一種磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒。試劑盒包括盒體、盒蓋、設(shè)置于盒體內(nèi)的底部固定座和頂部固定座，所述的底部固定座上有各種試劑瓶下凹瓶位，用于放置抗磺胺類藥物抗體工作液、酶標(biāo)二抗工作液、顯色液、終止液、濃縮洗滌液、磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)液、基質(zhì)稀釋液和Tween-20備用液，所述的頂部固定座上有各種卡槽或凹槽，用于放置酶標(biāo)板、微孔條、吸管、比色卡和pH試紙。該實(shí)用新型采用間接競爭ELISA方法進(jìn)行磺胺類藥物殘留的定性、定量檢測，具有操作簡單、靈敏度高、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，適合大批量樣品的現(xiàn)場快速檢測。
【專利說明】一種磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種醫(yī)藥生物領(lǐng)域的檢測試劑盒，具體涉及一種用于測定樣品溶液中磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002]磺胺類藥物(Sulfonamides, SAs)是指具有對氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類藥物的總稱，多為兩性化合物，是一類傳統(tǒng)的人工合成抗菌藥物?；前奉愃幬锏囊志鷻C(jī)理是由于磺胺類藥物能分解出對氨基苯磺酰胺，其分子的形狀和大小與組成葉酸中的對氨基苯甲酸類似，化學(xué)性質(zhì)也相似。由于細(xì)菌對二者缺乏選擇性，大量的對氨基苯磺酰胺替代了對氨基苯甲酸而被細(xì)菌吸收，干擾了細(xì)菌葉酸的合成而影響其生長繁殖。磺胺類藥物抗菌譜較廣，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性菌均有抑制效果，具有一定療效的SAs就有幾十種。因具有廣譜、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)、易用以及聯(lián)合抗菌增效劑效果可提高數(shù)十倍的特點(diǎn)，磺胺類藥物常用于治療家畜子宮炎、呼吸道和消化道感染、豬萎縮性鼻炎、禽霍亂、傷寒、副傷寒和球蟲感染。當(dāng)磺胺類藥物以亞治療濃度作為飼料添加劑使用時(shí)，可預(yù)防疾病的發(fā)生，提高飼料轉(zhuǎn)化效率和促進(jìn)動(dòng)物生長。
[0003]磺胺類藥物在動(dòng)物體內(nèi)代謝時(shí)間較長，往往造成動(dòng)物可食性組織中磺胺類藥物殘留超標(biāo)。而長期食用含有磺胺類藥物殘留的食品，會(huì)引起磺胺類藥物的逐漸蓄積，危害人體健康，主要表現(xiàn)為變態(tài)反應(yīng)、過敏反應(yīng)、泌尿系統(tǒng)障礙、致畸作用、致突變作用、致癌作用以及激素樣作用。而且磺胺類藥物在食品、飼料中的殘留極易引發(fā)細(xì)菌耐藥性和環(huán)境污染。動(dòng)物排泄物中的抗菌藥物和耐藥菌株被釋入環(huán)境后，將污染水源和土壤，在污泥中細(xì)菌可長期保持耐藥性。同時(shí)，磺胺類藥物殘留也是目前動(dòng)物性食品貿(mào)易的主要技術(shù)問題，嚴(yán)重影響了畜牧業(yè)的正常發(fā)展。為了保障動(dòng)物用藥的安全性和有效性，許多國家規(guī)定了磺胺類藥物的最高殘留限量(maximum residue limits, MRL),加拿大、歐盟、美國規(guī)定動(dòng)物組織中磺胺類藥物總量的最大殘留量是100μ g/kg，日本為20μ g/kg，并且有逐步嚴(yán)格控制的發(fā)展趨勢。2002年12月我國農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)文件規(guī)定，食用動(dòng)物產(chǎn)品中磺胺類藥物最高殘留限量為100 μ g/kg，并將其列為獸藥殘留監(jiān)控的重點(diǎn)。
