茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方法
【專利摘要】茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方法，屬于化學(xué)分析【技術(shù)領(lǐng)域】。其包括以下步驟：1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制；2）試料制備；3）提??；4）色譜分析；5）定性；6）定量。本發(fā)明在茶葉中外源添加的12種水溶性合成色素通過(guò)堿性試劑超聲輔助提取，經(jīng)調(diào)節(jié)PH結(jié)合選擇性波長(zhǎng)，進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法定性、定量。該方法快速、簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)，適用于日常檢測(cè)。
【專利說(shuō)明】茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方 法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)分析【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及茶葉中外源添加12種水溶性合成色素 的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 按GB2760-2011《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》，茶葉是不許添加任何外來(lái)添加劑，包括 任何色素，但是茶葉中的外源添加合成色素雖然是非常規(guī)性質(zhì)量安全問(wèn)題，在違法成本相 對(duì)低廉的現(xiàn)實(shí)情況下，違法添加以達(dá)到改善外觀等質(zhì)量指標(biāo)的茶葉安全事件但還是時(shí)有發(fā) 生。如，2004年上海的一些茶葉店和大型茶葉批發(fā)市場(chǎng)發(fā)現(xiàn)了用色素染出來(lái)的浙江麗水碧 螺春。2005年質(zhì)檢總局就查出了不法分子用工業(yè)顏料炒出"鉛鉻綠茶"。2007年天臺(tái)質(zhì)量 技術(shù)監(jiān)督局查處了 200kg添加色素茶葉。2010年青島沂南廢茶葉摻上香精和色素做成飯店 賓館免費(fèi)茶。2012年寶應(yīng)成茶加色素變"現(xiàn)炒現(xiàn)賣正宗綠楊春新茶"。2012年重慶的紅茶 出口市場(chǎng)因在茶葉發(fā)酵過(guò)程中加入非茶葉原料和大量色素已陷入絕境。
[0003] 合成色素的檢測(cè)目前國(guó)內(nèi)外合成色素檢測(cè)方法主要有聚酰胺吸附法、液液分配 法、羊毛染色法、基體固相分離法、固相萃取法、濁點(diǎn)萃取法等，相對(duì)應(yīng)結(jié)合分光光度法、毛 細(xì)管電泳法、極譜法、微柱法、高效液相色譜法和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等檢測(cè)方法。 如，1999年丁暉利用HPLC測(cè)定果味型碳酸飲料中日落黃、檸檬黃；2006年JochenK等采用 HPLC法測(cè)定魚子和魚子醬中的色素；2007年KaterinaSM等采用HPLC-DAD檢測(cè)食品中13 種水溶性色素；2008年，YoshiokaN使用短柱測(cè)定了飲料和糖果中的40種人工合成色素； 2009年，邢文靜等用HPLC測(cè)定了橙汁中亮藍(lán)等5種色素；2010年顧慧瑩等用UPLC測(cè)定飲 料中胭脂紅等6種色素；2011年，ConstantinosK等用HPLC測(cè)定調(diào)味品中對(duì)位紅和蘇丹紅 I?IV等5中染料；2011年李瑾瑾等結(jié)合HPLC-VWD及HPLC-MS/MS分別測(cè)定了螺螄和飲料 中的14和12種色素；2011年陳岑等用HPLC-T0F-MS測(cè)定了硬糖、飲料中36種色素和調(diào)味 料中19種色素；2012年龍巍然等用毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定飲料中酸性紅92、亮黑等色素； 2013年SchummerC用UPLC-MS/MS法測(cè)定調(diào)料和含辣椒制品中蘇丹紅I~IV;2013年Guo J用離子液體分散液液微萃取測(cè)定軟飲、糖果、果膠等中的亮藍(lán)；2014年QiP用HPLC-FLD 測(cè)定含辣椒制品中的羅丹明B;2014年KhodadoustS用紫外可見(jiàn)光光譜法測(cè)定水中甲基 紅。
[0004] 應(yīng)該說(shuō)食品中合成色素的檢測(cè)方法研究不少，但是一是食品基質(zhì)方面，多涉及硬 糖、飲料等基質(zhì)相對(duì)簡(jiǎn)單的食品，對(duì)于較為復(fù)雜基質(zhì)的食品也集中于肉類、奶釀等1?脂肪、 高蛋白質(zhì)的種類，作為多年生木本植物及后續(xù)加工過(guò)程繁復(fù)的茶葉的相關(guān)研究則缺失，而 且因其茶葉樣品基質(zhì)背景異常豐富，高天然色素類、高小分子基質(zhì)干擾又使得茶葉中外源 添加合成色素的檢測(cè)方法不可能照搬飲料、糖果或者肉類、奶酪等的檢測(cè)方法。另外，本發(fā) 明涉及的檸檬黃、莧菜紅等水溶性合成色素在ESI源下離子化不理想，因此近幾年來(lái)主要 依靠LC-MS等儀器技術(shù)進(jìn)行幾十種合成色素檢測(cè)的已有研究中，也未涉及本
【發(fā)明內(nèi)容】
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供茶葉中外源添加12種水 溶性合成色素的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方法的技術(shù)方案。
