肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,包括底板、樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素和吸水墊;所述試紙條由樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素、吸水墊依次搭接粘貼在底板上構(gòu)成。所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊含有鏈霉親和素標(biāo)記熒光蛋白和生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體;所述硝酸纖維膜上有檢測線和質(zhì)控線,檢測線被肌酸激酶同工酶單克隆抗體,其與上述生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體具有不同的識別表位。本實用新型與目前常見的檢測肌酸激酶同工酶的方法相比(如:化學(xué)發(fā)光法/免疫增強比濁法/膠體金法),不僅大大縮短了檢測時間,同時還提高了檢測靈敏度。
【專利說明】肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于免疫檢測領(lǐng)域,具體涉及一種高靈敏度肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]肌酸激酶同工酶(Creatinekinase-MB,CK_MB)的檢測可用于急性心肌梗死(AMI)的診斷和預(yù)后,心肌炎診斷和預(yù)后,肌肉疾病的診斷,腦疾病如腦梗死、腦膜炎、腦炎等疾病的診斷等。
[0003]肌酸激酶(Creatinekinase,CK)舊稱為肌酸憐酸激酶(Creatinephosphokinase,CPK)。CK分子量為81000,由兩個亞基組成。通常存在于動物的心臟、肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中,是一個與細(xì)胞內(nèi)能量運轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶,它可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應(yīng)。CK在ATP參與下催化肌酸磷酸化,生成ATP和磷酸肌酸。這種酶催化反應(yīng)是可逆的。1979年首次發(fā)現(xiàn)前列腺癌患者血清中肌酸激酶的含量顯著升高,此后在其他類型的癌癥患者中也有相同的發(fā)現(xiàn)。隨著研究的深入,近年來人們開始通過篩選肌酸激酶抑制劑尋找新的抗腫瘤藥物。正是由于肌酸激酶具有的重要的生理功能,更加引起了人們的廣泛的注意和深入的研究。
[0004]目前檢測肌酸激酶同工酶的常用方法有:
[0005]1.放射免疫法(RIA)
[0006]過去,CK-MB多采用電泳法、層析法和免疫抑制法等方法進行測定,后來,RIA和ELISA以其靈敏、特異和精確定量等優(yōu)點受到人們的普遍關(guān)注,應(yīng)用范圍日趨廣泛。其中,Roberts等指出RIA測定CK同工酶比電泳法靈敏度提高10?100倍,因此。特別有助于診斷心內(nèi)膜下心肌梗賽、小灶性心肌梗塞和心肌擴展。RIA方法為了避免血液中CK-MM對測定結(jié)果的影響,采用CK-BB抗血清來建立CK-MB快速放射免疫測定方法。國內(nèi)1988年就有相關(guān)文獻發(fā)表,其原理是先將待測血清與一定量的CK-BB抗血清混合、孵育,然后加入1251標(biāo)記的CK-MB,與待測血清中的CK-MB競爭抗CK-MB抗體,形成抗原-抗體復(fù)合物,該復(fù)合物與再次加入的驢抗兔IgG結(jié)合形成沉淀,離心除去上清液,測定沉淀物的放射強度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得CK-MB的濃度。但由于靈敏度與特異性不高,且存在放射污染的危險,其臨床應(yīng)用受到限制,因此已經(jīng)基本被其它更安全、簡便的方法取代。
[0007]2.化學(xué)發(fā)光免疫測定(CLIA)
[0008]貝克曼Access CK-MB檢測采用雙位點酶免法檢測(“雙抗體夾心法”)。樣品、標(biāo)記了堿性磷酸酶的大鼠抗人CK-MB抗體(酶結(jié)合物)以及包被了大鼠抗CK-BB抗體的磁性顆粒被一起加入到反應(yīng)管中,樣品中的CK-MB和固相在磁性顆粒表面的CK-BB抗體的B亞單位(與CK-BB和CK-MB為同分異構(gòu)體)抗原結(jié)合點進行反應(yīng),同時酶結(jié)合物特異性的與血清或血漿中的CK-MB相結(jié)合(不與CK-BB和CK-MB同分異構(gòu)體反應(yīng))。孵育后,反應(yīng)管被傳送到磁性分離區(qū)域進行多次沖洗,去處未和固相結(jié)合的其它成分。最后在反應(yīng)管中加入化學(xué)發(fā)光底物(Lum1-PhoS*530),已與固相結(jié)合的堿性磷酸酶會使該底物發(fā)出光子并被光電比色計所檢測。最后,對照儀器中儲存的多點定標(biāo)曲線中所描述的光量子與標(biāo)準(zhǔn)品CK-MB的對應(yīng)關(guān)系而計算出樣品中的CK-MB濃度,反應(yīng)產(chǎn)生的光子與樣品中CK-MB的含量成正比。在線性范圍內(nèi)樣品可被準(zhǔn)確定量(大概0.3到300ng/mL)。
