中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種治療白癜風(fēng)的中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，包括以下步驟：(一)中藥八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂、黃芪和丹參的鑒別方法：(1)中藥八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂顯微鑒別；(2)中藥八味補(bǔ)白片中黃芪的薄層鑒別；(3)中藥八味補(bǔ)白片中丹參的薄層鑒別；(二)中藥八味補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的高效液相色譜撿測(cè)，含量以補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量計(jì)算，不低于0.30mg。本發(fā)明方法穩(wěn)定可靠，專一性和科學(xué)性強(qiáng)，可以有效監(jiān)測(cè)中藥八味補(bǔ)白片的質(zhì)量，有較大的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥復(fù)方制劑，具體涉及治療白癜風(fēng)的中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 白癜風(fēng)是一種后天性色素減退性皮膚病，最新研究證實(shí)，由于白癜風(fēng)患者紫外線 防御能力弱，皮膚癌的發(fā)病率比正常人要高很多，同時(shí)還可誘發(fā)多種疾病，中醫(yī)認(rèn)為，白癜 風(fēng)主要因先天稟賦不足，驚恐傷腎，郁怒傷肝，日久耗傷陰血，使肝腎精血虧虛，復(fù)外感風(fēng) 邪，阻滯經(jīng)脈，使局部氣血瘀滯，致腠理氣血失和，肌膚不得濡養(yǎng)所致?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)有關(guān)白癜風(fēng) 病因及發(fā)病機(jī)制學(xué)說眾多，有自身免疫學(xué)說、黑素細(xì)胞自身破壞學(xué)說、神經(jīng)化學(xué)因子學(xué)說、 黑素細(xì)胞生長(zhǎng)因子缺乏學(xué)說、遺傳因素等，其中，黑素細(xì)胞生成缺乏和自身破壞學(xué)說占主導(dǎo) 地位。
[0003]中藥八味補(bǔ)白片方由黃芪、蒺藜、川芎、當(dāng)歸、丹參、補(bǔ)骨脂、紅花、香附8味中藥材 組成。其中當(dāng)歸、黃芪柔肝養(yǎng)血，健脾益氣，補(bǔ)后天之本以充氣血生化之源；補(bǔ)骨脂益腎填 精，"乙癸同源，肝腎同治"；川；、紅花、丹參行氣活血；白蒺藜、香附疏風(fēng)祛邪以通絡(luò)，共奏 調(diào)和氣血，活血化瘀之效。諸藥合用可以調(diào)和氣血，活血化瘀，補(bǔ)益肝腎，祛風(fēng)散邪。
[0004] 由于復(fù)方中藥八味補(bǔ)白片有八味中藥，成分復(fù)雜多樣，在中藥產(chǎn)品的檢測(cè)中常常 都會(huì)帶來相互干擾，因此，對(duì)判斷該藥中藥物在制備成產(chǎn)品后，判斷產(chǎn)品的工藝是否合理， 產(chǎn)品中有效成分是否富集，最終產(chǎn)品的質(zhì)量是否穩(wěn)定等，建立一個(gè)合理的、體現(xiàn)產(chǎn)品質(zhì)量和 檢測(cè)水平的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是十分關(guān)鍵的技術(shù)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于研究設(shè)計(jì)中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，用現(xiàn)代的 色譜和顯微等分析技術(shù)，選擇合理的分離、提取的方法及手段，有效控制其活性成分作為指 標(biāo)，新建立控制產(chǎn)品質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。
[0006] 本發(fā)明采用薄層色譜對(duì)此中藥制劑中的八味藥材黃芪、丹參、當(dāng)歸、鹽補(bǔ)骨脂、炒 蒺藜、紅花等進(jìn)行了全面的薄層色譜（TLC)定性研究，對(duì)君藥補(bǔ)骨脂進(jìn)行了含量測(cè)定研究， 其中黃芪、丹參、鹽補(bǔ)骨脂通過本復(fù)方產(chǎn)品的檢測(cè)方法優(yōu)選，獲得了較滿意的薄層色譜結(jié) 果和補(bǔ)骨脂的定量測(cè)定方法?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，丹參、當(dāng)歸中含有有機(jī)酸類及其他多種微量 元素，因此具有活血補(bǔ)血的作用；黃芪中含有的主要化學(xué)成分為黃酮類、皂苷類和多糖等， 具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能和應(yīng)激力的作用。鹽補(bǔ)骨脂含有呋喃香豆素類物質(zhì)，有提高皮膚 對(duì)紫外線敏感作用，刺激黑色素細(xì)胞的形成，對(duì)酪氨酸酶的活性也有較強(qiáng)的激活作用。業(yè) 已證實(shí)，酪氨酸酶的活性直接與黑素含量有關(guān)，上調(diào)酪氨酸酶的活性，加速黑素生成的藥 物可提高白癜風(fēng)的治療效果。呋喃香豆素（?111'〇〇〇111]1&1'；[116)為香豆素類的6,7或7,8位 與呋喃基并合而成的化合物的總稱。補(bǔ)骨脂素（Psoralene)分子式為CnH603、異補(bǔ)骨脂素 (Angelicin)，分子式為CnH603，為呋喃香豆素主要代表物質(zhì)。所以本發(fā)明選定補(bǔ)骨脂素和 異補(bǔ)骨脂素二種活性成分為代表，作為指標(biāo)性成分，控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本發(fā)明提供中藥八味 補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂、黃芪、丹參的鑒別方法及補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量測(cè)定的檢 測(cè)方法。
