基于雙粒徑熒光微球的試紙條和試紙卡的制作方法
【專利摘要】本實用新型提供了一種試紙條，所述試紙條包括樣品接收層、結(jié)合層、包被層及吸水層，其中所述接收層、結(jié)合層、包被層及吸水層順序排列并依次搭接，所述結(jié)合層進一步包被有由兩種不同粒徑大小的熒光微球分別標記的第一抗體和由生物素標記的第二抗體，所述包被層具有相間隔的檢測帶和質(zhì)控帶，所述檢測帶固定有親和素，所述質(zhì)控帶固定有抗鼠IgG的抗體。本實用新型還提供了一種試紙卡。本實用新型的試紙條和試紙卡具有高靈敏性、使用方便等優(yōu)點。
【專利說明】基于雙粒徑熒光微球的試紙條和試紙卡
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種用于免疫檢測的試紙條，具體涉及一種基于兩種不同粒徑的熒光微球的試紙條。本實用新型還涉及一種試紙卡。
【背景技術(shù)】
[0002]目前臨床常用的方法包括:膠乳增強免疫比濁法、酶聯(lián)免疫法、化學發(fā)光法、膠體金免疫層析法、熒光免疫層析法等。膠乳增強免疫比濁法雖實現(xiàn)高通量篩選，但由于某些待測物所需的檢測靈敏度要求高，導致檢測時低值樣品CV值過大。酶聯(lián)免疫法及化學發(fā)光法雖可以定量準確，但是對于某些疾病的判定方面其檢測耗時過長，大大延誤了可能需要的治療。膠體金免疫層析法操作簡單，但只能實現(xiàn)半定量。
[0003]但對于靈敏度要求極高的某些待測物如心肌肌鈣蛋白I的檢測而言(低值需要檢測到0.lng/ml)，目前的熒光免疫層析法所采用的熒光微球法存在一定的缺陷。大粒徑熒光微球檢測的線性范圍不夠，因此高值檢測不準確。小粒徑熒光微球檢測的低端的測值不準確，CV值過大。此外，目前對于基于上述檢測方法所開發(fā)的試紙條和/或試紙卡也存在工藝復雜、成本高、靈敏性和準確性差等諸多問題。
[0004]因此，仍然需要一種能實現(xiàn)精確檢測且能滿足產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模應用的試紙條和/或試紙卡。
實用新型內(nèi)容
[0005]摶術(shù)問題
[0006]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的工藝流程復雜且檢測靈敏度和線性范圍亟需改進的問題，本實用新型提供了一種具有四組成構(gòu)件且使用兩種不同粒徑大小的熒光微球的試紙條。_7] 技術(shù)方案
[0008]一方面，本實用新型提供了一種基于雙粒徑熒光微球的試紙條，其特征在于，所述試紙條包括順序排列并依次搭接的以下部件:
[0009]i)用于接收待測樣品的接收層，
[0010]ii)包被有由兩種不同粒徑大小的熒光微球分別標記的第一抗體和由生物素標記的第二抗體的結(jié)合層，
[0011]iii)具有相間隔的檢測帶和質(zhì)控帶的包被層，其中所述檢測帶固定有親和素，所述質(zhì)控帶固定有抗鼠IgG的抗體，和
[0012]iv)吸水層。
[0013]在一個實施方式中，所述兩種不同粒徑大小的熒光微球的粒徑大小范圍在30nm-600nm 之間。
[0014]在一個實施方式中，所述兩種不同粒徑大小的熒光微球的粒徑大小范圍在100nm_400nm 之間。
[0015]在一個實施方式中，所述兩種不同粒徑大小的熒光微球的粒徑大小為10nm和300nmo
[0016]在一個實施方式中，所述檢測帶和所述質(zhì)控帶之間的間隔在0.1-0.6cm之間。
[0017]在一個實施方式中，所述試紙條包括布置有接收層、結(jié)合層、包被層及吸水層的底板。
[0018]在一個實施方式中，所述試紙條的寬度在0.2cm_lcm之間。