[0009]Roche全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀工作原理:人血清中血清/血漿肌酸激酶同工酶與其相應(yīng)抗體(生物素標(biāo)記和三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗肌酸激酶同工酶單抗)在反應(yīng)池中相遇,形成雙抗體復(fù)合物。加入鏈霉素包被的微粒子后,這個抗體復(fù)合物與微粒子結(jié)合。當(dāng)輸入到流動池后,由于磁性的作用,微粒子被捕獲到電極表面,未結(jié)合的抗體等物質(zhì)被洗去。化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕和電子供體三丙胺(TPA)在電極表面發(fā)生電化學(xué)發(fā)光反應(yīng),通過測定發(fā)出的光強度,換算出待測標(biāo)本中抗原的濃度。檢測范圍在0.1?500ng/mL之間。
[0010]3.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
[0011]ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。CK-MB的ELISA測定采用的是雙抗體夾心法,其工作原理是用純化的人肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入人肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)再與HRP標(biāo)記的人肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(0D值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)濃度。ELISA方法是目前檢測CK-MB最常用的方法之一,方法操作簡單,靈敏度適中,儀器價格不高,國內(nèi)外已經(jīng)有很多檢測CK-MB的ELISA試劑盒產(chǎn)品。
[0012]4.熒光免疫分析技術(shù)(FEIA)
[0013]美國B1site生產(chǎn)的Triage Meter Plus突光免疫分析儀是由三部分組成:測試板,Triage測量器和Trige數(shù)據(jù)管理軟件。每個測試板工作原理:是由微孔層析和免疫熒光技術(shù)組成的先進的實驗機制。在測試板不同的功能區(qū)域發(fā)生不同的免疫反應(yīng),當(dāng)樣品加入加樣孔后,過濾掉血細(xì)胞和其他粒子。反應(yīng)區(qū)域含有熒光標(biāo)記了的對應(yīng)反應(yīng)的抗體或抗原,他們能和待測物質(zhì)和標(biāo)記的顆粒結(jié)合。當(dāng)病人的樣品(根據(jù)實驗要求,全血、血清或尿液)流過測試板,就會和對應(yīng)的抗體產(chǎn)生反應(yīng)而顯色。機器工作原理:機器的測量系統(tǒng)運用激光掃描標(biāo)記物和待測物結(jié)合區(qū),獲得熒光信號。然后對熒光信號進行測量,定量的對靶向待測物進行分析。在整個孵育期內(nèi),病人的樣品要不斷地流過測試板。不管是否放入測試區(qū),樣品一旦注入反應(yīng)開始。測試系統(tǒng)監(jiān)視測試板,通過讀取測試板末端的區(qū)域計算反應(yīng)。當(dāng)系統(tǒng)檢測到孵育已完成并且血樣全部充分覆蓋,它會系統(tǒng)的分析質(zhì)控區(qū)和反應(yīng)區(qū)的熒光。測量系統(tǒng)分析每個測試區(qū)的信號。判斷待測結(jié)果是否可以出示報告。同步的反應(yīng)質(zhì)控保證了測試板反應(yīng)正常,和操作過程正確完成。結(jié)果可以在LCD顯示,也可打印出來。
[0014]5.金標(biāo)免疫法
[0015]目前金標(biāo)免疫法主要是應(yīng)用到與免疫層析技術(shù)相結(jié)合的金免疫層析法(GCIA)中,該法標(biāo)本用量少,簡便快速,適合于AMI的床旁檢測。國內(nèi)外在這方面的產(chǎn)品相對較多,國外的美國普林斯頓生物醫(yī)學(xué)公司、Spectral Diagnostics公司、Cortez公司、B1seedDiagnostics公司,國內(nèi)的深圳瑞萊生物公司、北京庫爾科技公司、正元盛邦生物公司、杭州艾博生物醫(yī)藥公司等都推出了利用金標(biāo)免疫法的原理制備的CK-MB檢測卡,其基本原理均是:用兩個單克隆抗CK-MB抗體的單一結(jié)合來檢測游離CK-MB。當(dāng)樣本滴到吸收孔內(nèi),第一個抗CK-MB抗體/膠體金與CK-MB結(jié)合形成一個抗體/抗原結(jié)合體。第二個固定化的抗CK-MB抗體捕捉這個結(jié)合體,產(chǎn)生一個粉紅色的顏色帶,相對于無結(jié)合體出現(xiàn),反應(yīng)圈內(nèi)就沒有色帶。目前常見把CK-MB、cTnI和MYO三種心梗標(biāo)志物制備成心梗三合一聯(lián)卡,同時檢測心梗病人血液中的三項指標(biāo),從而更準(zhǔn)確診斷病人的心梗情況。