[0007] 本發(fā)明提供了一種中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，該方法包括以下步驟：
[0008]( -）中藥八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂、黃芪和丹參的鑒別方法：
[0009] (1)中藥八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂顯微鑒別，呈顯微特征圖，見圖1
[0010] (2)中藥八味補(bǔ)白片中黃芪的薄層鑒別，呈特征色譜圖，見圖2
[0011] ⑶中藥八味補(bǔ)白片中丹參的薄層鑒別，呈特征色譜圖，見圖3
[0012] (二）中藥八味補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的高效液相色譜含量檢 測(cè)：每片含量以補(bǔ)骨脂素（CnH603)和異補(bǔ)骨脂素（CnH603)總量計(jì)算，不低于0. 30mg，見圖5
[0013] 具體地，本發(fā)明中藥八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂、黃芪和丹參的鑒別方法包括以下步 驟：
[0014] (1)本發(fā)明采用薄層層析法鑒別八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂
[0015] 取八味補(bǔ)白片適量，研細(xì)，稱取2g，加乙酸乙酯或甲醇，超聲或熱回流，濾過，濾液 蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴セ蚣状际谷芙?，作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂對(duì)照藥材，同法制成對(duì) 照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部VIB)試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照藥材溶液、 供試品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1)或石油醚-乙酸乙 酯（4:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm)下或噴以10%的氫氧化鈉甲醇溶 液置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液相應(yīng)位置上，顯相同顏色 斑點(diǎn)。
[0016] (2)采用薄層層析法鑒別八味補(bǔ)白片中的黃芪
[0017] 因黃芪為本方中的主藥之一，其的主要活性成分為黃芪甲苷，本發(fā)明選擇黃芪甲 苷作為對(duì)照品，鑒別本產(chǎn)品的質(zhì)量。
[0018] 取八味補(bǔ)白片適量，研細(xì)，稱取2g，加水或乙醇適量，置水浴上加熱回流或超聲，放 冷，取上清液，用乙醚振搖，洗滌，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇振搖提取數(shù)次，合并正 丁醇提取液，用等量的氨試液洗滌，再用等量的正丁醇飽和的水洗滌數(shù)次，正丁醇液蒸干， 殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，離心，取上清液作為供試品溶液。另取黃芪對(duì)照藥材適量，同法制 成對(duì)照藥材溶液。取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇適量制成，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法 (中國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8:2:1)或（三氯甲烷-甲醇-水（12:5:3)為展開劑，展 開，取出，晾干，直接加熱或噴以10%的硫酸乙醇溶液，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜 中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)及熒光主斑點(diǎn)。
[0019] (3)采用薄層層析法鑒別八味補(bǔ)白片中的丹參
[0020] 取八味補(bǔ)白片適量，研細(xì)，稱取2g，加水或乙醇適量，置水浴上加熱回流或超聲溶 解，加鹽酸溶液適量，混勻，離心，取上清液，加等量乙醚提取2次，合并提取液，離心分層， 吸取乙醚提取液，揮干，用無水乙醇適量使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對(duì)照藥材適量， 同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩 種溶液適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-苯-甲酸（6 :5 :3 :1) 或三氯甲烷-丙酮-甲酸（8:2:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的三氯化鐵乙醇溶 液，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液相應(yīng)位置上，顯相同的顏色斑 點(diǎn)。
[0021] (二）采用高效液相色譜法定量檢測(cè)八味補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂 素含量。
[0022] 由于補(bǔ)骨脂中的主要活性成分為補(bǔ)骨脂素（CnH603)和異補(bǔ)骨脂素（CnH603)，因 此，選擇補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素作為定量檢測(cè)補(bǔ)骨脂的標(biāo)準(zhǔn)品。
[0023]補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量測(cè)定：