[0019]在一個實施方式中，所述焚光微球上具有選自以下的焚光物質(zhì):Cy3焚光素、Cy5熒光素、異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明和四甲基異硫氰酸羅丹明。
[0020]在一個實施方式中，所述第一抗體和第二抗體識別同種蛋白的不同表位，所述蛋白選自以下組中:心肌肌鈣蛋白1、N末端腦鈉肽前體、D-二聚體、心型脂肪酸結(jié)合蛋白、降媽素原和C反應蛋白。
[0021]另一方面，本實用新型提供了一種基于雙粒徑熒光微球的試紙卡，所述試紙卡包括:
[0022]i)前述任一項實施方式所述的試紙條，和
[0023]ii)包覆前述任一項實施方式所述的試紙條的外殼，其中所述外殼包括:
[0024]i1-Ι)設(shè)置有加樣孔和檢測孔的卡蓋，其中所述加樣孔開口于所述接收層的上側(cè)，以暴露出所述接收層的部分區(qū)域，所述檢測孔開口于所述包被層的上側(cè)，以暴露出所述檢測帶和所述質(zhì)控帶的全部區(qū)域，和
[0025]i1-2)與所述卡蓋彼此連接的底座。
[0026]有益效果
[0027]本實用新型的試紙條和試紙卡的主要優(yōu)點包括:
[0028]應用兩種不同粒徑的熒光微球，極好的克服了單熒光微球存在的低值靈敏度和檢測線性范圍無法兼顧的問題；
[0029]通過引入生物素親和素級聯(lián)放大系統(tǒng)，進一步提高了檢測靈敏度；
[0030]將熒光標記的抗體與生物素標記的抗體同時整合到單一結(jié)合層上的設(shè)計簡化了生產(chǎn)工藝及流程；
[0031]試紙條形狀和結(jié)構(gòu)的設(shè)計充分考慮了通過熒光檢測儀讀取結(jié)果的需要，使得試紙條具有更廣泛的應用空間；和
[0032]試紙卡易于攜帶和保存，易于實現(xiàn)在相應的熒光檢測儀中對試紙條檢測結(jié)果的分析。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0033]圖1本實用新型的試紙條的俯視圖。
[0034]圖2-4本實用新型另一實施方式的試紙條的側(cè)視圖。
[0035]圖5本實用新型的試紙卡的俯視圖。
[0036]圖6本實用新型另一實施方式的試紙卡的俯視圖。
[0037]附圖標記:
[0038]I接收層、2結(jié)合層、3包被層、4吸水層、5底板、6大粒徑熒光微球、7小粒徑熒光微球、8檢測帶、9質(zhì)控帶、10卡蓋、11底座、12加樣孔和13檢測孔。
【具體實施方式】
[0039]下文中將參照附圖來更詳細地描述示例性實施方式。所述附圖用于圖示說明本實用新型，而非對其進行限制。在附圖中，為了清楚的說明，放大了試紙條部分區(qū)域的尺寸及其相對比例。
[0040]圖1是本實用新型的試紙條的俯視圖。如圖1所述，本實用新型的試紙條包括接收層1、結(jié)合層2、包被層3、吸水層4和底板5，結(jié)合層2上具有包被有由大粒徑熒光微球6和小粒徑熒光微球7分別標記的一種抗體以及由生物素標記的另一種抗體，包被層具有相間隔的檢測帶8和質(zhì)控帶9。
[0041]接收層I用于接收樣品，其在試紙條的結(jié)構(gòu)中與結(jié)合層2搭接。本實用新型的試紙條在傳統(tǒng)試紙條的基礎(chǔ)上采用單獨的接收層I來接收樣品。接收層I可由選自玻璃纖維素膜或者聚酯膜、棉纖的材料制成，優(yōu)選由玻璃纖維素膜制成。接收層I可以起到樣品過濾的作用。例如，當待檢測樣品為血漿、血清時，接收層可以過濾樣品中的顆粒性不溶物。本實用新型的試紙條所適合檢測的樣品包括但不限于血清、血漿、尿液。在一個實施方式中，接收層所接收的樣品為血漿。在另一個實施方式中，接收層所接收的樣品為血清。
