(zhì)與 草酸含量正相關(guān)，從而可以計(jì)算得到樣品中草酸的含量。與現(xiàn)有技術(shù)中大麥草酸氧化酶與 HRP兼容性不好，與現(xiàn)有技術(shù)中由于草酸的分子量較小，與單抗作用后容易脫落，形成的抗 體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物經(jīng)過徹底洗滌后，有效成分的含量較低，檢測(cè)的靈敏度較低，可 靠性較差相比，本發(fā)明的方法不僅靈敏度較高，而且可靠性較好。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0032] 圖1為本發(fā)明中實(shí)施例1的草酸濃度與熒光強(qiáng)度的曲線圖；
[0033] 圖2為本發(fā)明中實(shí)施例2的草酸濃度與熒光強(qiáng)度的曲線圖。

【具體實(shí)施方式】
[0034] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0035] 本發(fā)明實(shí)施例中的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑，包括pH值為4. 0? 7. 5的緩沖溶液、濃度為1?50umol/L(本發(fā)明實(shí)施例中，最佳為lOumol/L)的Amplex red (10-乙?；?3, 7-二羥基吩嗪）熒光染料、濃度為0. 1?2U/ml (本發(fā)明實(shí)施例中，最佳 為lU/ml)的HRP和濃度為0. 01?I. OU/ml (本發(fā)明實(shí)施例中，最佳為0. lU/ml)的草酸氧 化酶，本實(shí)施例中，選擇活性pH為4. 0?7. 5的草酸氧化酶，緩沖溶液選用EDTA (乙二胺四 乙酸）、檸檬酸鈉或EGTA (乙二醇雙（2-氨基乙基醚）四乙酸）。
[0036] 本發(fā)明實(shí)施例中的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑，一般包括pH值為 5. 0?6. 0的緩沖溶液、濃度為5?20umol/L的Amplex red熒光染料、濃度為0. 5?2U/ ml的HRP和濃度為0. 1?0. 5U/ml的草酸氧化酶。
[0037] 本發(fā)明實(shí)施例中的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑盒，包括若干試劑瓶， 每個(gè)試劑瓶中放置有一種或多種試劑，試劑包括pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液、濃度為1? 50umol/L的Amplex red熒光染料、濃度為0. 1?2U/ml的辣根過氧化物酶HRP和濃度為 0. 01?I. OU/ml的草酸氧化酶。至少1瓶試劑瓶包括pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液；至 少1瓶試劑瓶包括濃度為1?50umol/L的Amplex red熒光染料；至少1瓶試劑瓶包括濃 度為0. 1?2U/ml的HRP ;至少1瓶試劑瓶包括濃度為0. 01?I. OU/ml的草酸氧化酶。
[0038] 本發(fā)明實(shí)施例中的試劑盒，包括若干試劑瓶，每個(gè)試劑瓶中放置有一種或多種試 齊[J，試劑包括PH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液、濃度為5?20umol/L的Amplex red熒光染 料、濃度為0. 5?2U/ml的HRP和濃度為0. 1?0. 5U/ml的草酸氧化酶。至少1瓶試劑瓶 包括pH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液，至少1瓶試劑瓶包括濃度為5?20umol/L的Amplex red熒光染料；至少1瓶試劑瓶包括濃度為0. 5?2U/ml的HRP ;至少1瓶試劑瓶包括濃度 為0. 1?0. 5U/ml的草酸氧化酶。
[0039] -種用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，包括以下步驟：
[0040] Sl :配制草酸測(cè)定試劑，向每升pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液中加入1?50umol Amplex red、100?2000U HRP和10?500U草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑。
[0041] 配制草酸背景試劑，向每升pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液中加入1?50umol Amplex red、和100?2000U HRP，得到草酸背景試劑（草酸背景試劑除沒有加入草酸氧化 酶外，其他的成分和濃度均與草酸測(cè)定試劑相同）。
[0042] 配制標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，向每升pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液中加入IOmmol草酸，得 到標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑。
[0043] S2 :收集待測(cè)樣品，判斷樣品是否為血液，若是，轉(zhuǎn)入S201 ;若否，轉(zhuǎn)入S202。
[0044] S201 :采取血液加入含肝素鈉的抗凝試管，將肝素抗凝試管置于冰盒中存放 IOmin以內(nèi)，放入溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為5000g的離心機(jī)中離心5min，棄血細(xì)胞得到血漿，取 0. 5ml血漿，向血漿中加入濃度為2mol/L的鹽酸至血漿的pH值為2. 0?4. 0,得到酸化血 漿。
