一種afp檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒及其制備方法和用途。本發(fā)明提供一種定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含甲胎蛋白AFP抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的甲胎蛋白AFP抗體采用熒光微球標(biāo)記。本發(fā)明所提供的定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒首次將甲胎蛋白AFP通過熒光微球免疫層析技術(shù)進(jìn)行檢測，兼具靈敏性和特異性，具有操作快速簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】-種AFP檢測試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種甲胎蛋白檢測試劑盒及其制備方法和 用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 甲胎蛋白（alpha fetoprotein, AFP)是胎兒發(fā)育早期由肝臟和卵黃囊合成的一種 糖蛋白，隨著胎兒發(fā)育和出生后年齡的增長，血液中AFP水平逐漸下降，成人血清AFP濃度 的參考區(qū)間為1_20 iig/L。AFP是肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC)的敏感特 異的標(biāo)志物，血清AFP濃度超過400 ii g/L持續(xù)4周或者200-400 ii g/L持續(xù)5周以上，高度 懷疑肝細(xì)胞肝癌；同時血清AFP水平還有可用肝癌的大小判斷、肝癌的療效評估和預(yù)后判 斷。但據(jù)統(tǒng)計，大約20% -30%的肝細(xì)胞肝癌患者血清AFP水平不高。
[0003] 目前已知的甲胎蛋白（AFP)檢測方法還存在較多缺陷，如操作較為繁瑣，耗時較 長，不適宜臨床上使用。目前，我國市場上的甲胎蛋白（AFP)檢測試劑盒準(zhǔn)確度、靈敏度、重 復(fù)性仍然較差。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種快速測定血清或血漿 中甲胎蛋白AFP含量的試劑盒，用于解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明提供一種快速測定血清或血漿中甲胎蛋 白AFP含量的試劑盒，包括試紙卡，所述試紙卡包括底板、及位于底板表面的從加樣端開始 依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上包含甲胎蛋白AFP單克 隆抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的甲胎蛋白AFP單克 隆抗體采用熒光微球標(biāo)記。
[0006] 優(yōu)選的，所述金標(biāo)墊上的甲胎蛋白AFP單克隆抗體采用ISOnm熒光微球標(biāo)記， EX(nm) = 650/Em(nm) = 670,具有信號受背景干擾小，檢測靈敏度高，結(jié)果重復(fù)性好的優(yōu) 點(diǎn)。
[0007] 優(yōu)選的，所述底板為PVC底板。
[0008] 優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜上，檢測線位于離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣 端較遠(yuǎn)一側(cè)。
[0009] 優(yōu)選的，所述檢測線上包被有甲胎蛋白AFP單克隆抗體。所述金標(biāo)墊上的甲胎蛋 白AFP單克隆抗體與檢測線上的甲胎蛋白AFP單克隆抗體可以是相同的抗體，也可以是不 同的抗體。
[0010] 優(yōu)選的，質(zhì)控線上包被羊抗鼠抗體。
[0011] 優(yōu)選的，所述樣品墊采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、TriS-HCl緩沖 液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液 的濃度為20-200mM。
[0012] 優(yōu)選的，本發(fā)明所述的金標(biāo)墊還經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理時所使用的預(yù)處理緩沖液選 自甘氨酸緩沖液、TriS-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為 5_50mM〇
[0013] 優(yōu)選的，所述緩沖液還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一種，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10?50g/L。
[0014] 優(yōu)選的，所述緩沖溶液還包括表面活性劑，所述表面活性劑選自S-19TWEEN 20、 S-20TWEEN 80、S-13TRIT0N X-45、S-14TRIT0N X-100、S-15TRIT0N X305 中的任意一種或多 種的組合，所述表面活性劑的濃度為10?50g/L。
[0015] 優(yōu)選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發(fā)明所述的金標(biāo)墊在 預(yù)處理時所使用的預(yù)處理緩沖液包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉 和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3. 5 - 7. 5g/L， 緩沖液的pH值為7. 2 - 7.6。
[0016] 優(yōu)選的，各組分在緩沖液中的濃度為：
[0017]

【權(quán)利要求】
1. 一種定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，包括試紙卡，試紙卡包括底板、及位于底 板表面的從加樣端開始依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述金標(biāo)墊上 包含甲胎蛋白AFP抗體，所述硝酸纖維素膜上包被有檢測線和質(zhì)控線，所述金標(biāo)墊上的甲 胎蛋白AFP抗體采用熒光微球標(biāo)記。
2. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，其特征在于，所述硝酸纖 維素膜上，檢測線位于離加樣端較近一側(cè)，質(zhì)控線位于離加樣端較遠(yuǎn)一側(cè)。
3. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測線 上包被有甲胎蛋白AFP抗體。
4. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，其特征在于，質(zhì)控線上包 被羊抗鼠抗體。
5. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，其特征在于，所述樣品墊 采用緩沖液處理，所述緩沖液選自PBS緩沖液、Tris-HCl緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩 沖液和檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合，緩沖液的濃度為20-200mM。
6. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，其特征在于，所述金標(biāo)墊 采用緩沖液處理，所述緩沖液選自甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、硼酸鹽緩沖液的一種或 多種的組合，緩沖液的濃度為5-50mM。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，其特征在于，所述緩沖 液中還包括反應(yīng)增強(qiáng)劑，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑選自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的 任意一種，所述反應(yīng)增強(qiáng)劑的濃度為10?50g/L。
8. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，其特征在于，還包括卡 殼，所述卡殼包括背卡和上蓋，所述背卡設(shè)有試紙卡卡槽，所述試紙卡嵌于所述試紙卡卡槽 內(nèi)，所述上蓋設(shè)有測試窗和加樣孔，所述測試窗的位置與所述檢測線和質(zhì)控線的位置相配 合，所述加樣孔的位置與所述樣品墊的位置相配合。
9. 如權(quán)利要求1所述的定量檢測脂甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測 試劑盒用于定量檢測血清或血漿中甲胎蛋白AFP的含量。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1?9任一權(quán)利要求所述的定量檢測脂甲胎蛋白AFP的檢測試劑盒 的制備方法，具體包括如下步驟： 1) 用熒光微球標(biāo)記的甲胎蛋白AFP抗體溶液噴涂經(jīng)預(yù)處理的金標(biāo)墊，制得包含甲胎蛋 白AFP抗體的金標(biāo)墊； 2) 在硝酸纖維素膜的檢測線和質(zhì)控線上分別噴涂甲胎蛋白AFP抗體及羊抗鼠抗體，制 得包被后的硝酸纖維素膜； 3) 將樣品墊、步驟1)制備金標(biāo)墊、步驟2)制備的硝酸纖維素膜、吸水墊依次粘貼在底 板上，切裁制得檢測試紙卡；最后將檢測試紙卡裝入卡殼制得檢測試劑盒。
【文檔編號】G01N33/68GK104360085SQ201410737604
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】吉權(quán) 申請人:重慶乾德生物技術(shù)有限公司