[0042]結(jié)合層2用于布置與待測樣品中特定蛋白反應的抗體。結(jié)合層2位于接收層I和包被層3之間，且分別與接收層I和包被層3搭接。本實用新型的試紙條的結(jié)合層2上布置有特異性結(jié)合樣品中特定蛋白的一種抗體，此抗體由兩種不同粒徑大小的熒光微球6和7分別標記。大粒徑的熒光微球標記的抗體有利于低值的檢測以達到靈敏度的要求，而小粒徑的熒光微球標記的抗體使得檢測的線性范圍可覆蓋高值區(qū)域。因此，由于采用兩種粒徑大小的熒光微球，使得本實用新型的試紙條可同時實現(xiàn)高靈敏度和寬檢測線性范圍的要求。
[0043]在一個實施方式中，所述兩種不同粒徑大小的熒光微球的粒徑大小范圍在30nm-600nm之間，優(yōu)選在100nm-400nm之間，更優(yōu)選在100nm-300nm之間。在一個實施方式中，所述兩種不同粒徑大小的熒光微球的粒徑大小分別為10nm和300nm。
[0044]在一個實施方式中，所述焚光微球上具有選自以下的焚光物質(zhì):Cy3焚光素、Cy5熒光素、異硫氰酸熒光素(FITC)、四乙基羅丹明(TAMRA)和四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)。在一個實施方式中，熒光微球上具有Cy5熒光素。
[0045]本實用新型的試紙條的結(jié)合層2上進一步布置特異性結(jié)合樣品中特定蛋白的另一種抗體，此抗體由生物素標記(未示出)。由熒光微球標記的抗體與由生物素標記的抗體分別特異性結(jié)合相同蛋白的不同表位。本實用新型的試紙條通過將熒光標記的抗體與生物素標記的抗體同時整合到單一結(jié)合層2上，大大簡化了生產(chǎn)工藝及流程。
[0046]本實用新型的試紙條上的抗體可特異性結(jié)合選自以下組中的蛋白:心肌肌鈣蛋白I (cTnl)、N末端腦鈉肽前體(NT-proBNP)、D- 二聚體(D-Dimer)、心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)、降鈣素原(PCT)和C反應蛋白(CRP)。。在一個實施方式中，所述蛋白為心肌肌鈣蛋白1
[0047]在一個實施方式中，本實用新型的試紙條上的抗體為抗心肌肌鈣蛋白I的抗體，其中一種抗體是分別由不同粒徑大小的熒光微球標記的抗心肌肌鈣蛋白I的抗體，另一種抗體為由生物素標記的抗心肌肌鈣蛋白I的抗體，兩種抗心肌肌鈣蛋白I的抗體分別特異性結(jié)合相同心肌肌鈣蛋白I的不同表位。
[0048]結(jié)合層2可由選自玻璃纖維素膜或者聚酯膜、玻纖硝纖混合膜的材料制成，優(yōu)選由聚酯膜制成。在一個實施方式中，結(jié)合層2的材料可與接收層I相同。在另一個實施方式中，結(jié)合層2的材料可與接收層I不同。
[0049]包被層3用于布置與檢測帶8和質(zhì)控帶9。結(jié)合層3位于結(jié)合層2和吸水層4之間，且分別與結(jié)合層2和吸水層4搭接。檢測帶8上固定有親和素。本實用新型的試紙條通過采用雙抗體夾心法并同時引入生物素-親和素級聯(lián)放大系統(tǒng)，進一步提高了檢測靈敏度。質(zhì)控帶9固定有抗鼠IgG的抗體。質(zhì)控帶9用于確定反應體系是否成立，并通過計算檢測帶8與質(zhì)控帶9的熒光信號值以精確進行定量。
[0050]包被層3中檢測帶8和質(zhì)控帶9的寬度在0.4mm至2.0mm之間，以確保所需檢測能夠完成且最大程度的節(jié)約抗體。在一個實施方式中，檢測帶8和質(zhì)控帶9的寬度在0.6mm至1.8mm之間，優(yōu)選0.8mm至1.4mm之間。此外，檢測帶8和質(zhì)控帶9之間的間隔可以在0.05cm至0.8cm之間。在一個實施方式中，檢測帶和質(zhì)控帶之間的間隔在0.1cm至0.6cm之間，優(yōu)選在0.3cm至0.5cm之間。