[0045] 將酸化血漿放入型號(hào)為IOKD的超濾離心管中，在溫度為4°C、轉(zhuǎn)速為5000g的離心 機(jī)中離心30min，取濾液，得到純化待測(cè)液，將純化待測(cè)液放置于溫度為-80°C的條件下存 放，存放時(shí)間在1周以內(nèi)。
[0046] S202 :向尿液中加入濃度為2mol/L的鹽酸酸化至尿液的pH值低于2. 0,得到酸化 尿液，將酸化尿液置于溫度為_80°C的條件下存放,存放時(shí)間在1周以內(nèi)；測(cè)試前將酸化尿 液解凍，按體積份，向1份酸化尿液中加入99份濃度為0. lmol/L、pH值為5. 4的檸檬酸緩 沖液，得到稀釋樣品，將Iml稀釋樣品加入活性炭萃取小柱或者96孔活性炭過濾板后，靜止 5min或5000g離心Imin過濾，得到純化待測(cè)液，將純化待測(cè)液置于溫度為4°C的條件下保 存。
[0047] S3 :將純化待測(cè)液均分為若干份，向若干份純化待測(cè)液中依次加入不同體積的標(biāo) 準(zhǔn)草酸試劑至草酸的濃度為〇?l〇〇um〇l/L，得到若干份標(biāo)定待測(cè)液，若干份標(biāo)定待測(cè)液中 草酸的濃度均不相同。
[0048] S4 :依次將若干份標(biāo)定待測(cè)液點(diǎn)入酶標(biāo)板的孔中，每份標(biāo)定待測(cè)液至少點(diǎn)入4個(gè) 孔，將每份標(biāo)定待測(cè)液對(duì)應(yīng)的孔平均分為兩組：測(cè)定組和對(duì)比組，向測(cè)定組中所有的孔內(nèi)均 加入50?90ul的草酸測(cè)定試劑，混合均勻，得到熒光待測(cè)組；向?qū)Ρ冉M中所有的孔內(nèi)均加 入與草酸測(cè)定液體積相同的草酸背景試劑，得到對(duì)比待測(cè)組，將熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組 均放置于溫度為25°C的條件下孵育20?60min。
[0049] S5 :使用突光酶標(biāo)儀，在激發(fā)光為538nm、發(fā)射光為590nm的條件下，測(cè)定孵育后 的熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組的熒光值，計(jì)算得到熒光待測(cè)組中每份標(biāo)定待測(cè)液的平均熒光 值，作為草酸測(cè)定樣品平均熒光值；計(jì)算得到對(duì)比待測(cè)組中每份標(biāo)定待測(cè)液的平均熒光值 作為草酸對(duì)比樣品平均熒光值。
[0050] S6 :根據(jù)公式"樣品草酸熒光值=草酸測(cè)定樣品平均熒光值-草酸對(duì)比樣品平均 熒光值"，計(jì)算每份標(biāo)定待測(cè)液對(duì)應(yīng)的草酸熒光值，以熒光值為縱軸，草酸濃度為橫軸，根據(jù) 所有標(biāo)定待測(cè)液的草酸熒光值和對(duì)應(yīng)的草酸濃度作圖，得到待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0051] S7 :計(jì)算待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合優(yōu)度R2值，根據(jù)R2計(jì)算R，若R大于0. 98， 則為正常；若R小于〇. 98,為異常，重復(fù)執(zhí)行S2?S6。
[0052] S8 :該測(cè)定的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線上，Y為縱軸的取值，X軸為橫軸的取值。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲 線中，Y = O時(shí)，|X|的值，|X|為純化待測(cè)液中草酸的濃度。
[0053] 發(fā)明實(shí)施例的檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，得到的檢出限為I. 5?3nmol/ U本發(fā)明實(shí)施例中的檢出限為2. 5nmol/L)，血液中草酸濃度回收率為96. 51?102. 38%， 尿液中草酸濃度回收率為96. 95?103%。
[0054] 下面，通過9個(gè)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步的說明
[0055] 實(shí)施例1
[0056] 步驟101 :配制草酸測(cè)定試劑，向每升pH值為5. 4的緩沖溶液中加入IOumol Amplex redUOOOU HRP和100U草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑。
[0057] 配制草酸背景試劑，向每升pH值為5. 4的緩沖溶液中加入IOumol Amplex red、和 1000U HRP，得到草酸背景試劑（草酸背景試劑除沒有加入草酸氧化酶外，其他的成分和濃 度均與草酸測(cè)定試劑相同）。
[0058] 配制標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，向每升pH值為5. 4的緩沖溶液中加入IOmmol草酸，得到標(biāo)準(zhǔn) 草酸試劑。
[0059] 步驟102 :取數(shù)量大于20的正常待測(cè)大鼠血清等比例混合，得到標(biāo)準(zhǔn)血清池。按 照S201的處理方法，得到純化待測(cè)液。
