本發(fā)明涉及生物檢測(cè)，特別是涉及一種馬錢(qián)子堿和士的寧的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒。

背景技術(shù)：

1、馬錢(qián)子堿(brucine，cas：357-57-3)和士的寧(stychnine，cas：57-24-9)(結(jié)構(gòu)式分別見(jiàn)圖1中a和b)是中藥馬錢(qián)子中2種最主要的生物堿，是一類(lèi)存在于植物生物體中的具有顯著生物活性的含氮堿性有機(jī)化合物，對(duì)人和動(dòng)物具有強(qiáng)烈的生理作用，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域，但過(guò)量食用或食用不當(dāng)將會(huì)引起中毒，甚至造成死亡。近年來(lái)，因投毒、自殺或食用馬錢(qián)子堿和士的寧不當(dāng)而引起的中毒案例時(shí)有發(fā)生。為及時(shí)高效地救治中毒病人，建立生物樣本中馬錢(qián)子堿和士的寧的快速、靈敏、可靠的定性、定量分析方法十分必要。

2、目前測(cè)定生物樣品中馬錢(qián)子堿和士的寧的方法主要有氣相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。由于馬錢(qián)子堿和士的寧不易氣化，氣相色譜和氣質(zhì)聯(lián)用法分析靈敏度較低，而高效液相色譜法準(zhǔn)確定性能力有限，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(lc-ms/ms)已廣泛用于血液中藥物濃度的分析，是一種較為理想的血液中藥物濃度測(cè)定的準(zhǔn)確靈敏方法。目前文獻(xiàn)報(bào)道的血液中馬錢(qián)子堿和士的寧含量的lc-ms/ms的樣品預(yù)處理主要采用固相萃取法(王朝虹等，lc-ms/ms法測(cè)定全血中馬錢(qián)子堿和士的寧的含量，中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2008，23(4):226-227；張王榮等，ce-tof/ms法測(cè)定人體血漿和尿中馬錢(qián)子堿和士的寧含量的方法，zl201210167511.3)，但固相萃取法在處理批量樣本的檢測(cè)時(shí)，有機(jī)試劑消耗量大，成本高，不利于環(huán)保。

3、多孔板提取凈化在血液樣品的提取和凈化中己有較多的應(yīng)用，但由于待測(cè)目標(biāo)物化學(xué)性質(zhì)的差異，必須針對(duì)特定目標(biāo)物的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行針對(duì)性的多孔板填料優(yōu)化和淋洗、洗脫方法的優(yōu)化，才能獲得具有良好實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制的分析方法。本發(fā)明擬采用多孔板提取凈化，以提供一種準(zhǔn)確、高效、快速、靈敏的血液中馬錢(qián)子堿和士的寧的質(zhì)譜快速檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法，最大程度地預(yù)防突發(fā)公共事件造成的損害，保障公眾的生命財(cái)產(chǎn)，維護(hù)國(guó)家安全和社會(huì)穩(wěn)定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種馬錢(qián)子堿和士的寧的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，利用該試劑盒可以實(shí)現(xiàn)對(duì)馬錢(qián)子堿和士的寧的快速、準(zhǔn)確和高靈敏度檢測(cè)。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明提供一種馬錢(qián)子堿和士的寧的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，包括mcx混合型陽(yáng)離子型吸附劑和吡咯烷酮-苯乙烯聚合物吸附劑。

4、進(jìn)一步地，所述mcx混合型陽(yáng)離子型吸附劑和所述吡咯烷酮-苯乙烯聚合物吸附劑的質(zhì)量比為4:1。

5、進(jìn)一步地，所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒還包括多孔板。

6、進(jìn)一步地，所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒還包括乙腈-水溶液、甲醇-氨水溶液和乙腈-0.1％甲酸水溶液；

7、所述乙腈-水溶液由乙腈和水按照體積比5:95配制而成；

8、所述甲醇-氨水溶液由甲醇和氨水按照體積比95:5配制而成；

9、所述乙腈-0.1％甲酸水溶液由乙腈和0.1％甲酸水溶液按照體積比20:80配制而成。

10、進(jìn)一步地，所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒還包括質(zhì)控試劑包；所述質(zhì)控試劑包包括馬錢(qián)子堿和士的寧的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和質(zhì)控品；

11、所述質(zhì)控品是通過(guò)在人工血漿中加入馬錢(qián)子堿和士的寧的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液制備而成。

12、進(jìn)一步地，所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒的檢測(cè)方法如下：

13、將待檢樣品加入裝填所述mcx混合型陽(yáng)離子型吸附劑和所述吡咯烷酮-苯乙烯聚合物吸附劑的多孔板中，再加入所述乙腈-水溶液，混合均勻后用所述甲醇-氨水溶液洗脫，得到洗脫液，所述洗脫液再經(jīng)過(guò)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)，得到馬錢(qián)子堿或士的寧的峰面積，最后通過(guò)馬錢(qián)子堿或士的寧的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到馬錢(qián)子堿或士的寧在所述待檢樣品中的濃度；