[0024] 色譜條件與系統(tǒng)適用性：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（50:50) 或（55 :45)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm。理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
[0025] 對(duì)照品溶液的制備：取在減壓干燥（真空度_0.IMpa，溫度60°C) 12-24小時(shí)的補(bǔ) 骨脂素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml各含15-20yg的溶液，即 得。
[0026] 供試品溶液的制備：取八味補(bǔ)白片20片，碾細(xì)，精密稱定2. 0g，置索氏提取器中或 圓底燒瓶中，加甲醇或乙醇80-120ml，加熱回流2-5小時(shí)；或浸泡過夜，再加熱回流2-5小 時(shí)，放冷，轉(zhuǎn)移至l〇〇ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品。
[0027] 測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10-20yl，注入液相色譜儀， 測(cè)定。
[0028] 每片八味補(bǔ)白片含補(bǔ)骨脂，以補(bǔ)骨脂素（CnH603)和異補(bǔ)骨脂素（CnH603)總量計(jì) 算，不低于〇? 30mg。
[0029] 其優(yōu)選的供試品溶液的制備方法是：取八味補(bǔ)白片20片，碾細(xì)，精密稱定2. 0g，置 索氏提取器中，加甲醇80ml，加熱回流4小時(shí)；放冷，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加甲醇定容至 刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品。
[0030] 在中藥進(jìn)入標(biāo)準(zhǔn)化時(shí)代，產(chǎn)品的質(zhì)量是產(chǎn)品的生命，擁有產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)則是擁有關(guān) 鍵技術(shù)。本發(fā)明提供了八味補(bǔ)白片產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法，經(jīng)過科學(xué)的方法學(xué)研究，優(yōu) 選出的方法穩(wěn)定可靠，專一性和科學(xué)性強(qiáng)，可以有效檢測(cè)復(fù)方中藥八味補(bǔ)白片的相關(guān)成分， 為使用者提供有保證質(zhì)量的產(chǎn)品，有較大的應(yīng)用價(jià)值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031] 圖1、實(shí)施例1八味補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂的薄層色譜圖，圖中：從左至右，斑點(diǎn)順序， 1-陰性空白（缺鹽補(bǔ)骨脂）2-鹽補(bǔ)骨脂陽性單味藥材3-4-5-八味補(bǔ)白片樣品；
[0032] 圖2、實(shí)施例1八味補(bǔ)白片中黃芪的薄層色譜圖，圖中：從左至右，斑點(diǎn)順序，1-陰 性空白（缺黃芪）2_黃芪甲苷3-黃芪對(duì)照藥材4-5-6-八味補(bǔ)白片樣品；左圖為日光下視 檢，右圖為紫外燈365nm下檢視；
[0033] 圖3、實(shí)施例1八味補(bǔ)白片中丹參的薄層色譜圖，圖中：從左至右，斑點(diǎn)順序，1-陰 性空白（缺丹參）2_丹參對(duì)照藥材3-4-5-八味補(bǔ)白片樣品；
[0034] 圖4、實(shí)施例4補(bǔ)骨脂素（前）、異補(bǔ)骨脂素（后）對(duì)照品的高效液相色譜圖；
[0035] 圖5、實(shí)施例4八味補(bǔ)白片樣品中補(bǔ)骨脂-補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的高效液相色譜 圖；
[0036] 圖6、實(shí)施例4空白樣品（缺補(bǔ)骨脂）中的高效液相色譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0037] 以下實(shí)施例使用的八味補(bǔ)白片產(chǎn)品由上海百歲行藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。
[0038] 實(shí)施例1、八味補(bǔ)白片檢測(cè)試驗(yàn)
[0039] (1)薄層層析色譜法中補(bǔ)骨脂鑒別：取八味補(bǔ)白片10片，研細(xì)，稱取2g，加乙酸乙 酯20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為供試品溶液。 另取補(bǔ)骨脂對(duì)照藥材（中國藥品生物檢定所）〇.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜 法（中國藥典2010年版一部VIB)試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照藥材溶液5yl，供試品10yl，分別 點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯（4 :1V/V)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 10%的氫氧化鈉甲醇溶液置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液 相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂顯微鑒別，呈顯微特征圖，見圖1。