[0060] 步驟103 :取350ul純化待測(cè)液，分為7份，每份50ul，向第一份純化待測(cè)液中加 入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為Oumol/L，得到第一待測(cè)樣Al ;向第二份純化待 測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為lOumol/L，得到第二待測(cè)樣A2 ;第三份 純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為20umol/L，得到第三待測(cè)樣A3 ; 第四份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為30umol/L，得到第四待 測(cè)樣A4 ;第五份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為40umol/L，得到 第五待測(cè)樣A5 ;第六份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為50umol/ L，得到第六待測(cè)樣A6 ;第七份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為 60umol/L，得到第七待測(cè)樣A7。
[0061] 步驟104 :在全黑色不透明的96孔熒光酶標(biāo)板中，選擇相鄰的28個(gè)孔所在的區(qū) 域，作為待測(cè)區(qū)域，將28個(gè)孔均分為7組：Bl、B2、B3、B4、B5、B6、B7,每組均包括4個(gè)孔，將 Al點(diǎn)入Bl的4個(gè)孔中，每個(gè)孔中均點(diǎn)入IOul ;將A2點(diǎn)入B2的4個(gè)孔中，每個(gè)孔中均點(diǎn)入 IOul ;將A3點(diǎn)入B3的4個(gè)孔中，每個(gè)孔中均點(diǎn)入IOul ;將A4點(diǎn)入B4的4個(gè)孔中，每個(gè)孔 中均點(diǎn)入IOul ;將A5點(diǎn)入B5的4個(gè)孔中，每個(gè)孔中均點(diǎn)入IOul ;將A6點(diǎn)入B6的4個(gè)孔 中，每個(gè)孔中均點(diǎn)入IOul ;將A7點(diǎn)入B7的4個(gè)孔中，每個(gè)孔中均點(diǎn)入IOul。
[0062] 步驟105 :從每組已加入待測(cè)樣的4個(gè)孔中的任意2個(gè)孔中，均加入90ul草酸測(cè) 定試劑，混合均勻，將所有加入草酸測(cè)定試劑的孔作為熒光待測(cè)組；向每組已加入待測(cè)樣的 另外兩個(gè)孔中，均加入90ul草酸背景試劑，混合均勻，將所有加入草酸背景試劑的孔作為 對(duì)比待測(cè)組。將熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組放置于溫度為25°C的條件下孵育30min。
[0063] 步驟106 :使用熒光酶標(biāo)儀，在激發(fā)光為538nm、發(fā)射光為590nm的條件下，測(cè)定孵 育后的熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組的熒光值，計(jì)算得到熒光待測(cè)組中每份標(biāo)定待測(cè)液的平均 熒光值，作為草酸測(cè)定樣品平均熒光值；計(jì)算得到對(duì)比待測(cè)組中每份標(biāo)定待測(cè)液的平均熒 光值作為草酸對(duì)比樣品平均熒光值。
[0064] 步驟107 :根據(jù)公式"樣品草酸熒光值=草酸測(cè)定樣品平均熒光值-草酸對(duì)比樣品 平均熒光值"，計(jì)算每份標(biāo)定待測(cè)液對(duì)應(yīng)的草酸熒光值，以熒光值為縱軸，草酸濃度為橫軸， 根據(jù)Al、A2、A3、A4、A5、A6、A7的草酸熒光值和對(duì)應(yīng)的草酸濃度作圖，待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲 線。
[0065] 步驟108 :計(jì)算待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的R值，若該曲線的R值大于0. 98,則為正 常；若R值小于〇. 98,為異常，重復(fù)執(zhí)行步驟102?步驟107。
[0066] 參見圖1所示，本實(shí)施例中，待測(cè)血液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 0. 244x+2. 162，R2 = 0. 999,血液樣品中草酸的濃度為8. 860umol/L。
[0067] 實(shí)施例2
[0068] 尿草酸濃度的測(cè)定
[0069] 步驟201 :配制草酸測(cè)定試劑，向每升pH值為5.4的緩沖溶液中加入IOumol Amplex redUOOOU HRP和100U草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑。
[0070] 配制草酸背景試劑，向每升pH值為5. 4的緩沖溶液中加入IOumol Amplex red、和 1000U HRP，得到草酸背景試劑（草酸背景試劑除沒有加入草酸氧化酶外，其他的成分和濃 度均與草酸測(cè)定試劑相同）。
[0071] 配制標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，向每升pH值為5. 4的緩沖溶液中加入IOmmol草酸，得到標(biāo)準(zhǔn) 草酸試劑。
[0072] 步驟202 :取數(shù)量大于20的正常待測(cè)大鼠尿液等比例混合，得到標(biāo)準(zhǔn)尿液池。按 照S202的處理方法，得到純化待測(cè)液。
