本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)，具體是一種檢測抗adamts-l5?igg抗體的試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、目前的研究發(fā)現(xiàn)，adamts-l5分子主要在黑色素細(xì)胞表達(dá)，而黑色素細(xì)胞往往是銀屑病疾病發(fā)病過程中關(guān)鍵受累細(xì)胞。adamts-l5分子在銀屑病皮損部位往往表達(dá)升高，而且可與t細(xì)胞表面受體相結(jié)合，從而參與銀屑病的發(fā)病過程。發(fā)明人在前期的研究篩選出銀屑病多種生物標(biāo)志物，結(jié)果顯示抗adamts-l5抗體與銀屑病的發(fā)病具有高度的相關(guān)性，而且adamts-l5自身抗體的量值水平對于疾病活動(dòng)度的判斷以及療效的評估具有重要的意義和價(jià)值。

2、化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence?immunoassay,clia),是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術(shù)，是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時(shí)間分辨熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項(xiàng)最新免疫測定技術(shù)。目前，還沒有發(fā)現(xiàn)將adamts-l5蛋白與化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(尤其是磁微粒化學(xué)發(fā)光技術(shù))結(jié)合，用于快速檢測銀屑病患者中抗adamts-l5抗體的水平情況。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種檢測抗adamts-l5?igg抗體的試劑盒及其應(yīng)用，通過將adamts-l5蛋白與磁微?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)結(jié)合，用于快速檢測銀屑病患者中抗adamts-l5抗體的水平情況，為銀屑病的診斷提供一種耗時(shí)短、成本低、傷害小的檢測方法。

2、為此，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：

3、一方面，本發(fā)明提供一種檢測抗adamts-l5?igg抗體的試劑盒，其包括：

4、試劑a，其為包被磁微粒的adamts-l5蛋白；

5、試劑b，其為吖啶酯標(biāo)記的igg抗體；

6、稀釋液。

7、優(yōu)選地，所述試劑a的濃度為10μg/ml；所述試劑b的濃度為0.02μg/ml；所述試劑a、試劑b和稀釋液的體積比為1:5:5。

8、優(yōu)選地，所述igg抗體為qrinia人igg或碩景鼠抗人igg5e9。具體地，所述qrinia人igg，購買自珠海啟尼亞生物技術(shù)有限公司，英文名human-igg，貨號(hào)h01101，類型mab，來源mouse。所述碩景鼠抗人igg5e9，購買自青島碩景生物技術(shù)有限公司，英文名human-igg，貨號(hào)m1304，類型mab，來源mouse。

9、優(yōu)選地，所述稀釋液包含有如下配比的組分：12.12g的tris(氨丁三醇)，7.6ml的hcl，18g的nacl，2ml的tween-20(吐溫-20)，20g的bsa(牛血清白蛋白)，2ml的proclin300。

10、在至少一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑a的制備方法包括如下步驟：

11、s11、取離心管，加入900μl磁珠包被液和100μl磁珠原液，混勻后用磁鐵分離，棄上清備用；

12、s12、往離心管中加入900μl磁珠包被液和100μl的dec溶液，18～28℃超聲混勻0.5h～1h后用磁鐵分離，棄上清備用；

13、s13、往離心管中加入900μl磁珠包被液和104.2μl預(yù)包被的0.96mg/ml的adamts-l5蛋白溶液，18～28℃超聲混勻0.5h～1h后用磁鐵分離，棄上清備用；

14、s14、往離心管中加入900μl磁珠封閉液，18～28℃超聲混勻0.5h～1h，棄上清備用；

15、s15、洗滌后用磁鐵分離棄掉上清，此步驟重復(fù)四次，可得到adamts-l5磁珠微粒；

16、s16、將adamts-l5磁珠微粒用磁珠稀釋液稀釋后，得到所述試劑a。

17、進(jìn)一步地，所述磁珠包被液為含有體積分?jǐn)?shù)為1％～5％peg(聚乙二醇)的pbs緩沖液；

18、所述磁珠原液為安捷倫(agilent)磁珠原液；

19、所述磁珠封閉液為含濃度為1～5mg/ml蛋白穩(wěn)定劑的tris緩沖液；

20、所述洗滌所用的清洗液為濃度0.05mol/l、ph6.0的嗎啉磺酸；

21、所述磁珠稀釋液包含有如下配比的組分：0.05mol/l的tris，3％的bsa，0.05％的tritonx-100(曲拉通x-100)，5％的海藻糖、1％的nacl，0.2％的proclin300。

22、在至少一個(gè)實(shí)施例中，所述試劑b的制備方法包括如下步驟：

23、s21、按2:1的質(zhì)量比稱取igg抗體和吖啶酯，混勻，振蕩偶聯(lián)0.5h，通過透析法去除游離的吖啶酯，過凝膠層析柱純化，收集發(fā)光強(qiáng)度高的流出液，得到交聯(lián)發(fā)光試劑；

24、s22、將所述交聯(lián)發(fā)光試劑用發(fā)光稀釋液稀釋，得到所述試劑b。

25、進(jìn)一步地，所述發(fā)光稀釋液包含如下配比的組分：0.01mol/l的pbs緩沖液，0.05％的聚乙二醇辛基苯基醚，0.2％的酪蛋白，0.5％的proclin30。

26、另一方面，本發(fā)明還提供上述試劑盒或其所包含的試劑在制備診斷銀屑病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

27、相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明至少實(shí)現(xiàn)如下有益效果：本發(fā)明通過定性檢測血清抗adamts-l5igg抗體的水平，能夠用于銀屑病的輔助診斷，而且本發(fā)明能夠以試劑盒的形式使用，能夠快速進(jìn)行化學(xué)發(fā)光免疫檢測，降低了醫(yī)療成本，提高了臨床檢測的適用性，為銀屑病的篩查提供了一種新的實(shí)驗(yàn)室檢查手段。

技術(shù)特征：

1.一種檢測抗adamts-l5?igg抗體的試劑盒，其特征在于，包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述稀釋液包含有如下配比的組分：

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑a的制備方法包括如下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于：

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于：

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑b的制備方法包括如下步驟：

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于：

10.權(quán)利要求1～9中任一項(xiàng)所述試劑盒或其所包含的試劑在制備診斷銀屑病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種檢測抗ADAMTS?L5IgG抗體的試劑盒及其應(yīng)用。該試劑盒包括：其包括：試劑A，其為包被磁微粒的ADAMTS?L5蛋白；試劑B，其為吖啶酯標(biāo)記的IgG抗體；稀釋液。該試劑盒可運(yùn)用于快速檢測銀屑病患者中抗ADAMTS?L5抗體的水平情況，為銀屑病的診斷提供一種耗時(shí)短、成本低、傷害小的檢測方法。

技術(shù)研發(fā)人員：袁育林,覃如,李尚陽
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/17