[0016]生物素-親和素系統(tǒng)(b1tinavidin system, BAS),是一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。隨著各種生物素衍生物的問世,BAS很快被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。將該系統(tǒng)應(yīng)用于免疫組化,酶聯(lián)免疫,熒光免疫,放射免疫等檢測技術(shù)中,可顯著地提高以上技術(shù)方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性,使方法更簡便,有助于臨床快速診斷,并利于進行大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查,成為研究免疫反應(yīng)的有力工具。由于BAS檢測系統(tǒng)經(jīng)濟快速,又無放射物質(zhì)污染,不需復(fù)雜儀器,充分顯示了此系統(tǒng)的巨大潛力和應(yīng)用的可能性。
[0017]生物素-親和素系統(tǒng)檢測原理:BAS是在常規(guī)ELISA原理的基礎(chǔ)上,結(jié)合生物素與親和素間的高度放大作用,而建立的一種檢測系統(tǒng)。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白,分子量為68kDa,由4個亞單位組成,對生物素有非常高的親和力(結(jié)合常數(shù)高達1015M-1)。生物素很易與蛋白質(zhì)(如抗體等)以共價鍵結(jié)合。這樣,結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應(yīng),既起到了多級放大作用,又由于酶在遇到相應(yīng)底物時的催化作用而呈色,達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。鏈霉親和素是與親和素有相似生物學(xué)特性的一種蛋白質(zhì),鏈霉親和素與親和素一樣分子中每條肽鏈都能結(jié)合一個生物素,因幾乎所有用于標(biāo)記的物質(zhì)均可以同親和素或鏈霉親合素結(jié)合。利用生物素-親和素系統(tǒng)研制肌酸激酶同工酶檢測試快速診斷試劑尚無報道。
實用新型內(nèi)容
[0018]本實用新型的目的,在于提供一種肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其基于雙抗體夾心法、熒光免疫側(cè)向?qū)游龊蜕锼?鏈霉親和素放大系統(tǒng),提供高靈敏度肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條。使用本實用新型時,提高了檢測靈敏度和檢測穩(wěn)定性,降低了非特異性結(jié)合,檢測時間不大于10分鐘,大大提高了診斷效率。
[0019]本實用新型解決其技術(shù)問題的解決方案是:肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其包括底板,所述底板上依次設(shè)有樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊,所述吸水墊和熒光標(biāo)記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測區(qū),所述樣品墊交疊壓在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上,所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上固定有生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體和鏈霉親和素標(biāo)記的熒光蛋白;所述檢測區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識別肌酸激酶同工酶另外一個表位的單克隆抗體構(gòu)成的檢測線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。
[0020]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊包括層疊的第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊和第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊,所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊的一端墊在樣品墊的下方,所述第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊交疊壓在硝酸纖維素膜的一端。
[0021]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊中插入樣品墊下方的一端設(shè)有定位條,所述樣品墊的下端面設(shè)有能容納定位條的定位槽。
[0022]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,還包括卡殼,所述底板、樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均置于卡殼內(nèi),所述卡殼殼面上對應(yīng)于硝酸纖維膜的位置設(shè)有觀察窗,卡殼殼面上對應(yīng)于樣品墊的位置設(shè)有加樣孔。