[0051]包被層3可由選自由硝酸纖維素膜、尼龍膜、PVDF膜、玻纖硝纖混合膜的材料制成，優(yōu)選由硝酸纖維素膜制成。
[0052]吸水層4與包被層3搭接。吸水層4可由選自由棉絨、玻纖的材料制成，優(yōu)選由棉絨制成。
[0053]本實用新型的試紙條可選地包括布置有接收層1、結(jié)合層2、包被層3及吸水層4的底板5。底板5的長度和寬度可以與接收層1、結(jié)合層2、包被層3及吸水層4順序搭接后的長度和寬度一樣，或者更大。優(yōu)選底板5的長度和寬度可以與接收層1、結(jié)合層2、包被層3及吸水層4順序搭接后的長度和寬度一樣。
[0054]本實用新型的試紙條的長度在5cm至15cm之間，優(yōu)選8cm至1cm之間。本實用新型的試紙條的寬度在0.2cm至Icm之間，優(yōu)選在0.2cm至0.8cm之間，優(yōu)選在0.2cm至0.5cm之間，優(yōu)選在0.2cm至0.3cm之間，最優(yōu)選為0.3cm。本實用新型的試紙條在提供靈敏度和檢測線性范圍的同時，通過降低試紙條的長度和/或?qū)挾瓤山档涂贵w的用量，大大節(jié)約了生產(chǎn)成本。
[0055]圖2-4分別是顯示本實用新型的試紙條的側(cè)視圖。需要說明，圖2-4均是本實用新型的試紙條的示例圖，均不構(gòu)成對本實用新型范圍的限制。對圖2-4不再進行重復描述。
[0056]圖5是本實用新型的試紙卡的俯視圖。
[0057]如圖5所述，本實用新型還提供了一種試紙卡，所述試紙卡包括前述的試紙條和包覆試紙條的外殼，其中所述試紙卡的外殼包括卡蓋10和底座11，卡蓋10上設(shè)置有加樣孔12和檢測孔13，以暴露出試紙條的局部區(qū)域。本實用新型通過將試紙條組裝于彼此相互緊扣的卡蓋10和底座11中可制備出試紙卡。加樣孔12位于接收層I的上側(cè)，以暴露出接收層I的部分區(qū)域。檢測孔13位于包被層3的上側(cè)，以暴露出檢測帶8和質(zhì)控帶9的全部區(qū)域?？ㄉw10和底座11均可由諸如塑料制成。
[0058]在一個實施方式中，加樣孔12的長度在0.05cm至0.6cm之間，優(yōu)選0.1cm至0.5cm之間ο在一個實施方式中，加樣孔12的寬度在0.15cm至0.45cm之間，優(yōu)選0.2cm至0.4cm之間。在一個實施方式中，檢測孔13的長度在0.8cm至2.5cm之間，優(yōu)選1.0cm至2.0cm之間。在一個實施方式中，檢測孔13的寬度在0.15cm至0.45cm之間，優(yōu)選0.2cm至0.4cm之間。
[0059]加樣孔12和檢測孔13可以為長方形、正方形、圓形、橢圓形等形狀。在一個實施方式中，加樣孔12為圓形，檢測孔13為長方形。
[0060]試紙卡易于攜帶和保存。更重要地是，試紙卡可實現(xiàn)在相應的熒光檢測儀中對試紙條檢測結(jié)果的分析。
[0061]圖6是本實用新型另一實施方式的試紙卡的俯視圖。對圖6不再進行重復描述。
[0062]實施例
[0063]以下實施例用于說明本實用新型，但不應理解為限于在此闡述的實施例。
[0064]下述實施例中，所述心肌肌鈣蛋白I第一抗體、心肌肌鈣蛋白I第二抗體、抗鼠IgG抗體、Cy3焚光素標記的焚光微球、Cy5焚光素標記的焚光微球、異硫氰酸焚光素(FITC)標記的熒光微球、四乙基羅丹明(TAMRA)標記的熒光微球、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)標記的熒光微球、親和素、生物素、2-(N-嗎啡啉)乙磺酸(MES)、碳二亞胺(EDC)、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、二甲基甲酰胺(DMF)、N，N' - 二環(huán)己基碳二亞胺