[0006] 所述的茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方法，其特征在于 包括以下步驟： 1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 單一色素標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取水溶性合成色素標(biāo)準(zhǔn)品，用50%甲醇稀釋，逐一配制成色 素1000mg/L的單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液，備用； 色素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：根據(jù)各色素在儀器上的響應(yīng)值，逐一吸取單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液分別注 入同一容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用，使用前用50%甲醇稀 釋成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液； 2) 試料制備：取不少于IOOg茶葉樣品，放入粉碎機(jī)中粉碎，制成待測(cè)樣，放入分裝容器 中備用； 3) 提?。簻?zhǔn)確稱取I.OOg茶葉放人15mL具塞管中，加入IOmL堿性試劑，在振蕩器中上 快速振蕩30s，后用超聲輔助提取20min，取上清液ImL加入20uL乙酸，過(guò)0. 45umPTFE濾膜 后再進(jìn)行測(cè)定； 4) 色譜分析：由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取l〇yL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液（或樣品）注入色譜儀中，以保 留時(shí)間定性，以樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量； 色譜儀的色譜條件：色譜柱為C18液相色譜柱，5umX4. 6umX250mm;色譜柱溫度40°C; 流速為lmL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)400nm、500nm、610nm;A液為20mmol乙酸銨水溶液，B液為乙腈， 初始 0%A;30min97%A;45minO%A; 5) 定性：樣品中未知組分的保留時(shí)間分別與標(biāo)樣在同一色譜柱上的保留時(shí)間相比較， 相差在±0.Imin內(nèi)，且在不同波長(zhǎng)下的響應(yīng)值呈同步相關(guān)的可認(rèn)定為該目標(biāo)物； 6) 定量：樣品中被測(cè)色素量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，數(shù)值以毫克每千克表示，按公式（1)計(jì) 算·

【權(quán)利要求】
1. 茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方法，其特征在于包括以下 步驟： 1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 單一色素標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取水溶性合成色素標(biāo)準(zhǔn)品，用50%甲醇稀釋，逐一配制成色 素1000mg/L的單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液，備用； 色素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：根據(jù)各色素在儀器上的響應(yīng)值，逐一吸取單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液分別注 入同一容量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用，使用前用50%甲醇稀 釋成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液； 2) 試料制備：取不少于100g茶葉樣品，放入粉碎機(jī)中粉碎，制成待測(cè)樣，放入分裝容器 中備用； 3) 提取：準(zhǔn)確稱取1. 00g茶葉放人15mL具塞管中，加入10mL堿性試劑，在振蕩器中上 快速振蕩30s，后用超聲輔助提取20min，取上清液lmL加入20uL乙酸，過(guò)0. 45umPTFE濾膜 后再進(jìn)行測(cè)定； 4) 色譜分析：由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取10UL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液（或樣品）注入色譜儀中，以保 留時(shí)間定性，以樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比較定量； 色譜儀的色譜條件：色譜柱為C18液相色譜柱，5umX4. 6umX250mm;色譜柱溫度40°C; 流速為lmL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)400nm、500nm、610nm;A液為20mmol乙酸銨水溶液，B液為乙腈， 初始 0%A;30min97%A;45minO%A; 5) 定性：樣品中未知組分的保留時(shí)間分別與標(biāo)樣在同一色譜柱上的保留時(shí)間相比較， 相差在±0.lmin內(nèi)，且在不同波長(zhǎng)下的響應(yīng)值呈同步相關(guān)的可認(rèn)定為該目標(biāo)物； 6) 定量：樣品中被測(cè)色素量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)《計(jì)，數(shù)值以毫克每千克表示，按公式（1)計(jì) 算：
式中： W-標(biāo)準(zhǔn)溶液中色素的含量，單位為毫克/升； A-樣品中被測(cè)色素的峰面積； As-色素標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)色素的峰面積； Vj一提取溶劑總體積； v2-吸取出用于檢測(cè)的提取溶液的體積； V3 一樣品定容體積；m-樣品的質(zhì)量； 計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)。
2. 如權(quán)利要求1所述的茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方法， 其特征在于所述的步驟1)中水溶性合成色素為檸檬黃、新紅、莧菜紅、食用綠、胭脂紅、日落 黃、偶氮玉紅、亮藍(lán)、固綠、赤蘚紅、偶氮胭脂紅、甲基橙。
3. 如權(quán)利要求1所述的茶葉中外源添加12種水溶性合成色素的快速簡(jiǎn)便檢測(cè)方法， 其特征在于所述的步驟2)中堿性試劑為甲醇和濃度為10%氨水的混合液，其中甲醇與10% 氨水的體積比為7 :3。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104483429SQ201410749917
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月10日
【發(fā)明者】蔣迎, 劉新, 魯成銀, 汪慶華, 陳紅平 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所