本發(fā)明涉及免疫組織化學(xué)技術(shù)(ihc)、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(icc)等，特別涉及一種新型通用型免疫組化抗原修復(fù)液及其制作方法。

背景技術(shù)：

1、在病理診斷技術(shù)領(lǐng)域，免疫組織化學(xué)技術(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)具有重要的輔助診斷作用，在臨床應(yīng)用中備受重視。其中，免疫組化技術(shù)是利用抗體和抗原之間高度特異性結(jié)合的原理，先用抗體將組織或細(xì)胞中的目的蛋白作為抗原特異性結(jié)合，再借助化學(xué)的方法將抗體結(jié)合的部位顯示出來，以達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性，定位或定量的研究。而組織或細(xì)胞在進(jìn)行免疫組化之前，往往會(huì)應(yīng)用一些試劑(如多聚甲醛)對(duì)新鮮組織或細(xì)胞進(jìn)行處理固定，組織固定過程中，甲醛與組織或細(xì)胞中的甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)，形成醛交聯(lián)蛋白，這種化合物封閉了抗原，使之無法表達(dá)出來。為了使免疫組化過程中更好地暴露出抗原，將其很好地顯示出來，世界上公認(rèn)的方法就是必須進(jìn)行抗原修復(fù)。

2、抗原修復(fù)在組織或細(xì)胞免疫組化技術(shù)過程中具有極其重要的作用，是各染色技術(shù)中不可或缺的一步，通過恢復(fù)抗原的活性，可以得到準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，抗原修復(fù)結(jié)果的好壞直接決定各種染色技術(shù)結(jié)果的染色質(zhì)量。至今為止，抗原修復(fù)有許多種方法，在這些方法中，有的是根據(jù)抗體的要求來進(jìn)行，有的是根據(jù)抗原的表達(dá)程度來進(jìn)行。常用的有熱修復(fù)和酶消化修復(fù)兩類，由于酶消化過程中，酶的作用極易受溫度影響，如果消化不足，則無法充分暴露出抗原位點(diǎn)，過度的消化又會(huì)破壞組織結(jié)構(gòu)，影響最后陽性信號(hào)的判讀，因此在后續(xù)的發(fā)展中，酶消化法漸漸被熱修復(fù)技術(shù)所替代，目前已非主要方法，比較常用的為熱修復(fù)，其修復(fù)效果最為有效，且結(jié)構(gòu)損傷和其他副作用很少，操作也更為簡(jiǎn)便。

3、熱修復(fù)的基本原理是：使蛋白質(zhì)處于水相環(huán)境中，加熱使蛋白水解過程加速，從而打開因固定交聯(lián)而形成的化學(xué)連接，暴露原先被遮蔽的抗原決定簇。決定熱修復(fù)的修復(fù)效果的因素有很多，如修復(fù)液的種類、修復(fù)液ph以及修復(fù)溫度等。最常用的抗原修復(fù)液有兩種：檸檬酸鈉緩沖液(ph＝6)和edta緩沖液(ph＝8或9)。檸檬酸鈉緩沖液能夠適配大部分的抗體，但由于其ph較低，整體修復(fù)效果不佳；普通edta修復(fù)液相對(duì)修復(fù)效果更強(qiáng)，但陽性增強(qiáng)的同時(shí)也會(huì)提高非特異背景，且配制普通edta修復(fù)液時(shí)，由于edta為酸性物質(zhì)，通常需要用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph，氫氧化鈉為強(qiáng)堿，用于調(diào)節(jié)ph時(shí)，使用量不好控制，且在使用時(shí)若不小心就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成傷害，以及腐蝕實(shí)驗(yàn)室等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種新型通用型抗原修復(fù)液及其制作方法，其解決檸檬酸修復(fù)效果不佳以及普通edta修復(fù)背景過重等問題。

2、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

3、一種新型通用型抗原修復(fù)液，每1000ml所述新型通用型抗原修復(fù)液中包括：tris1.0～2.0g，edta-2na和/或egta0.1～0.5g，1-氨基-2-丁醇或其同分異構(gòu)體50～1000μl，余量為水。

4、優(yōu)選地，每1000ml所述新型通用型抗原修復(fù)液中包括：tris?1.5～1.8g，edta-2na和/或egta?0.2～0.4g，1-氨基-2-丁醇或其同分異構(gòu)體200μl，余量為水。

5、優(yōu)選地，所述同分異構(gòu)體包括：4-氨基-1-丁醇、o-丁基羥胺、n-叔丁基羥胺、n,n二甲基羥胺、dl-2-氨基-1-丁醇、(r)-1-氨基丁-2-醇、(±)-2-氨基-1-丁醇、3-(甲氨基)-1-丙醇、n,n二甲基乙醇胺、(r)-(-)-2-氨基-1-丁醇、(s)-(+)-2-氨基-1-丁醇、(s)-1-(甲氨基)-2-丙醇、1-氨基-2-甲基-2-丙醇、dl-2-氨基-2-丁醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、(r)-3-氨基丁醇、(s)-3-氨基丁醇、2-乙氧基乙胺、3-氨基正丁醇、3-甲氧基丙胺、3-胺-丁-2-醇、n-甲基乙胺、2-甲氧基-n-甲基乙胺等的任意組合。