[0004]磺胺類藥物殘留檢測方法主要有微生物學(xué)法、理化分析法和免疫法等。微生物學(xué)法簡便、費(fèi)用低，但操作費(fèi)時(shí)且敏感性、特異性都較差，在定性定量上均存在困難，不能滿足現(xiàn)代殘留檢測的需要；理化法常作為確證方法用于測定動(dòng)物組織中的藥物殘留，如氣相色譜(GC)、高效液性色譜(HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)和液質(zhì)聯(lián)用(HPLC-MS)等，這些方法靈敏準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)，分離度好，可以同時(shí)測定多種藥物，但需要昂貴的儀器設(shè)備、樣品前處理復(fù)雜、繁瑣費(fèi)時(shí)、檢測成本高，不能現(xiàn)場操作，而且需要專業(yè)技術(shù)人員；與之相比，酶聯(lián)免疫方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、檢測成本低、適合于批量樣品的篩選等優(yōu)點(diǎn)，而且所需設(shè)備少，操作簡單易學(xué)，成本低廉，能夠更好地滿足我國畜禽養(yǎng)殖戶、屠宰場、食品企業(yè)、政府職能監(jiān)管部門等開展檢測工作。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本實(shí)用新型的目的是提供了一種小巧輕便的磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒，使用該試劑盒操作簡便，靈敏度高，成本低，穩(wěn)定性好，可進(jìn)行一次連續(xù)多個(gè)樣品中磺胺類藥物殘留含量的測定，減少了樣品檢測所需要的時(shí)間。
[0006]本實(shí)用新型的技術(shù)方案是:
[0007]一種磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒，包括盒體、盒蓋、設(shè)置于盒體內(nèi)的底部固定座和頂部固定座，所述的盒體上設(shè)有與盒蓋上的盒蓋卡頭相對應(yīng)的盒體卡槽，用于開關(guān)試劑盒。
[0008]所述試劑盒的形狀沒有特定限制，可為長方體，正方體，菱形體和圓柱體等，優(yōu)先選擇為長方體。
[0009]所述試劑盒的材質(zhì)沒有特定限制，可為紙質(zhì)材料，塑料材料或竹子材料等，優(yōu)先選擇為硬紙盒。
[0010]所述的底部固定座由底部間隔分為A、B兩部分，A部分設(shè)有7個(gè)試劑瓶下凹瓶位，分別用于放置抗磺胺類藥物抗體工作液、酶標(biāo)二抗工作液、顯色液、終止液、濃縮洗滌液和磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)液，B部分設(shè)有5個(gè)試劑瓶下凹瓶位，分別用于放置基質(zhì)稀釋液和Tween-20備用液。
[0011]所述試劑瓶的顏色可以有白色、黑色、棕色、橙色、藍(lán)色等，所述試劑瓶的材料可以分為玻璃或塑料兩種，所述試劑瓶的容積，最小的為2ml,最大的為50ml。
[0012]所述的頂部固定座由手柄分為A、B兩部分，A部分設(shè)有2個(gè)卡槽，分別用于放置96孔酶標(biāo)板和反應(yīng)微孔條，B部分設(shè)有6個(gè)凹槽，分別用于放置不同容量的微吸管、比色卡、pH試紙，B部分凹槽的上方放置有基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線和說明書。
[0013]所述的酶標(biāo)板由聚苯乙烯制成，采用96孔試劑板作為固相載體，放于鋁鉬袋內(nèi)，并置于酶標(biāo)板卡槽中，且酶標(biāo)板由外框支撐架和放置其上的可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個(gè)可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有12個(gè)反應(yīng)孔，其上預(yù)包被對氨基苯磺酰胺偶聯(lián)抗原。
[0014]所述的微吸管有四種不同容量，分別為1.0πι1、100μ1、60μ1和50μ1。
[0015]本實(shí)用新型的有益效果是:試劑盒所需儀器較少，操作簡單易行，且能快速、準(zhǔn)確、批量地用于樣品溶液中磺胺類藥物殘留的定量、定性檢測。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖，圖2是本實(shí)用新型中底部固定座的結(jié)構(gòu)示意圖，圖3是本實(shí)用新型中頂部固定座的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0017]圖面說明:1、盒體,2、盒蓋，3、底部固定座，4、頂部固定座；5、盒體卡槽，6、盒蓋卡頭，7、底座間隔，8、抗磺胺類藥物抗體工作液瓶位，9、酶標(biāo)二抗工作液瓶位，10、顯色劑A液瓶位，11、顯色劑B液瓶位，12、終止液瓶位，13、濃縮洗滌液瓶位，14、磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)液瓶位，15、禽肉稀釋液瓶位，16、禽蛋稀釋液瓶位，17、牛奶稀釋液瓶位，18、飼料稀釋液瓶位，19、Tween-20備用液瓶位，20、手柄，21、酶標(biāo)板卡槽，22、酶標(biāo)反應(yīng)微孔條卡槽，23、1.0ml吸管凹槽，24、100μ1微吸管凹槽，25、60μ1微吸管凹槽，26、50μ1微吸管凹槽，27、比色卡凹槽，28、pH試紙凹槽。