[0040] (2)取本品10片，研細(xì)，稱取2g，加水50ml，置水浴上加熱回流30分鐘，放冷，離 心，取上清液，用乙醚振搖提取2次，每次50ml，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇振搖提取 2次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用等量的氨試液洗滌，再用等量的正丁醇飽和的水洗 滌2次，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，離心，取上清液作為供試品溶液。另取黃芪 對(duì)照藥材（中國藥品生物檢定所lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。取黃芪甲苷對(duì)照品（中國藥 品生物檢定所），加甲醇制成每lml含0. 5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中 國藥典2010年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄 層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8 :2 :1V/V)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸 乙醇溶液，l〇5°C加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同 顏色的主斑點(diǎn)及熒光主斑點(diǎn)。八味補(bǔ)白片中黃芪的薄層鑒別，呈特征色譜圖，見圖2。
[0041] (3)取本品10片，研細(xì)，稱取2g，用20ml水，超聲處理30分鐘溶解，加0?lmol/1 鹽酸溶液l〇ml，混勻，離心10分鐘，取上清液，加等量乙醚提取2次，合并提取液，離心分層， 吸取乙醚提取液，揮干，用無水乙醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對(duì)照藥材（中 國藥品生物檢定所）0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一 部VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5yl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三 氯甲烷-苯-甲酸（6 :5 :3 :1V/V)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的三氯化鐵乙醇溶 液，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液相應(yīng)位置上，顯相同的顏色斑 點(diǎn)。八味補(bǔ)白片中丹參的薄層鑒別，呈特征色譜圖，見圖3。
[0042] (4)補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量檢測(cè)：
[0043] 色譜條件與系統(tǒng)適用性：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（50:50) 為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm。理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
[0044] 對(duì)照品溶液的制備：取在減壓干燥12小時(shí)的補(bǔ)骨脂素（中國藥品生物檢定所）和 異補(bǔ)骨脂素（中國藥品生物檢定所）對(duì)照品，精密稱定，加甲醇制成每lml各含15yg的溶 液，即得。
[0045] 供試品溶液的制備：取八味止白片20粒，碾細(xì)，稱2. 5g，精密稱定，置索氏提取器 中，加甲醇80ml，浸泡過夜，加熱回流3小時(shí)，放冷，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用少量甲醇清洗 索氏提取器并入容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。
[0046] 測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10U1，注入液相色譜儀，測(cè) 定，即得。
[0047] 八味補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的高效液相色譜測(cè)定含量以補(bǔ)骨 脂素（CnH603)和異補(bǔ)骨脂素（CnH603)總量計(jì)算，不低于0. 30mg。
[0048] 八味止白片每片含補(bǔ)骨脂，以補(bǔ)骨脂素（CnH603)和異補(bǔ)骨脂素（CnH603)總量計(jì)算 取八味止白片樣品產(chǎn)品（批號(hào)：xll0401、xll0402、xll0403)按照補(bǔ)骨脂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案對(duì)八 味止白片含量測(cè)定，結(jié)果見表8。
[0049] 表1.三批樣品含量測(cè)定結(jié)果
[0050]

【權(quán)利要求】
1. 中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟： (一） 中藥八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂、黃芪和丹參的鑒別方法： (1) 中藥八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂顯微鑒別； (2) 中藥八味補(bǔ)白片中黃芪的薄層鑒別； (3) 中藥八味補(bǔ)白片中丹參的薄層鑒別； (二） 中藥八味補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的高效液相色譜撿測(cè)，含量 以補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總量計(jì)算，不低于〇. 30mg。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟（一）（1)中 藥八味補(bǔ)白片中的補(bǔ)骨脂顯微鑒別方法為： 取八味補(bǔ)白片，研細(xì)，取2g加乙酸乙酯或甲醇，超聲或熱回流，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?