[0065](DCC)、吡啶、牛血清白蛋白(BSA)、TWeen-20、海藻糖、玻璃纖維素膜、聚酯膜、硝酸纖維素膜、高強度吸水紙均為市售產(chǎn)品。
[0066]所述應用兩種不同粒徑熒光微球檢測心肌肌鈣蛋白I的熒光免疫層析試紙卡的制備方法為:
[0067]I)接收層的制備
[0068]將玻璃纖維素膜或者聚酯膜放入接收層處理液(含有I % BSA和0.1 % Tween-20的0.1M，ρΗ8.0-8.6的硼酸-硼砂緩沖液或者含有I % BSA和0.1 % Tween-20的0.05M，PH7.4-8.2的Tris-HCl緩沖液)中浸泡處理3_5小時后，于35_39°C鼓風干燥箱中烘干3_5小時。
[0069]2)結(jié)合層的制備
[0070]A、結(jié)合層的預處理
[0071]將玻璃纖維素膜或者聚酯膜放入結(jié)合層處理液(含有I % BSA和0.1 % Tween-20的0.1M，ρΗ8.0-8.6的硼酸-硼砂緩沖液或者含有I % BSA和0.1 % Tween-20的0.05M，PH7.4-8.2的Tris-HCl緩沖液)中浸泡處理3_5小時后，于35_39°C鼓風干燥箱中烘干3_5小時。
[0072]B、標記抗體的兩種不同粒徑熒光微球的制備
[0073]將心肌肌鈣蛋白I第一抗體以0.1M，pH8.0-8.6的硼酸-硼砂緩沖液4°C透析過夜，調(diào)整濃度為2mg/ml-5mg/ml。
[0074]使用0.05M，pH4.5-5.0的2_(N_嗎啡啉)乙磺酸(MES)活化緩沖液洗滌的小粒徑焚光微球(選自Cy3焚光素標記的焚光微球、Cy5焚光素標記的焚光微球、異硫氰酸焚光素(FITC)標記的熒光微球、四乙基羅丹明(TAMRA)標記的熒光微球、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)標記的熒光微球中的任意一種)，加入碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)使二者終濃度均為15-60mmol，室溫反應20-30分鐘，充分洗滌熒光微球，用0.05M，pH8.0-8.6的硼酸-硼砂緩沖液復溶后加入透析過的第一抗體，使第一抗體與熒光微球的質(zhì)量比為1: 8至1: 60，室溫反應2小時后，加入含有10% BSA的0.02M，pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液室溫封閉30分鐘，充分洗滌熒光微球，用含有1% BSA和0.1% Tween-20的0.05M，pH7.4-8.2的Tris-HCl緩沖液的保存液復溶至原體積。
[0075]使用0.05M，pH4.5-5.0的2_(N_嗎啡啉)乙磺酸(MES)活化緩沖液洗滌的大粒徑焚光微球(選自Cy3焚光素標記的焚光微球、Cy5焚光素標記的焚光微球、異硫氰酸焚光素(FITC)標記的熒光微球、四乙基羅丹明(TAMRA)標記的熒光微球、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)標記的熒光微球中的任意一種)，加入碳二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)使二者終濃度均為15-60mmol，室溫反應20-30分鐘，充分洗滌熒光微球，用0.05M，pH8.0-8.6的硼酸-硼砂緩沖液復溶后加入透析過的第一抗體，使第一抗體與熒光微球的質(zhì)量比為1: 20至1: 80，室溫反應2小時后，加入含有10% BSA的0.02M，pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液室溫封閉30分鐘，充分洗滌熒光微球，用含有1% BSA和0.1% Tween-20的0.05M，pH7.4-8.2的Tris-HCl緩沖液的保存液復溶至原體積。