14、所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)中，液相色譜檢測(cè)的流動(dòng)相為所述乙腈-0.1％甲酸水溶液；

15、所述馬錢(qián)子堿或士的寧的標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過(guò)檢測(cè)不同濃度的馬錢(qián)子堿和士的寧的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液而得到。

16、進(jìn)一步地，所述液相色譜檢測(cè)的色譜柱為c18反相色譜柱。

17、進(jìn)一步地，所述c18反相色譜柱為waters?beh?c18柱。

18、本發(fā)明還提供一種錢(qián)子堿和士的寧的提取凈化方法，包括利用混合填料對(duì)待檢樣品中的錢(qián)子堿和士的寧進(jìn)行提取凈化的步驟；

19、所述混合填料包括mcx混合型陽(yáng)離子型吸附劑和吡咯烷酮-苯乙烯聚合物吸附劑；

20、所述mcx混合型陽(yáng)離子型吸附劑和所述吡咯烷酮-苯乙烯聚合物吸附劑的質(zhì)量比為4:1。

21、進(jìn)一步地，所述取凈化方法的具體操作步驟包括：

22、將所述混合填料裝填在多孔板中，加入待檢樣品，再加入乙腈-水溶液，混合均勻后用甲醇-氨水溶液洗脫，得到洗脫液；

23、所述乙腈-水溶液由乙腈和水按照體積比5:95配制而成；

24、所述甲醇-氨水溶液由甲醇和氨水按照體積比95:5配制而成。

25、本發(fā)明公開(kāi)了以下技術(shù)效果：

26、(1)本發(fā)明利用填裝高效混合填料的多孔板進(jìn)行血液樣本中馬錢(qián)子堿和士的寧的提取凈化，相比現(xiàn)有技術(shù)的固相萃取法凈化，有效降低了非特異性吸附帶來(lái)的目標(biāo)物損失，大大提高了樣品的檢測(cè)回收率，有效降低了基質(zhì)效應(yīng)，很好地提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。

27、(2)本發(fā)明利用多孔板提取凈化，大大減化了手工固相萃取的繁瑣操作步驟，提高了操作的便捷性，極大縮短了預(yù)處理時(shí)間，從而有效提高樣本分析通量，加快批量樣品的分析速度。

28、(3)本發(fā)明提供的試劑盒，有效提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確度和靈敏度，通過(guò)多孔板提取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，在硅膠基質(zhì)c18反相色譜柱上，在特定的流動(dòng)相組成和流速條件下，實(shí)現(xiàn)馬錢(qián)子堿和士的寧在硅膠基質(zhì)c18反相色譜柱上與血液中干擾雜質(zhì)的分離和電噴霧電離源正離子模式下的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(mrm)質(zhì)譜檢測(cè)，最終實(shí)現(xiàn)了血液馬錢(qián)子堿和士的寧的快速、準(zhǔn)確和高靈敏度檢測(cè)。

技術(shù)特征：

1.一種馬錢(qián)子堿和士的寧的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，其特征在于，包括mcx混合型陽(yáng)離子型吸附劑和吡咯烷酮-苯乙烯聚合物吸附劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述mcx混合型陽(yáng)離子型吸附劑和所述吡咯烷酮-苯乙烯聚合物吸附劑的質(zhì)量比為4:1。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒還包括多孔板。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒還包括乙腈-水溶液、甲醇-氨水溶液和乙腈-0.1％甲酸水溶液；

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒還包括質(zhì)控試劑包；所述質(zhì)控試劑包包括馬錢(qián)子堿和士的寧的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和質(zhì)控品；

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒的檢測(cè)方法如下：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述液相色譜檢測(cè)的色譜柱為c18反相色譜柱。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述c18反相色譜柱為waters?beh?c18柱。

9.一種錢(qián)子堿和士的寧的提取凈化方法，其特征在于，包括利用混合填料對(duì)待檢樣品中的錢(qián)子堿和士的寧進(jìn)行提取凈化的步驟；

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的取凈化方法，其特征在于，所述取凈化方法的具體操作步驟包括：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種馬錢(qián)子堿和士的寧的質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒，涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。所述質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒包括MCX混合型陽(yáng)離子型吸附劑和吡咯烷酮?苯乙烯聚合物吸附劑。該質(zhì)譜快速測(cè)定試劑盒有效提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確度和靈敏度，通過(guò)多孔板提取?液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜方法，在硅膠基質(zhì)C18反相色譜柱上，在特定的流動(dòng)相組成和流速條件下，實(shí)現(xiàn)馬錢(qián)子堿和士的寧在硅膠基質(zhì)C18反相色譜柱上與血液中干擾雜質(zhì)的分離和電噴霧電離源正離子模式下的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)質(zhì)譜檢測(cè)，最終實(shí)現(xiàn)了血液馬錢(qián)子堿和士的寧的快速、準(zhǔn)確和高靈敏度檢測(cè)。

技術(shù)研發(fā)人員：鐘乃飛,姜藝
受保護(hù)的技術(shù)使用者：杭州樂(lè)載科學(xué)儀器有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10