[0073] 步驟203 :取400ul純化待測(cè)液，分為8份，每份50ul，向第一份純化待測(cè)液中加 入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為Oumol/L，得到第一待測(cè)樣Cl ;向第二份純化待 測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為lOumol/L，得到第二待測(cè)樣C2 ;第三份 純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為20umol/L，得到第三待測(cè)樣C3 ; 第四份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為30umol/L，得到第四待 測(cè)樣C4 ;第五份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為40umol/L，得到 第五待測(cè)樣C5 ;第六份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為50umol/ L，得到第六待測(cè)樣C6 ;第七份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸濃度為 60umol/L，得到第七待測(cè)樣C7 ;第八份純化待測(cè)液中加入標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑并混合均勻至草酸 濃度為70umol/L，得到第八待測(cè)樣C8。
[0074] 步驟204 :在全黑色不透明的96孔熒光酶標(biāo)板中，選擇8組帶有4個(gè)平行孔的區(qū) 域，作為待測(cè)區(qū)域，在該區(qū)域中，將〇1、02乂3、04、05、06乂7、08分別點(diǎn)入位于不同組的4個(gè) 平行孔中，每個(gè)孔中點(diǎn)入的量均為IOul。
[0075] 步驟205 :從每組已加入待測(cè)樣的4個(gè)孔中的任意2個(gè)孔中，均加入90ul草酸測(cè) 定試劑，混合均勻，將所有加入草酸測(cè)定試劑的孔作為熒光待測(cè)組；向每組已加入待測(cè)樣的 另外兩個(gè)孔中，均加入90ul草酸背景試劑，混合均勻，將所有加入草酸背景試劑的孔作為 對(duì)比待測(cè)組。將熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組放置于溫度為25°C的條件下孵育30min。
[0076] 步驟206 :使用熒光酶標(biāo)儀，在激發(fā)光為538nm、發(fā)射光為590nm的條件下，測(cè)定孵 育后的熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組的熒光值，計(jì)算得到熒光待測(cè)組中每份標(biāo)定待測(cè)液的平均 熒光值，作為草酸測(cè)定樣品平均熒光值；計(jì)算得到對(duì)比待測(cè)組中每份標(biāo)定待測(cè)液的平均熒 光值作為草酸對(duì)比樣品平均熒光值。
[0077] 步驟207:根據(jù)公式"樣品草酸熒光值=草酸測(cè)定樣品平均熒光值-草酸對(duì)比樣品 平均熒光值"，計(jì)算每份標(biāo)定待測(cè)液對(duì)應(yīng)的草酸熒光值，以熒光值為縱軸，草酸濃度為橫軸， 根據(jù)Cl、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8的草酸熒光值和對(duì)應(yīng)的草酸濃度作圖，待測(cè)液的草酸標(biāo) 準(zhǔn)曲線。
[0078] 步驟208 :計(jì)算待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的R值，若該曲線的R值大于0. 98,則為正 常；若R值小于〇. 98,為異常，重復(fù)執(zhí)行步驟102?步驟107。
[0079] 參見圖2所示，本實(shí)施例中，尿液草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 0. 6694X+2. 942，R2 = 0. 997， 尿液樣品中草酸的濃度為440umol/L，本實(shí)施例中尿液樣品中的草酸濃度為440umol/L。
[0080] 實(shí)施例3
[0081] 步驟301 :配制草酸測(cè)定試劑，向每升pH值為4. 0的緩沖溶液中加入lumol Amplex red、100U HRP和IOU草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑。
[0082] 配制草酸背景試劑，向每升pH值為4. 0的緩沖溶液中加入lumol Amplex red、和 100U HRP，得到草酸背景試劑（草酸背景試劑除沒有加入草酸氧化酶外，其他的成分和濃度 均與草酸測(cè)定試劑相同）。
[0083] 配制標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，向每升pH值為4. 0的緩沖溶液中加入IOmmol草酸，得到標(biāo)準(zhǔn) 草酸試劑。
[0084] 步驟302 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟102相同。
[0085] 步驟303 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟103相同。
[0086] 步驟304 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟104相同。
[0087] 步驟305 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟105相同。