【具體實(shí)施方式】
[0018]結(jié)合附圖詳細(xì)描述實(shí)施例。一種磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、設(shè)置盒體I內(nèi)的底部固定座3和頂部固定座4，所述的盒體I上有盒體卡槽5，與盒蓋2上的盒蓋卡頭6相對應(yīng)，用于開關(guān)試劑盒。
[0019]所述的底部固定座3由底部間隔7分為A、B兩部分，A部分設(shè)有7個(gè)試劑瓶下凹瓶位，B部分設(shè)有5個(gè)試劑瓶下凹瓶位。A部分抗磺胺類藥物抗體工作液瓶位8放置有白色塑料試劑瓶封裝的6ml磺胺類藥物抗體工作液，酶標(biāo)二抗工作液瓶位9放置有紅色塑料試劑瓶封裝的6ml兔抗鼠酶標(biāo)二抗(RaMIgG-HRP)，顯色劑A液瓶位10放置有黑色塑料試劑瓶封裝的4ml底物顯色劑A液，顯色劑B液瓶位11放置有綠色塑料試劑瓶封裝的4ml底物顯色劑B液，終止液瓶位12放置有黃色塑料試劑瓶封裝的7ml 2M硫酸溶液，濃縮洗滌液瓶位13放置有半透明塑料試劑瓶封裝的40ml濃縮洗滌液(10 X )，磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)液瓶位14放置有白色透明塑料試劑瓶封裝的2ml磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)液(lmg/ml )。B部分禽肉稀釋液瓶位15放置有紅色帽的半透明塑料試劑瓶封裝的50ml禽肉樣品稀釋液，禽蛋稀釋液瓶位16放置有黃色帽的半透明塑料試劑瓶封裝的50ml禽蛋樣品稀釋液，牛奶稀釋液瓶位17放置有白色帽的半透明塑料試劑瓶封裝的20ml牛奶樣品稀釋液，飼料稀釋液瓶位18放置有灰色帽的半透明塑料試劑瓶封裝的20ml飼料樣品稀釋液，Tween-20備用液瓶位19放置有黑色帽的黑色塑料試劑瓶封裝的3ml Tween-20表面活性劑。
[0020]所述的頂部固定座4由手柄20分為A、B兩部分，A部分設(shè)有2個(gè)卡槽,B部分設(shè)有6個(gè)凹槽。A部分的酶標(biāo)板卡槽21放置一塊由聚苯乙烯制成的酶標(biāo)板，采用96孔試劑板作為固相載體，放于鋁鉬袋內(nèi)，且酶標(biāo)板由外框支撐架和放置其上的可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個(gè)可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有12個(gè)反應(yīng)孔，其上預(yù)包被對氨基苯磺酰胺偶聯(lián)抗原，酶標(biāo)反應(yīng)微孔條卡槽22放置有24-36條散裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條，使用時(shí)安裝在酶標(biāo)板外框支撐架上，使試劑盒檢測容量擴(kuò)大2-3倍。B部分的1.0ml吸管凹槽23放置有50根1.0ml容量的吸管，用于樣品基質(zhì)的采樣，ΙΟΟμΙ微吸管凹槽24放置有50根ΙΟΟμΙ容量的微吸管，用于添加終止液，60μ1微吸管凹槽25放置有50根60μ1容量的微吸管，用于添加顯色劑溶液，50μ1微吸管凹槽26放置有50根50μ1容量的微吸管，用于添加抗磺胺類藥物抗體工作液和酶標(biāo)二抗工作液，比色卡凹槽27放置有不同基質(zhì)條件下的比色卡，顯示不同顏色試劑孔對應(yīng)的吸光度值和磺胺類藥物殘留含量，用于樣品含量的大概推算，PH試紙凹槽28放置不同種類的PH試紙，用來測定不同溶液的pH值。B部分凹槽的表面還放置有基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線和說明書，將酶標(biāo)儀測定的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，可準(zhǔn)確測定樣品溶液中磺胺類藥物殘留含量。
[0021]動(dòng)物組織中磺胺類藥物殘留含量測定:
[0022]I)樣本前處理:將動(dòng)物組織或其它樣品切碎、研磨后稱取3±0.05g樣本于50ml離心管中，再加入9ml乙酸乙酯；劇烈震蕩5min后，室溫下4000r/min離心5min ;移取6ml上清液，于60°C下氮?dú)獯蹈?；加入Iml正已燒,震蕩Imin,再加入0.5ml復(fù)溶液,振蕩1s ;吸取至少500ml下層溶液待檢。
