一種快速測定尿巰基的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型提供了一種快速測定尿巰基的試劑盒，包括盒體和盒體外的外包裝盒，所述盒體為白色硬質塑料，設有向內凹陷成的依次排列的測試池區(qū)、試劑滴瓶存放區(qū)、吸管存放區(qū)；本試劑盒結構簡單，只需一個試劑盒便能完成24個檢試，節(jié)省空間和試劑，同時也減輕操作者勞動負擔。
【專利說明】一種快速測定尿巰基的試劑盒

【技術領域】
[0001]本實用新型涉及一種利用普魯士藍法快速檢測尿液巰基的專用檢測盒。

【背景技術】
[0002]許多天然蛋白質含有游離巰基(free sulfhydryl groups)或潛在的巰基。在蛋白質中，巰基往往以活性功能基的形式參與酶的催化或參與輔助因子的結合或參與蛋白質活性構象的維持。研究蛋白質巰基的數量和性質是近代生物化學獲得某些信息的重要手段之一。正常人尿中幾乎不含有巰基，但是體內某些代謝異常則導致尿中巰基含量增高。
[0003]現(xiàn)今已知用來作用蛋白質巰基的試劑大約有60多種，其中，Ellman試劑是檢測蛋白質巰基常用的試劑。Ellman試劑，也稱為DTNB (5，5 —二硫二硝基苯甲酸)試劑，該試劑是一種通用的檢測溶液中自由巰基的水溶性化合物。DTNB與蛋白質巰基相互作用形成有色的硫酚陰離子(CNT)，該化合物的溶液與巰基反應會產生黃色的化合物。檢測諸如具有末端半胱氨酸殘基的多肽的未知樣品。但是，Ellman試劑操作比較復雜，靈敏度欠佳。
[0004]尿巰基測定目前使用的另一,決速方法是硝普鈉試驗:尿液Iml加入5%氰化鈉水溶液，放置5分鐘,加入5%硝普鈉水溶液一滴，出現(xiàn)紅色或紫紅色為陽性,表示尿中有過量的巰基。該法涉及劇毒物質一氰化鈉，生物安全度極低，給生產和使用均造成極大隱患。
[0005]因此，發(fā)明一種新的、安全無毒、操作簡單、成本低廉、靈敏度高的檢測方法快速的確定尿液中是否含有巰基，成為一個需要解決的問題。