[0088] 步驟306 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟106相同。
[0089] 步驟307 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟107相同。
[0090] 步驟308 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟108相同。
[0091] 本實(shí)施例中，血液草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 0. 218x+2. 02, R2 = 0. 999,血液樣品中草酸 的濃度為9. 266umol/L。
[0092] 實(shí)施例4
[0093] 步驟401 :配制草酸測(cè)定試劑，向每升pH值為7. 5的緩沖溶液中加入50umol Amplex red、2000U HRP和1000U草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑。
[0094] 配制草酸背景試劑，向每升pH值為7. 5的緩沖溶液中加入50umol Amplex red、和 2000U HRP，得到草酸背景試劑（草酸背景試劑除沒有加入草酸氧化酶外，其他的成分和濃 度均與草酸測(cè)定試劑相同）。
[0095] 配制標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，向每升pH值為7. 5的緩沖溶液中加入IOmmol草酸，得到標(biāo)準(zhǔn) 草酸試劑。
[0096] 步驟402 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟102相同。
[0097] 步驟403 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟103相同。
[0098] 步驟404 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟104相同。
[0099] 步驟405 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟105相同。
[0100] 步驟406 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟106相同。
[0101] 步驟407 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟107相同。
[0102] 步驟408 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟108相同。
[0103] 本實(shí)施例中，血液草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 0. 229x+2. 217, R2 = 0. 994,血液樣品中草 酸的濃度為9. 68umol/L。
[0104] 實(shí)施例5
[0105] 步驟501 :配制草酸測(cè)定試劑，向每升pH值為5. 0的緩沖溶液中加入5umol Amplex red、500U HRP和100U草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑。
[0106] 配制草酸背景試劑，向每升pH值為5. 0的緩沖溶液中加入5umol Amplex red和 500U HRP，得到草酸背景試劑（草酸背景試劑除沒有加入草酸氧化酶外，其他的成分和濃度 均與草酸測(cè)定試劑相同）。
[0107] 配制標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，向每升pH值為5. 0的緩沖溶液中加入IOmmol草酸，得到標(biāo)準(zhǔn) 草酸試劑。
[0108] 步驟502 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟102相同。
[0109] 步驟503 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟103相同。
[0110] 步驟504 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟104相同。
[0111] 步驟505 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟105相同。
[0112] 步驟506 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟106相同。
[0113] 步驟507 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟107相同。
[0114] 步驟508 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟108相同。
[0115] 本實(shí)施例中，血液草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 0? 216x+2. 012, R2 = 0? 997,血液樣品中草 酸的濃度為9. 315umol/L。
[0116] 實(shí)施例6
[0117] 步驟601 :配制草酸測(cè)定試劑，向每升pH值為6.0的緩沖溶液中加入20umol Amplex red、2000U HRP和500U草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑。
