一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜及其建立方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜及其建立方法，屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】。包括對照品、供試品溶液的制備、色譜條件的選擇和指紋圖譜的建立。通過對13批菟絲子配方顆粒指紋圖譜的對比，確定了5個共有特征峰，以金絲桃苷峰為S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間，其相對保留時間應(yīng)在規(guī)定值的±5%之內(nèi)。規(guī)定值為：1號峰0.24、2號峰0.82、S峰1.00、3號峰1.11、4號峰1.63。 本發(fā)明重復(fù)性好，準(zhǔn)確可靠，所建立的HPLC指紋圖譜方法可有效地控制菟絲子配方顆粒的質(zhì)量。
【專利說明】一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜及其建立方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥材的質(zhì)量控制方法，具體涉及一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜 及其建立方法，屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 中藥配方顆粒是以符合炮制規(guī)范的優(yōu)質(zhì)中藥飲片為原料，采用現(xiàn)代高新技術(shù)提煉 而成的單味濃縮顆粒，其性味、歸經(jīng)、功效與原生藥基本一致。中藥配方顆粒是中藥劑型改 革的一部分，代替?zhèn)鹘y(tǒng)飲片使用，要求"源于飲片，高于飲片"。在臨床使用中實現(xiàn)了用藥的 "高效安全、穩(wěn)定可控、方便衛(wèi)生"。由于中藥配方顆粒具有小劑型、療效好、見效快，服用、攜 帶、貯藏方便等特點，非常適應(yīng)現(xiàn)代社會包括國際社會對天然藥物的需求和現(xiàn)代社會緊張 生活的需要。
[0003] 寬絲子為旋花科植物寬絲子CuscutachinensisLam.的干燥成熟種子，始載于 《神農(nóng)本草經(jīng)》，并被列為上品，味甘、辛，性平，功效補益肝腎，固精縮尿，安胎，明目，止 瀉，是中醫(yī)補腎壯陽的要藥?，F(xiàn)代藥理研究表明其具有增強生殖系統(tǒng)作用，提高心血管系 統(tǒng)功能，提高免疫力、抗氧化、抗衰老、抗癌、保肝明目等作用，用于肝腎不足，腰膝酸軟，陽 痿遺精，遺尿尿頻，腎虛胎漏，胎動不安，目昏耳鳴，脾腎虛瀉。菟絲子主要含有黃酮類、有機 酸、甾醇類、多糖、生物堿類、微量元素和氨基酸等多種成分，其中黃酮類成分為其主要有效 成分，黃酮類化合物包括金絲桃苷、紫云英苷、山奈酚、槲皮素、槲皮素-3-0-3-D-半乳糖 (2- 1)P-D-芹糖苷等。由于近年來，菟絲子在制藥及臨床需要量增大，而其產(chǎn)量又低，產(chǎn) 生了供求失衡現(xiàn)象，價格走高，所以菟絲子出現(xiàn)了嚴(yán)重的摻假現(xiàn)象，混淆品，偽品層出不窮， 是各個藥材市場上抽檢不合格率最高的品種之一。因此，急需一種標(biāo)準(zhǔn)對菟絲子藥材及菟 絲子制劑的質(zhì)量進行判定。
[0004] 目前，我國質(zhì)量控制體系對中藥及其制劑的質(zhì)量控制內(nèi)容主要包括外觀鑒別、性 狀檢查以及有效成分的含量測定。中藥配方顆粒已失去了藥材原本的外觀性狀，其質(zhì)量控 制很大程度依靠有效成分的檢測。而在有效成分的含量測定方面，所測成分大多是1-2個 指標(biāo)成分，這與中藥所含化學(xué)成分復(fù)雜，發(fā)揮藥效時多成分、多靶點協(xié)同作用的特性不甚吻 合。此外，在各品種的性狀、理化鑒別以及含量測定方面，存在普適性內(nèi)容，即有效成分的專 屬性不強，例如僅僅鑒定綠原酸不能區(qū)分金銀花、山銀花或菊花，因此較難全面科學(xué)的評價 中藥材及其制劑的質(zhì)量。特征指紋圖譜作為一種綜合的、可量化的鑒別模式，中藥材及其制 劑的真實性和質(zhì)量的一致性以及穩(wěn)定性均可有效地加以檢測和控制。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是為菟絲子配方顆粒的質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供一個方法，建立菟 絲子配方顆粒指紋圖譜的方法，并由此方法得到菟絲子配方顆粒的指紋圖譜。
[0006] 為實現(xiàn)上述發(fā)明的目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下： 一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立方法，采用高效液相色譜法，包括如下步驟： (1) 對照品溶液的制備：精確稱定金絲桃苷對照品，加甲醇配制成每lml含金絲桃苷 40~55yg的溶液，作為對照品溶液； (2) 供試品溶液的制備：精確稱定菟絲子配方顆粒粉末0. 2~0. 8g，置錐形瓶中，加體積 濃度為80%~100%的甲醇溶液15~35ml，超聲處理15~60min，放冷，用80%~100%的甲醇補足 減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過〇. 1~〇. 5ym微孔濾膜，即得供試品溶液； (3 )測定：將步驟（1)所得的對照品溶液和步驟（2 )所得的供試品溶液分別進行高效液 相色譜分析，得到HPLC指紋圖譜； (4)指紋圖譜建立：通過比較不同菟絲子配方顆粒的HPLC特征圖譜，確定菟絲子配方 顆粒的共有特征峰。
[0007] 所述的一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立方法，供試品溶液的制備中所述的超 聲處理為功率100~300W，頻率20~30KHz。