【發(fā)明內容】

[0006]為了解決現(xiàn)有技術中檢測尿液中的巰基方法敏感度低、毒性高、耗時長、生物安全度低的問題，本發(fā)明提供了新的普魯士藍法快速測定尿巰基的方法，本發(fā)明提供的方法其生物安全度高，而且靈敏度高，成本低廉，方便快捷。同時本發(fā)明還提供了一種普魯士藍法快速檢測尿液中的巰基的專用檢測盒。
[0007]普魯士藍(Prussian blue)又稱亞鐵氰化鐵(分子式:Fe4 [Fe (CN) 6] 3)是經典的配合物。其配體為六個氰基，中心離子為二價鐵離子。氰基與二價鐵離子共同通過配位鍵組成六氰合鐵(II)酸根(整體顯-4價)作為普魯士藍的內配位層(內界)。而外層的三價鐵離子與鉀離子作為普魯士藍的外配位層(外界)通過離子鍵與六氰合鐵(II)酸根以離子鍵的形式相連接。
[0008]普魯士藍的結構:普魯士藍為六面立(正)方結構。氰基作為立(正)方的各條棱連結處于頂點的鐵離子，其中相同價態(tài)的鐵離子在各面上均互為對角，而每間隔一個立(正)方，鉀離子會被包裹在其中。
[0009]巰基(一SH)作為一種還原劑使三氯化鐵還原成二氯化鐵，后者與鉄氰化鉀反應生成普魯士藍而呈現(xiàn)藍色。利用這一化學反應可以測定尿中巰基物含量。
[0010]3K4Fe(CN)6 + 4FeC13 — Fe4[Fe (CN)6]3 + 12KC1
[0011]但是尿中存在的尿酸、維生素C等還原性物質也能使鉄氰化鉀還原，故有干擾。正常體內尿酸池平均為1200mg，每天產生750mg，排出500?lOOOmg。在正常情況下，約2 /3經腎臟排泄，其余I / 3在腸道分解排出。但研究發(fā)現(xiàn):巰基在酸性環(huán)境中還原性較強，而尿酸在堿性環(huán)境中具有還原性。制作一個酸性環(huán)境則可基本排除尿酸對巰基檢測的干擾。此外，以二氯化汞與巰基結合，可作尿酸和維生素C等干擾物的空白對照加以排除。
[0012]一種快速檢測尿液中巰基的方法，包括以下檢測步驟:
[0013](I)打開檢測盒的外包裝盒，在測試孔內順序加入試劑A 100 μ L、尿液50yL、試劑Β50μ L和試劑C50y L ;在對照孔內順序加入試劑AlOO μ L、尿液50 μ L、試劑D50 μ L、試劑Β50 μ L和試劑C50 μ L
[0014]2分鐘內觀察兩孔顏色變化。若測試孔顯色(藍色)、對照孔未顯色或測試孔顯色明顯重于對照孔則為陽性，表明尿標本內含有巰基；若兩孔均未顯色或顯色無明顯差異則為陰性，表明尿標本內不含有巰基。
[0015]2)所述試劑A為2Μ ΡΗ5.0醋酸緩沖液，配制方法如下:
[0016]2Μ醋酸鈉溶液:醋酸鈉8.2g，加凈化水溶解，定容至10ml ；
[0017]2M醋酸溶液:冰醋酸6g，.加凈化水溶解，定容至10ml ；
[0018]2M醋酸鈉溶液10ml+2M醋酸溶液2ml，混勻，冰箱冷存48小時；
[0019]3)所述試劑B為1%鐵氰化鉀溶液，配制方法如下:鐵氰化鉀lg，加凈化水
[0020]溶解，定容至100ml;
[0021]4)所述試劑C為2%三氯化鐵溶液，配制方法如下:三氯化鐵(含6分子
[0022]H20) 2g,加凈化水溶解，定容至10ml ;
[0023]5)所述試劑D為0.1M 二氯化汞溶液，配制方法如下:二氯化汞2.7g，加凈化水溶解，定容至100ml。
[0024]本發(fā)明同時提供了一種快速檢測尿液巰基的檢測盒，24個測試。
[0025]所述的檢測盒包括盒體和盒體外的外包裝盒，所述盒體為白色硬質塑料，設有向內凹陷成的依次排列的測試池區(qū)、試劑滴瓶存放區(qū)、吸管存放區(qū)；所述盒體長25cm，寬
16.5cm ；
[0026]所述測試池區(qū)包括圓形測試池24個，分6行4排矩陣排列，每個測試池的直徑為
2.5cm,用S形隔板平均分割為左右兩半,每側設凹形池I個，直徑L Ocm,深度L 5cm ;右側為測試孔，左側為對照孔；
[0027]所述試劑滴瓶存放區(qū)寬8cm，深5cm ;所述試劑滴瓶存放區(qū)分割為4部分，自上而下分別置放試劑滴瓶A、B、C、D，試劑滴瓶內分別預置試劑A、B、C、D ;所述試劑滴瓶A容量為20ml，試劑滴瓶B、C、D容量均為10ml，所述試劑滴瓶B、C、D以不同顏色加以區(qū)別；
[0028]進一步的，所述吸管吸管存放區(qū)設有吸管體部存放區(qū)和吸管尖部存放區(qū)，吸管體部存放區(qū)內設有一支吸管體部，吸管尖部存放區(qū)設有24個吸管尖部，吸管體部和吸管尖部以摩擦力相連接，吸管尖部為一次性使用，每次使用僅需更換吸管尖部；
[0029]進一步的，所述試劑滴瓶和吸管的管體的材質為彈性塑料。
[0030]本發(fā)明提供的檢測方法，簡單實用，成本低廉，安全可靠，可快速的篩查出尿液中不含巰基的樣本、含巰基的樣本和可能含有巰基的樣本，為進一步檢查做準備；本發(fā)明還提供了一種檢測盒，可專用來盛放檢測過程中用到的器皿和試劑，本試劑盒結構簡單，只需一個試劑盒便能完成24個檢試，節(jié)省空間和試劑，同時也減輕操作者勞動負擔。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031]圖1為檢測盒的內部結構示意圖。
[0032]圖2為檢測盒吸管的結構示意圖。
[0033]圖3為檢測盒吸管尖的結構示意圖。
[0034]圖4為檢測盒的外包裝盒的結構示意圖。
[0035]1、外包裝盒；2、測試池區(qū)；3、試劑滴瓶存放區(qū)；4、吸管存放區(qū)；5吸管體部；6、吸管尖部；7測試孔；8、對照孔；9、試劑A存放區(qū)；10、試劑B存放區(qū)；11、試劑C存放區(qū)；12、試劑D存放區(qū)。