[0076]將上述標記第一抗體的兩種不同粒徑的熒光微球按1: 10到10: I的比例進行混勻，即制備出標記抗體的兩種不同粒徑熒光微球。
[0077]C、生物素化抗體的制備
[0078]將心肌肌鈣蛋白I第二抗體以0.02M，pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液4°C透析過夜，調(diào)整濃度為5mg/ml-10mg/ml。
[0079]生物素的預活化:準確稱取300mg生物素溶解于8ml的二甲基甲酰胺(DMF)中，室溫條件下加入183mg的N-輕基琥泊酰亞胺(NHS)，304mg的N，N' - 二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)及0.1ml的吡啶，將反應混合物在室溫下攪拌24小時。過濾除去反應產(chǎn)生的尿素，濾液濃縮后通過硅膠柱色譜純化，在異丙醇中重結(jié)晶得到的白色固體即為預活化的生物素。
[0080]用二甲基甲酰胺(DMF)溶解預活化的生物素，使其終濃度為0.05M，并加入到透析過的第二抗體中，使得第二抗體與生物素的摩爾比為1: 10-1: 25，室溫反應I小時，以0.02M，pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液4°C透析過夜。
[0081]D、結(jié)合層的制備
[0082]將上述步驟B制備獲得的標記抗體的兩種不同粒徑熒光微球與步驟C制備獲得的生物素化抗體充分混勾，使用定量噴膜儀以2 μ l/cm-8 μ 1/cm均勾噴涂于上述步驟A中預處理過的玻璃纖維素膜或者聚酯膜上，于35_39°C鼓風干燥箱中烘干2-4小時，加入干燥劑封存?zhèn)溆谩?br>
[0083]3)包被層的制備
[0084]A、檢測帶的制備:使用包被液(含有0.1-10%海藻糖的0.01-0.02M，ρΗ7.4-8.2的Tris-HCl緩沖液)將親和素稀釋到lmg/ml-5mg/ml的濃度，使用定量噴膜儀以1.2 μ I/cm均勻噴涂于硝酸纖維素膜上，于35-39°C鼓風干燥箱中烘干2_4小時。
[0085]B、質(zhì)控帶的制備:使用包被液(含有0.1-10%海藻糖的0.01-0.02M，ρΗ7.4-8.2的Tris-HCl緩沖液)將抗小鼠IgG稀釋到0.5mg/ml-3mg/ml的濃度，使用定量噴膜儀以0.8 μ 1/cm均勻噴涂于硝酸纖維素膜上，于35-39°C鼓風干燥箱中烘干2_4小時。
[0086]C、包被層的制備:用封閉液(含有1-10% BSA和1-10%海藻糖的0.01-0.02M，PH7.4-8.2的Tris-HCl緩沖液)將含有檢測帶和質(zhì)控帶的硝酸纖維素膜封閉1_2小時，取出后置35-39°C鼓風干燥箱中烘干2-4小時，封袋備用。
[0087]4)試紙條的組裝
[0088]在濕度小于30%，溫度20_30°C條件下進行試紙條的組裝。底板選用PVC材料，在底板同一面的方向順次連接且相鄰部位部分重疊的接收層、結(jié)合層、包被層及吸水層。在包被層粘覆底板時，檢測帶的位置靠近結(jié)合層，質(zhì)控帶的位置靠近吸水層。吸水層為高強度吸水紙。組裝好后裁剪成試紙條。