[0118] 配制草酸背景試劑，向每升pH值為6. 0的緩沖溶液中加入20umol Amplex red、和 2000U HRP，得到草酸背景試劑（草酸背景試劑除沒有加入草酸氧化酶外，其他的成分和濃 度均與草酸測(cè)定試劑相同）。
[0119] 配制標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，向每升pH值為6. 0的緩沖溶液中加入IOmmol草酸，得到標(biāo)準(zhǔn) 草酸試劑。
[0120] 步驟602 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟102相同。
[0121] 步驟603 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟103相同。
[0122] 步驟604 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟104相同。
[0123] 步驟605 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟105相同。
[0124] 步驟606 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟106相同。
[0125] 步驟607 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟107相同。
[0126] 步驟608 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟108相同。
[0127] 本實(shí)施例中，血液草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 0. 227x+2. 214, R2 = 0. 995,血液樣品中草 酸的濃度為9. 75umol/L。
[0128] 實(shí)施例7
[0129] 為了評(píng)估實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，本發(fā)明設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估草酸的回收率，以判定本 發(fā)明測(cè)定結(jié)果的可靠性。
[0130] 選擇10只大鼠
[0131] 步驟701 :本步驟與實(shí)施例1中的步驟102相同。
[0132] 步驟702 :向每份純化血清中均加入20umol/L草酸，得到10份對(duì)應(yīng)的待測(cè)血清， 測(cè)定所有待測(cè)血清的熒光吸收值，計(jì)算每份血清的草酸濃度。
[0133] 表1大鼠血草酸濃度回收率測(cè)定
[0134]

【權(quán)利要求】
1. 一種用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑，其特征在于：包括pH值為4. 0?7. 5 的緩沖溶液、濃度為1?50umol/L的Amplex red熒光染料、濃度為0. 1?2U/ml的辣根過 氧化物酶HRP和濃度為0. 01?1. OU/ml的草酸氧化酶。
2. 如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑，其特征在于：所述試 劑包括pH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液、濃度為5?20umol/L的Amplex red熒光染料、濃 度為0. 5?2U/ml的HRP和濃度為0. 1?0. 5U/ml的草酸氧化酶。
3. 如權(quán)利要求2所述的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑，其特征在于：所述試 劑包括pH值為5. 4的緩沖溶液、濃度為10um〇l/L的Amplex red熒光染料、濃度為lU/ml 的HRP和濃度為0. lU/ml的草酸氧化酶。
4. 一種基于權(quán)利要求1所述的試劑制成的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑盒， 其特征在于：所述試劑盒包括若干試劑瓶，每個(gè)試劑瓶中放置有一種或多種試劑，試劑包 括pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液、濃度為1?50umol/L的Amplex red熒光染料、濃度為 0. 1?2U/ml的HRP和濃度為0. 01?1. OU/ml的草酸氧化酶； 至少1瓶試劑瓶包括pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液；至少1瓶試劑瓶包括濃度為1? 50umol/L的Amplex red熒光染料；至少1瓶試劑瓶包括濃度為0. 1?2U/ml的HRP ;至少 1瓶試劑瓶包括濃度為〇. 01?1. 〇U/ml的草酸氧化酶。
5. 如權(quán)利要求4所述的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的試劑盒，其特征在于：所述 試劑包括pH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液、濃度為5?20umol/L的Amplex red熒光染料、 濃度為〇. 5?2U/ml的HRP和濃度為0. 1?0. 5U/ml的草酸氧化酶，至少1瓶試劑瓶包括 pH值為5. 0?6. 0的緩沖溶液；至少1瓶試劑瓶包括濃度為5?20umol/L的Amplex red 熒光染料；至少1瓶試劑瓶包括濃度為〇. 5?2U/ml的HRP ;至少1瓶試劑瓶包括濃度為 0. 1?0. 5U/ml的草酸氧化酶。