乙酸乙酯或甲醇使溶解，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液； 照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述對(duì)照藥材溶液，供試品，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正 己烷-乙酸乙酯4 :1V/V或石油醚-乙酸乙酯4:1V/V為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光 燈365nm下或噴以10%的氫氧化鈉甲醇溶液置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與 對(duì)照藥材溶液相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟（一）（2)中 藥八味補(bǔ)白片中黃芪的薄層鑒別方法為： 取八味補(bǔ)白片，研細(xì)，取2g加水或乙醇適量，置水浴上加熱回流或超聲，放冷，取上清 液，用乙醚振搖，洗滌，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇振搖提數(shù)次，合并正丁醇提取液， 用等量的氨試液洗滌，再用等量的正丁醇飽和的水洗滌數(shù)次，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?lml使溶解，離心，取上清液作為供試品溶液；另取黃芪對(duì)照藥材適量，同法制成對(duì)照藥材 溶液；取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇適量制成，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上 述三種溶液適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-乙醇-水8 :2 :1V/V或三氯 甲烷-甲醇-水12:5: 3V/V為展開劑，展開，取出，晾干，直接加熱或噴以10 %的硫酸乙醇溶 液，105°C加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的 主斑點(diǎn)及熒光主斑點(diǎn)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟（一）（3)中 藥八味補(bǔ)白片中丹參的薄層鑒別方法為： 取八味補(bǔ)白片研細(xì)，2g用水或乙醇醇適量，置水浴上加熱回流或超聲超聲，溶解，力口 鹽酸溶液適量，混勻，離心，取上清液，加等量乙醚提取2次，合并提取液，離心分層，吸取乙 醚提取液，揮干，用無水乙醇適量使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對(duì)照藥材適量，同法制 成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液適量，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板 上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-苯-甲酸6 :5 :3 :1V/V或三氯甲烷-丙酮-甲酸8:2:1V/V為 展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的三氯化鐵乙醇溶液，l〇5°C加熱至斑點(diǎn)清晰，供試品色 譜中，在與對(duì)照藥材溶液相應(yīng)位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟（二）中藥八 味補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的高效液相色譜測(cè)定方法包括下列步驟： 色譜條件與系統(tǒng)適用性：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水50:50V/V或 55 :45V/V為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm，理論塔板數(shù)按補(bǔ)骨脂峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ; 對(duì)照品溶液的制備：取在減壓干燥（真空度-o. IMpa，溫度60°C ) 12-24小時(shí)的補(bǔ)骨脂 素和異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml各含15-20 y g的溶液，即得； 供試品溶液的制備：取八味補(bǔ)白片20片，碾細(xì)，精密稱定2. 0g，置索氏提取器中或圓 底燒瓶，加甲醇或乙醇80-120ml，加熱回流2-5小時(shí)；或浸泡過夜，再加熱回流2-4小時(shí)，放 冷，轉(zhuǎn)移至l〇〇ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品； 測(cè)定：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10-20 Ul，注入液相色譜儀，撿測(cè)測(cè) 定。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的中藥八味補(bǔ)白片的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟（二）中藥八 味補(bǔ)白片中補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的高效液相色譜撿測(cè)，含量以補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ) 骨脂素總量計(jì)算，不低于〇. 30mg。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104459011SQ201410821965
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月22日
【發(fā)明者】朱建民, 楊莉婭, 毛士龍, 王拂塵, 張蓉蓉, 汪碩聞, 邵寶平, 李倩 申請(qǐng)人:上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院