[0023]2)試劑盒的操作步驟:①將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡20min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻取出所需數(shù)量的微孔條，將不用的微孔條放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2-8°C;③編號(hào):將樣品對應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品做2孔平行，并記錄樣品孔所在的位置加樣品:加樣品50 μ I到對應(yīng)的微孔中，隨即加入酶標(biāo)二抗工作液50 μ I /孔，再加入抗磺胺類藥物抗體工作液50 μ I /孔，輕輕振蕩混勻，置37°C避光環(huán)境中反應(yīng)30min 洗板:將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300 μ I/孔，充分洗滌5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干；?顯色:加入底物顯色劑溶液60 μ I/孔(A液和B液各30 μ I )，輕輕振蕩混勻，置37°C避光環(huán)境反應(yīng)15_20min ；?測定:加入終止液100 μ I/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處，測定每孔吸光度值。
[0024]3)測定樣品溶液中磺胺類藥物殘留含量:
[0025]①定性測定:底物顯色15_20min后，將樣品孔藍(lán)色深淺與比色卡對比，獲得不同樣品基質(zhì)中磺胺類藥物殘留大概含量。
[0026]②定量測定:加入終止液100 μ I/孔后，將酶標(biāo)儀測定的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，可準(zhǔn)確測定樣品溶液中磺胺類藥物殘留含量。
【權(quán)利要求】
1.一種磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒，包括盒體和連接于盒體上的盒蓋，開口一側(cè)的盒蓋與盒體上分別設(shè)有相對應(yīng)的盒蓋卡頭和盒體卡槽，其特征在于:所述的盒體內(nèi)部由上到下依次設(shè)有頂部固定座和底部固定座,其中底部固定座由底部間隔分為A、B兩部分，A部分設(shè)有7個(gè)試劑瓶下凹瓶位，B部分設(shè)有5個(gè)試劑瓶下凹瓶位，A部分的7個(gè)試劑瓶下凹瓶位內(nèi)分別放置有抗磺胺類藥物抗體工作液、酶標(biāo)二抗工作液、顯色劑A液、顯色劑B液、終止液、濃縮洗滌液和磺胺類藥物標(biāo)準(zhǔn)液，B部分的5個(gè)試劑瓶下凹瓶位內(nèi)分別放置有禽肉稀釋液、禽蛋稀釋液、牛奶稀釋液、詞料稀釋液和Tween-20備用液，所述的頂部固定座由手柄分為A、B兩部分，A部分設(shè)有2個(gè)卡槽，B部分設(shè)有6個(gè)凹槽，A部分的2個(gè)卡槽內(nèi)分別放置有96孔酶標(biāo)板和酶標(biāo)反應(yīng)微孔條，B部分的6個(gè)凹槽內(nèi)分別放置有1.0mL吸管、100 μ L微吸管、60 μ L微吸管、50 μ L微吸管、比色卡和pH試紙，在頂部固定座B部分的上方放置有基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線和說明書。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磺胺類藥物多殘留免疫學(xué)檢測試劑盒，其特征在于:所述的酶標(biāo)板由聚苯乙烯制成，采用96孔試劑板作為固相載體，放于鋁鉬袋內(nèi)，并置于酶標(biāo)板卡槽中，且酶標(biāo)板由外框支撐架和放置其上的可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個(gè)可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有12個(gè)反應(yīng)孔，其上預(yù)包被對氨基苯磺酰胺偶聯(lián)抗原。
【文檔編號(hào)】G01N33/543GK203929781SQ201420337346
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年6月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月23日
【發(fā)明者】原小燕, 王毅紅, 楊英軍, 懷文輝, 孫志文, 張寶, 郭芳 申請人:河南知微生物工程有限公司