[0008] 所述的一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立方法，高效液相色譜法采用的儀器為 Waters2695高效液相色譜系統(tǒng)，EmpowerPro色譜工作站，Waters2489紫外檢測器。 [0009] 所述的一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立方法，步驟（3)所述的色譜條件 是色譜柱：Hypersil:250_X4. 6_，5ym柱；流動相：A乙腈-B水，梯度洗脫：0~8min，A為 10%~13% ;8~38min，A為 13% ;38?48min，A為 13%~17% ;48?60min，A為 17%~20% ; 60~65min，A為 20%~10% ;檢測波長：300~360nm;流速 0? 5~1. 5ml/min;柱溫：15~35°C;進樣 量 20~30M<1。
[0010] 一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立：取13批菟絲子配方顆粒(廣東一方制藥有 限公司，批號：0701045、0711137、0809123、0807116、0811114、0812561、0903125、0907077、 0911086、1003128、1003342、1006124、1011116)的供試品溶液，進樣，記錄 65min的色譜圖， 以金絲桃苷對照品為參照峰，結(jié)果13批配方顆粒有5個共有峰，分別在7. 6, 26. 2, 32. 4， 35. 6，51. 8min出峰，見圖2，共有峰的相對峰面積、相對保留時間均具有較好的重復(fù)性，見 表一、表二；5個共有峰的平均相對保留時間依次為：0? 238、0. 815、1. 000、1. 106、L627， RSD均小于2. 0%，這5個共有峰出峰時間較為穩(wěn)定，可作為菟絲子配方顆粒的特征峰。
[0011] 特征圖譜的色譜峰的指認(rèn)： 精密吸取供試品溶液及金絲桃苷對照品溶液各25ill，注入高效液相色譜儀，在 32. 33min處的色譜峰為金絲桃苷的色譜峰，金絲桃苷的峰分布正態(tài)，達到基線分離，且峰面 積占總峰面積的25?56%，故選擇金絲桃苷的峰作為參考峰，標(biāo)記為峰S，其他特征峰標(biāo)記 為峰1?4,見圖1。
[0012] 重復(fù)性試驗 取同一批樣品（1003342)共6份，按上述方法分別制備成供試品溶液，進樣測定，以金 絲桃苷色譜峰為參照峰（S)，計算1?5號共有峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD值， 其中各特征峰的相對保留時間的RSD均小于0. 6%，特征峰的相對峰面積RSD均小于3. 0%， 表明方法重復(fù)性良好。
[0013] 精密度試驗 取重復(fù)性試驗中同一供試品溶液，連續(xù)進樣6次，以金絲桃苷色譜峰為參照峰（S)，計 算1?5號共有峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD值，其中各特征峰的相對保留時間 的RSD均小于0. 6%，特征峰的相對峰面積RSD均小于1. 0%，表明儀器精密度良好。
[0014] 穩(wěn)定性試驗 取重復(fù)性試驗中同一供試品溶液，分別于0, 2,4,8,12, 24h進樣測定，以金絲桃苷色譜 峰為參照峰（S)，計算1?5號共有峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD值，其中所相對 應(yīng)的色譜峰相對保留時間均小于2. 0%，特征峰的相對峰面積的RSD均小于3. 0%，表明供試 品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。
[0015] 表1 13批菟絲子配方顆粒相對保留時間

【權(quán)利要求】
1. 一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜，其特征在于：菟絲子配方顆粒的特征圖譜有5個特 征峰，以金絲桃苷峰為S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間，其相對保留時間應(yīng)在規(guī) 定值的±5%之內(nèi)，規(guī)定值為：1號峰0.24、2號峰0.82、5峰1.00、3號峰1.11、4號峰1.63。
2. -種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于：采用高效液相色譜法，包 括如下步驟： (1) 對照品溶液的制備：精確稱定金絲桃苷對照品，加甲醇配制成每lml含金絲桃苷 40~55 y g的溶液，作為對照品溶液； (2) 供試品溶液的制備：精確稱定菟絲子配方顆粒粉末0. 2~0. 8g，置錐形瓶中，加體積 濃度為80%~100%的甲醇溶液15~35ml，超聲處理15~60min，放冷，用80%~100%的甲醇補足 減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用〇. l~〇. 5 y m微孔濾膜，濾過，即得供試品溶液； (3 )測定：將步驟（1)所得的對照品溶液和步驟（2 )所得的供試品溶液分別進行高效液 相色譜分析，得到HPLC指紋圖譜； (4)指紋圖譜建立：通過比較不同菟絲子配方顆粒的HPLC特征圖譜，確定菟絲子配方 顆粒的共有特征峰。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于：供 試品溶液的制備中所述的超聲處理為功率l〇〇~300W，頻率20~30KHz。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于：高 效液相色譜法采用的儀器為Waters 2695高效液相色譜系統(tǒng)，Empower Pro色譜工作站， Waters 2489紫外檢測器。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種菟絲子配方顆粒指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步 驟（3)所述的色譜條件是色譜柱：Hypersil :250mmX4. 6mm，5 y m柱；流動相：A乙腈-B水， 梯度洗脫：〇~8min，A 為 10%~13% ;8~38min，A 為 13% ;38~48min，A 為 13%~17% ;48~60min， A 為 17%~20% ;60~65min，A 為 20%~10% ;檢測波長：300~360nm ;流速0? 5~1. 5ml/min ;柱溫： 15~35°C ;進樣量 20~30W。
【文檔編號】G01N30/02GK104458954SQ201410742982
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月9日
【發(fā)明者】譚登平, 程學(xué)仁, 謝菲, 王閩予, 杜蘭哲, 朱德全, 李慧 申請人:廣東一方制藥有限公司