本發(fā)明涉及一種豬肉中磺胺類、喹諾酮類獸藥殘留的檢測方法，屬于儀器檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中，魚肉、雞肉、豬肉等動物源食品在飼養(yǎng)環(huán)節(jié)中往往在飼料中使用大量的抗生素來輔助預(yù)防和治療疾病。但是，這些藥物的濫用或者不恰當?shù)氖褂每赡軙θ梭w造成潛在的危害。于是，獸藥殘留的問題也逐漸成為人們普遍關(guān)注的社會焦點。
目前的獸藥前處理技術(shù)主要包括：液液萃取、固相萃取及quechers等。液液萃取法操作時間冗長，使用較多對人體與環(huán)境有害的有機溶劑。固相萃取法常用于凈化微量或痕量物質(zhì)，對于復(fù)雜基質(zhì)會存在回收率低、易堵塞填料等不足。quechers技術(shù)一般以乙腈或酸化乙腈為提取劑，以c18、石墨烯等作為吸附劑吸附雜質(zhì)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種能同時檢測動物源食品中33種磺胺類、喹諾酮類獸藥殘留的方法，利用高效液相色譜串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜方法，用酸化乙腈作為提取劑，正己烷作為凈化劑，從而快速檢測動物源食品樣品中的獸藥殘留。
本發(fā)明提供的方法包括下列步驟：
(1)標準工作溶液的配制：
將常見的17種磺胺類及16種喹諾酮類獸藥分別用乙腈定容配制成質(zhì)量濃度為1000mg/l的單標準儲存液，置于棕色瓶中，-20℃儲藏。將上述儲存液用乙腈稀釋為1.0mg/l的混合標準儲存液備用。
(2)樣品前處理：
取0.5g肉沫于15ml離心管中，加入2ml1％甲酸乙腈，劇烈震蕩5min，在室溫條件下，4500rmp離心10min；取上清液，加入2ml正己烷震蕩2min，靜置分層，去掉上層正己烷層，重復(fù)去脂一次。上清液用水稀釋一倍，然后過0.22μm濾膜上機測試。
(3)液質(zhì)分離檢測：
流動相a：0.1％甲酸水溶液，流動相b：乙腈；柱溫：40℃，流速：0.3ml/min。進樣量：10μl。
梯度洗脫程序：
0～2min，5％b～20％b；2～7min，20％b～55％b；7～9min，55％b；9～13min，55％b～90％b；13～16min，90％b；16～16.5min，90％～5％b；16.5～21min，5％b。
本發(fā)明采用上述方法檢測魚肉、雞肉、豬肉等動物源食品中的獸藥殘留。
本發(fā)明的有益效果：
一般情況下，建立獸藥定量方法時采用三重四極桿質(zhì)譜，然而對于前處理簡便，基質(zhì)復(fù)雜的情況下，三重四極桿選擇性具有一定的局限性，可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準確。對于高分辨質(zhì)譜而言，分子量是準確測量，具有很強的選擇性。本方法以復(fù)雜基質(zhì)豬肉為例，采用tripletof5600+建立了2類33種獸藥的快速定量分析方法，對于采用高分辨質(zhì)譜定量分析常規(guī)藥物而言具有重要的參考意義。
具體實施方式
以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。以復(fù)雜基質(zhì)豬肉為例，采用tripletof5600+建立了2類33種獸藥的快速定量分析方法。
實施例1
取0.5g豬肉于15ml離心管中，分別添加2和10μg/kg兩個水平的33種獸藥混合標準溶液，加入2.00ml1％甲酸乙腈，劇烈震蕩5min，在室溫條件下，4500rmp離心10min；取上清液，加入2.00ml正己烷震蕩2min，靜置分層，去掉上層正己烷層，重復(fù)去脂一次。上清液用水稀釋一倍，然后過0.22μm濾膜，平行測定每個水平的加標樣品各3次，供液質(zhì)分析。
實施例2標準曲線及檢測限
取0.5g豬肉于15ml離心管中，加入2.00ml1％甲酸乙腈，劇烈震蕩5min，在室溫條件下，4500rmp離心10min；取上清液，加入2.00ml正己烷震蕩2min，靜置分層，去掉上層正己烷層，重復(fù)去脂一次。濃縮至干后，加入1.00ml混合標準溶液復(fù)溶，渦旋混勻，過0.22μm濾膜，配制3個水平的基質(zhì)匹配混合標準溶液，以目標化合物定量離子的峰面積(y)為縱坐標、質(zhì)量濃度(x，μg/l)為橫坐標繪制曲線，相關(guān)系數(shù)r為0.99004～0.99995，線性關(guān)系良好。以定量離子信噪比s/n＝3確定樣品的檢出限(lod)，s/n＝10為定量下限(loq)。
結(jié)果表明，33種獸藥的lod為0.8～2.4μg/kg，loq為2.67～8.00μg/kg。具體結(jié)果見表1。
表1各組分基質(zhì)匹配線性方程、相關(guān)系數(shù)(r)、檢出限和定量限
實施例3回收率實驗
按實施例1方法，在空白豬肉樣品中添加33種獸藥混合標準溶液，加標量分別為2和10μg/kg的加標樣品，按上述前處理方法及測定條件進行回收率試驗，每個添加水平做3次平行測定。各化合物的平均回收率為69.53％～120.80％，相對標準偏差(rsd)為1.09％～9.98％，符合多殘留分析的要求。
表2豬肉樣品中加標回收率以及精密度
實施例4液質(zhì)分離檢測
流動相a：0.1％甲酸水溶液，流動相b：乙腈；柱溫：40℃，流速：0.3ml/min。進樣量：10μl。梯度洗脫程序：
0～2min，5％b～20％b；2～7min，20％b～55％b；7～9min，55％b；9～13min，55％b～90％b；13～16min，90％b；16～16.5min，90％～5％b；16.5～21min,5％b。表3是
高分辨質(zhì)譜檢測采集參數(shù)。
表3質(zhì)譜采集參數(shù)