[0023]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述觀察窗為長方形孔。
[0024]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白等中的一種。
[0025]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述樣品墊為經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構(gòu)件。
[0026]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述底板為聚苯乙烯構(gòu)件或者聚乙烯構(gòu)件。
[0027]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述卡殼包括塑料上殼和塑料下殼,所述塑料上殼扣合塑料下殼上后形成卡殼。
[0028]本實用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比,具有如下優(yōu)點:
[0029](I)本實用新型將熒光蛋白作為標(biāo)記物,此標(biāo)記物穩(wěn)定性良好,有利于提高檢測穩(wěn)定性。
[0030](2)本實用新型通過利用“鏈霉親和素-生物素放大系統(tǒng)”,提高檢測靈敏度,降低非特異性結(jié)合,有利于提高試劑盒性能。
[0031](3)利用本實用新型進行降鈣素原的檢測時間不大于10分鐘,檢測線性范圍為
0.10ng/ml?100.00ng/ml,極大地提高了檢測效率。
[0032](4)本實用新型可通過熒光免疫分析儀對結(jié)果進行判讀,可實現(xiàn)自動化,減少主觀因素的影響,提供便利、快速、可靠的診斷結(jié)果。
[0033](5)本使用新型卡殼設(shè)有樣品進入的加樣孔和供觀測結(jié)果的觀察窗,根據(jù)分析儀器判定結(jié)果,準(zhǔn)確可靠。
[0034](6)本實用新型制作方便,體積小、便于攜帶。
[0035](7)本實用新型檢測成本較低。
[0036](8)本實用新型可批量生產(chǎn),適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場快速診斷;易于保存,有利于基層單位推廣。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0037]為了更清楚地說明本實用新型實施例中的技術(shù)方案,下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單說明。顯然,所描述的附圖只是本實用新型的一部分實施例,而不是全部實施例,本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下,還可以根據(jù)這些附圖獲得其他設(shè)計方案和附圖。
[0038]圖1是本實用新型實施例一的結(jié)構(gòu)示意圖;
[0039]圖2是本實用新型實施例二的結(jié)構(gòu)示意圖;
[0040]圖3是本實用新型實施例三的結(jié)構(gòu)示意圖;
[0041]圖4是本實用新型實施例四的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實施方式】
[0042]以下將結(jié)合實施例和附圖對本實用新型的構(gòu)思、具體結(jié)構(gòu)及產(chǎn)生的技術(shù)效果進行清楚、完整地描述,以充分地理解本實用新型的目的、特征和效果。顯然,所描述的實施例只是本實用新型的一部分實施例,而不是全部實施例,基于本實用新型的實施例,本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的其他實施例,均屬于本實用新型保護的范圍。另外,文中所提到的所有聯(lián)接/連接關(guān)系,并非單指構(gòu)件直接相接,而是指可根據(jù)具體實施情況,通過添加或減少聯(lián)接輔件,來組成更優(yōu)的聯(lián)接結(jié)構(gòu)。
[0043]參照圖1,肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其包括底板5,所述底板5上依次設(shè)有樣品墊1、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2、硝酸纖維素膜3和吸水墊4,所述吸水墊4和熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2分別交疊壓在硝酸纖維素膜3的兩端后在硝酸纖維素膜3的表面形成檢測區(qū),熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2為玻璃纖維膜,所述樣品墊I交疊壓在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2上,所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2上固定有生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體(濃度0.3?