[0089]5)試紙卡的組裝
[0090]在濕度小于30%，溫度20_30°C條件下進行試紙卡的組裝。將上述試紙條置于塑料底座的中間位置，使試紙條的底板與塑料底座相連，并扣合塑料卡蓋?？ㄉw上設(shè)置有加樣孔和檢測孔，加樣孔開口于接收層的上側(cè)，暴露出接收層的部分區(qū)域，檢測孔開口于所述包被層的上側(cè)，暴露出檢測帶和質(zhì)控帶的全部區(qū)域。
[0091]6)校準品及待檢樣品的測定
[0092]將100 μ I的標準品或者待檢樣品加入到試紙卡的加樣孔，進行免疫層析反應，10-15分鐘后將試紙卡置于專門的熒光檢測儀中，通過讀取熒光信號的大小進行定量測定。
[0093]以上實施例僅是為了清楚地說明所做的舉例，并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上可以做出其他的改進和潤飾，這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引申的顯而易見的改進和潤飾仍處在本實用新型的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于雙粒徑熒光微球的試紙條，其特征在于，所述試紙條包括順序排列并依次搭接的以下部件: i)用于接收待測樣品的接收層， ii)包被有由兩種不同粒徑大小的熒光微球分別標記的第一抗體和由生物素標記的第二抗體的結(jié)合層， iii)具有相間隔的檢測帶和質(zhì)控帶的包被層，其中所述檢測帶固定有親和素，所述質(zhì)控帶固定有抗鼠IgG的抗體，和 iv)吸水層。
2.如權(quán)利要求1的試紙條，其特征在于，所述兩種不同粒徑大小的熒光微球的粒徑大小范圍在30nm-600nm之間。
3.如權(quán)利要求1的試紙條，其特征在于，所述兩種不同粒徑大小的熒光微球的粒徑大小范圍在100nm-400nm之間。
4.如權(quán)利要求1的試紙條，其特征在于，所述兩種不同粒徑大小的熒光微球的粒徑大小為 10nm 和 300nm。
5.如權(quán)利要求1的試紙條，其特征在于，所述檢測帶和所述質(zhì)控帶之間的間隔在0.1-0.6cm 之間 ο
6.如權(quán)利要求1的試紙條，其特征在于，所述試紙條包括布置有接收層、結(jié)合層、包被層及吸水層的底板。
7.如權(quán)利要求1的試紙條，其特征在于，所述試紙條的寬度在0.2cm-lcm之間。
8.如權(quán)利要求1-7中任一項的試紙條，其特征在于，所述第一抗體和第二抗體識別同種蛋白的不同表位，所述蛋白選自以下組中:心肌肌鈣蛋白1、N末端腦鈉肽前體、D-二聚體、心型脂肪酸結(jié)合蛋白、降鈣素原和C反應蛋白。
9.一種基于雙粒徑焚光微球的試紙卡，其特征在于，所述試紙卡包括: i)權(quán)利要求1-8中任一項所述的試紙條，和 ?)包覆權(quán)利要求1-8中任一項所述的試紙條的外殼，其中所述外殼包括: ?-l)設(shè)置有加樣孔和檢測孔的卡蓋，其中所述加樣孔開口于所述接收層的上側(cè)，以暴露出所述接收層的部分區(qū)域，所述檢測孔開口于所述包被層的上側(cè)，以暴露出所述檢測帶和所述質(zhì)控帶的全部區(qū)域，和 ?-2)與所述卡蓋彼此連接的底座。
【文檔編號】G01N33/68GK204228722SQ201420674090
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月13日
【發(fā)明者】戈軍, 李鼎鋒, 岳洋, 宋芳, 聶聰, 程海, 朱世偉, 劉勇 申請人:江蘇達駿生物科技有限公司