【具體實施方式】
[0036]下面結合附圖對本實用新型做進一步的說明。
[0037]請受檢者留取尿液2ml以上；打開外包裝盒I,取出盒體,所述盒體包括依次向內凹陷成德測試池區(qū)2、試劑滴瓶存放區(qū)3和吸管存放區(qū)4，所述測試池區(qū)2包括圓形測試池24個，分6行4排矩陣排列，每個測試池的直徑為2.5cm，用S形隔板平均分割為左右兩半，每側設凹形池I個，直徑1.0cm，深度1.5cm ;右側為測試孔7，左側為對照孔8 ；
[0038]所述試劑滴瓶存放區(qū)寬8cm，深5cm ;所述試劑滴瓶存放區(qū)分割為4部分，自上而下分別為試劑A存放區(qū)9、試劑B存放區(qū)10、試劑C存放區(qū)11、試劑D存放區(qū)12 ;所述吸管分為吸管體部5和吸管尖部6兩部分，把吸管體部5和吸管尖部6以摩擦力相連接，吸管尖部為一次性使用，吸取不同試劑時僅需更換吸管尖部；
[0039]向測試孔和對照孔內分別滴入試劑A各100 μ L，；
[0040]再向測試孔和對照孔內分別滴入標本尿液各50 μ L,；
[0041]再向對照孔內滴入試劑D50 μ L ;
[0042]再向測試孔和對照孔內分別滴入試劑B各50 μ L ;
[0043]再向測試孔和對照孔內分別滴入試劑C各50 μ L ;
[0044]2分鐘內觀察測試孔和對照孔內液體的顏色變化。
[0045]檢測結果判定如下:
[0046](I)測試孔和對照孔均不顯色則為陰性，說明尿液中不含巰基；
[0047](2)測試孔和對照孔均顯同等顏色(藍色)，亦為陰性，說明尿液中不含巰基；
[0048](3)測試孔顯色(藍色)，對照孔不顯色則為陽性，說明尿液中含巰基；測試孔顯色越深，說明尿液中含疏基越多；
[0049](4)測試孔和對照孔均顯色，但測試孔顏色明顯比對照孔深，亦為陽性，說明尿液中含巰基；二者顏色差距越大，說明尿液中含巰基越多。
[0050](5)測試孔顯色較淺，或測試孔和對照孔顯色差距較小，為可疑陽性，說明尿液中可能含有巰基。
【權利要求】
1.一種快速測定尿巰基的試劑盒，包括盒體和盒體外的外包裝盒，其特征在于，所述盒體為白色硬質塑料，設有向內凹陷成的依次排列的測試池區(qū)、試劑滴瓶存放區(qū)、吸管存放區(qū)；所述盒體長25cm,寬16.5cm ； 所述測試池區(qū)包括圓形測試池24個，分6行4排矩陣排列，每個測試池的直徑為.2.5cm,用S形隔板平均分割為左右兩半,每側設凹形池I個，直徑L Ocm,深度L 5cm ;右側為測試孔，左側為對照孔； 所述試劑滴瓶存放區(qū)寬8cm，深5cm ;所述試劑滴瓶存放區(qū)分割為4部分，自上而下分別置放試劑滴瓶A、B、C、D，試劑滴瓶內分別預置試劑A、B、C、D ;所述試劑滴瓶A容量為20ml，試劑滴瓶B、C、D容量均為10ml，所述試劑滴瓶B、C、D以不同顏色加以區(qū)別； 試劑A為2M PH5.0醋酸緩沖液； 試劑B為1%鐵氰化鉀溶液； 試劑C為2%三氯化鐵溶液； 試劑D為0.1M 二氯化汞溶液； 所述吸管吸管存放區(qū)設有吸管體部存放區(qū)和吸管尖部存放區(qū)，吸管體部存放區(qū)內設有一支吸管體部，吸管尖部存放區(qū)設有24個吸管尖部，吸管體部和吸管尖部以摩擦力相連接，吸管尖部為一次性使用，每次使用僅需更換吸管尖部； 所述試劑滴瓶和吸管的管體的材質為彈性塑料。
【文檔編號】G01N33/68GK203981688SQ201420402048
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年7月19日 優(yōu)先權日:2014年7月19日
【發(fā)明者】溫鑫, 崔子倫 申請人:青島貝爾奧生物科技有限公司