1.5mg/mL)和鏈霉親和素標(biāo)記(或親和素)的熒光蛋白(使用激發(fā)光波長530nm,發(fā)射光波長570nm,濃度0.1?1.0mg/mL);所述檢測區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜3上固定有識別肌酸激酶同工酶另外一個表位的單克隆抗體構(gòu)成的檢測線T(濃度0.5?3mg/mL)和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線C(濃度0.2?2.0mg/mL),質(zhì)控線C用于檢測試紙條的有效性。
[0044]將生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體和鏈霉親和素(或親和素)標(biāo)記的熒光蛋白固定在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2上,將有識別肌酸激酶同工酶另外一個表位的單克隆抗體和羊抗鼠IgG多克隆抗體固定于硝酸纖維素膜上分別作為檢測線T和質(zhì)控線C。當(dāng)待測樣品加到樣品墊I上后,通過層析作用向前移動,樣品中肌酸激酶同工酶與熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2上結(jié)合熒光標(biāo)記物(熒光蛋白)的肌酸激酶同工酶抗體(Mab-CK-MB*Fluoro)反應(yīng)形成復(fù)合物CK-MB-Mab-CK-MB*Fluoro,在層析作用下反應(yīng)復(fù)合物繼續(xù)向前移動經(jīng)過硝酸纖維膜上包被的CK-MB抗體(檢測線)時,反應(yīng)復(fù)合物被包被的CK-MB抗體捕獲形成復(fù)合物(Mab-CK-MB-CK-MB-Mab-CK-MB^Fluoro)(檢測線),通過熒光免疫分析儀讀取檢測線的反應(yīng)信號,在激發(fā)光源的作用下,熒光物質(zhì)發(fā)射特定波長的熒光信號,熒光免疫分析儀俘獲熒光信號,通過信號轉(zhuǎn)化及設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線自動轉(zhuǎn)化為定量數(shù)值,計算出樣本中肌酸激酶同工酶的濃度,得到肌酸激酶同工酶檢測結(jié)果。
[0045]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,參照圖3,所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2包括層疊的第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊20和第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊21,所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊20的一端墊在樣品墊I的下方,所述第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊21交疊壓在硝酸纖維素膜3的一端。熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2的分層設(shè)置,便于將熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2安裝在樣品墊I和硝酸纖維素膜3之間。
[0046]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,參照圖3所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊20中插入樣品墊下方的一端設(shè)有定位條22,所述樣品墊I的下端面設(shè)有能容納定位條22的定位槽。通過定位條22便于熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2和樣品墊I之間的安裝固定。
[0047]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,參照圖2和圖4,還包括卡殼,所述底板5、樣品墊1、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊2、硝酸纖維素膜3和吸水墊4均置于卡殼6內(nèi),所述卡殼6殼面上對應(yīng)于硝酸纖維膜3的位置設(shè)有觀察窗8,卡殼6殼面上對應(yīng)于樣品墊I的位置設(shè)有加樣孔7。
[0048]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述觀察窗8為長方形孔。
[0049]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白等中的一種。
[0050]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述樣品墊I為經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構(gòu)件。樣品墊由玻璃纖維構(gòu)成,經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理,干燥后使用。所述樣品墊I的裁剪寬度為0.3?0.5cm
[0051]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述底板5為聚苯乙烯構(gòu)件或者聚乙烯構(gòu)件。
[0052]作為上述技術(shù)方案的進一步改進,所述卡殼6包括塑料上殼60和塑料下殼61,所述塑料上殼61扣合塑料下殼61上后形成卡殼6。
[0053]以上是對本實用新型的較佳實施方式進行了具體說明,但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述實施例,熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不違背本實用新型精神的前提下還可作出種種的等同變型或替換,這些等同的變型或替換均包含在本申請權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:其包括底板,所述底板上依次設(shè)有樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊,所述吸水墊和熒光標(biāo)記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測區(qū),所述樣品墊交疊壓在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上,所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上固定有生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體和鏈霉親和素標(biāo)記的熒光蛋白;所述檢測區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識別肌酸激酶同工酶另外一個表位的單克隆抗體構(gòu)成的檢測線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊包括層疊的第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊和第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊,所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊的一端墊在樣品墊的下方,所述第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊交疊壓在硝酸纖維素膜的一端。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊中插入樣品墊下方的一端設(shè)有定位條,所述樣品墊的下端面設(shè)有能容納定位條的定位槽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項所述的肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:還包括卡殼,所述底板、樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均置于卡殼內(nèi),所述卡殼殼面上對應(yīng)于硝酸纖維膜的位置設(shè)有觀察窗,卡殼殼面上對應(yīng)于樣品墊的位置設(shè)有加樣孔。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:所述觀察窗為長方形孔。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白等中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:所述樣品墊為經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構(gòu)件。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:所述底板為聚苯乙烯構(gòu)件或者聚乙烯構(gòu)件。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的肌酸激酶同工酶免疫層析定量檢測試紙條,其特征在于:所述卡殼包括塑料上殼和塑料下殼,所述塑料上殼扣合塑料下殼上后形成卡殼。
【文檔編號】G01N33/70GK204188624SQ201420645292
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月28日
【發(fā)明者】盧艷華, 宋建勛, 王小明, 夏坤, 佟順剛 申請人:廣州天寶頌原生物科技開發(fā)有限公司