6. -種用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，包括以下步驟： 八、向每升口11值為4.0?7.5的緩沖溶液中加入1?50111]1〇1六115)16叉代(1、100?200011 HRP和10?1000U草酸氧化酶，得到草酸測(cè)定試劑； 向每升pH值為4.0?7. 5的緩沖溶液中加入1?50umol Amplex red、和100?2000U HRP，得到草酸背景試劑； 向每升pH值為4. 0?7. 5的緩沖溶液中加入lOmmol草酸，得到標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑； B、 收集、純化待測(cè)樣品，得到純化待測(cè)液；將純化待測(cè)液均分為若干份，向若干份純 化待測(cè)液中依次加入不同體積的標(biāo)準(zhǔn)草酸試劑，直至純化待測(cè)液中草酸的濃度為〇? 100um〇l/L，得到若干份草酸濃度不同標(biāo)定待測(cè)液； C、 將每份標(biāo)定待測(cè)液平均分配為兩組，將一組均作為測(cè)定組，另一組均作為對(duì)比組，向 測(cè)定組加入草酸測(cè)定試劑并混合均勻，得到熒光待測(cè)組；向?qū)Ρ冉M加入草酸背景試劑，混合 均勻，得到對(duì)比待測(cè)組后；在溫度為15°C?40°C的條件下，將熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組孵 育 20 ?60min ; D、 測(cè)定孵育后的熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組的熒光值，根據(jù)熒光值計(jì)算純化待測(cè)液中草 酸的濃度；所述草酸濃度的檢出限為1. 5?3nmol/L。
7. 如權(quán)利要求6所述的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，其特征在于，步驟C包 括以下步驟：依次將若干份標(biāo)定待測(cè)液點(diǎn)入酶標(biāo)板的孔中，每份標(biāo)定待測(cè)液至少點(diǎn)入4個(gè) 孔，將每份標(biāo)定待測(cè)液對(duì)應(yīng)的孔平均分為兩組：測(cè)定組和對(duì)比組，向測(cè)定組中所有的孔內(nèi)均 加入50?90ul的草酸測(cè)定試劑，混合均勻，得到熒光待測(cè)組；向?qū)Ρ冉M中所有的孔內(nèi)均加 入與草酸測(cè)定液體積相同的草酸背景試劑，得到對(duì)比待測(cè)組，將熒光待測(cè)組和對(duì)比待測(cè)組 均放置于溫度為15°C?40°C的條件下孵育20?60min。
8. 如權(quán)利要求6所述的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，其特征在于，步驟D包 括以下步驟：在激發(fā)光為538nm、發(fā)射光為590nm的條件下，測(cè)定孵育后的熒光待測(cè)組和對(duì) 比待測(cè)組的熒光值，計(jì)算得到熒光待測(cè)組中每份標(biāo)定待測(cè)液的平均熒光值，作為草酸測(cè)定 樣品平均熒光值；計(jì)算得到對(duì)比待測(cè)組中每份標(biāo)定待測(cè)液的平均熒光值作為草酸對(duì)比樣品 平均熒光值； 根據(jù)公式"樣品草酸熒光值=草酸測(cè)定樣品平均熒光值-草酸對(duì)比樣品平均熒光值"， 計(jì)算每份標(biāo)定待測(cè)液對(duì)應(yīng)的草酸熒光值，以熒光值為縱軸，草酸濃度為橫軸，根據(jù)所有標(biāo)定 待測(cè)液的草酸熒光值和對(duì)應(yīng)的草酸濃度作圖，得到待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；標(biāo)準(zhǔn)曲線中，Y 為縱軸的取值，X軸為橫軸的取值，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線中Y = 0時(shí)，|X|的值，|X|為純化待測(cè)液 中草酸的濃度。
9. 如權(quán)利要求8所述的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，其特征在于：所述得 到待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線之后，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線中Y = 0時(shí)，|X|的值之前，還包括以下步驟： 計(jì)算待測(cè)液的草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合優(yōu)度R2值，根據(jù)R2計(jì)算R，若R > 〇. 98,則為正常，計(jì)算 標(biāo)準(zhǔn)曲線中Y = 0時(shí)，|X|的值；若R <0.98,為異常，重復(fù)執(zhí)行步驟B?步驟C。
10. 如權(quán)利要求6至9中任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)尿液和血液中草酸含量的方法，其特征 在于：所述草酸含量的檢出限為2. 5nmol/L。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104406949SQ201410719849
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年12月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月2日
【發(fā)明者】劉海峰, 李娜, 姚琦, 周健文, 李春艷, 賀曉霞 申請(qǐng)人:武漢瑞恒達(dá)生物工程有限公司