6、優(yōu)選地，所述水為去離子水。

7、一種新型通用型抗原修復(fù)液的制備方法，包括以下步驟：

8、(1)按配方量稱取tris，用500ml蒸餾水將其完全溶解；

9、(2)按配方量稱取edta-2na或egta，將其完全溶解于步驟(1)的溶液中；

10、(3)按配方量量取1-氨基-2-丁醇或其同分異構(gòu)體溶于步驟(2)的溶液中；

11、(4)最后，用水定容至1000ml。

12、優(yōu)選地，所述水為去離子水。

13、優(yōu)選地，所述同分異構(gòu)體包括：4-氨基-1-丁醇、o-丁基羥胺、n-叔丁基羥胺、n,n二甲基羥胺、dl-2-氨基-1-丁醇、(r)-1-氨基丁-2-醇、(±)-2-氨基-1-丁醇、3-(甲氨基)-1-丙醇、n,n二甲基乙醇胺、(r)-(-)-2-氨基-1-丁醇、(s)-(+)-2-氨基-1-丁醇、(s)-1-(甲氨基)-2-丙醇、1-氨基-2-甲基-2-丙醇、dl-2-氨基-2-丁醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、(r)-3-氨基丁醇、(s)-3-氨基丁醇、2-乙氧基乙胺、3-氨基正丁醇、3-甲氧基丙胺、3-胺-丁-2-醇、n-甲基乙胺、2-甲氧基-n-甲基乙胺等的任意組合。

14、一種新型通用型抗原修復(fù)液在免疫組織化學(xué)、免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域中的應(yīng)用。

15、一種新型通用型抗原修復(fù)液在免疫組織化染色技術(shù)中的應(yīng)用。

16、本發(fā)明上述技術(shù)方案，具有如下有益效果：

17、(1)本發(fā)明的抗原修復(fù)液成分中的氨基化合物可使抗原修復(fù)更徹底；

18、(2)本發(fā)明提供的抗原修復(fù)液成分中的氨基化合物具有保護(hù)蛋白質(zhì)和細(xì)胞膜完整性的作用，可使ihc/icc切片結(jié)果細(xì)胞形態(tài)完好；

19、(3)本發(fā)明提供的抗原修復(fù)液成分中的氨基化合物具有穩(wěn)定溶液ph的作用，在配制抗原修復(fù)液時(shí)不需要再調(diào)節(jié)ph；

20、(4)本發(fā)明提供的抗原修復(fù)液成分中的egta專一性強(qiáng)，用于抗原修復(fù)時(shí)，修復(fù)效果更好；

21、(5)本發(fā)明提供的抗原修復(fù)液用于免疫組化染色時(shí)，切片染色結(jié)果強(qiáng)度較佳的同時(shí)背景干凈。

技術(shù)特征：

1.一種新型通用型抗原修復(fù)液，其特征在于，每1000ml所述新型通用型免疫組化抗原修復(fù)液中包括：tris?1.0～2.0g；edta-2na和/或egta0.1～0.5g；1-氨基-2-丁醇或其同分異構(gòu)體50～1000μl；余量為水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型通用型抗原修復(fù)液，其特征在于，每1000ml所述新型通用型免疫組化抗原修復(fù)液中包括：tris?1.5～1.8g；edta-2na和/或egta?0.2～0.4g；1-氨基-2-丁醇或其同分異構(gòu)體200μl，余量為水。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型通用型抗原修復(fù)液，其特征在于，所述同分異構(gòu)體包括：4-氨基-1-丁醇、o-丁基羥胺、n-叔丁基羥胺、n,n二甲基羥胺、dl-2-氨基-1-丁醇、(r)-1-氨基丁-2-醇、(±)-2-氨基-1-丁醇、3-(甲氨基)-1-丙醇、n,n二甲基乙醇胺、(r)-(-)-2-氨基-1-丁醇、(s)-(+)-2-氨基-1-丁醇、(s)-1-(甲氨基)-2-丙醇、1-氨基-2-甲基-2-丙醇、dl-2-氨基-2-丁醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、(r)-3-氨基丁醇、(s)-3-氨基丁醇、2-乙氧基乙胺、3-氨基正丁醇、3-甲氧基丙胺、3-胺-丁-2-醇、n-甲基乙胺、2-甲氧基-n-甲基乙胺中的一種或多種組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的新型通用型抗原修復(fù)液，其特征在于，所述edta-2na和egta的重量比為1:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型通用型抗原修復(fù)液，其特征在于，所述水為去離子水。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的新型通用型抗原修復(fù)液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的新型通用型抗原修復(fù)液的制備方法，其特征在于，所述同分異構(gòu)體包括：4-氨基-1-丁醇、o-丁基羥胺、n-叔丁基羥胺、n,n二甲基羥胺、dl-2-氨基-1-丁醇、(r)-1-氨基丁-2-醇、(±)-2-氨基-1-丁醇、3-(甲氨基)-1-丙醇、n,n二甲基乙醇胺、(r)-(-)-2-氨基-1-丁醇、(s)-(+)-2-氨基-1-丁醇、(s)-1-(甲氨基)-2-丙醇、1-氨基-2-甲基-2-丙醇、dl-2-氨基-2-丁醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、(r)-3-氨基丁醇、(s)-3-氨基丁醇、2-乙氧基乙胺、3-氨基正丁醇、3-甲氧基丙胺、3-胺-丁-2-醇、n-甲基乙胺、2-甲氧基-n-甲基乙胺中的一種或多種組合。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的新型通用型抗原修復(fù)液在免疫組織化學(xué)(ihc)、免疫細(xì)胞化學(xué)(icc)中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的新型通用型抗原修復(fù)液在免疫組化染色中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種新型通用型抗原修復(fù)液及其制備方法，其中，每1000mL該抗原修復(fù)液中包括：Tris?1.0～2.0g，乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA?2Na)和/或乙二醇雙四乙酸(EGTA)0.1～0.5g，1?氨基?2?丁醇或其同分異構(gòu)體50～1000μL，余量為水。本發(fā)明的抗原修復(fù)液成分中的氨基醇化合物可使抗原修復(fù)更徹底；氨基醇化合物具有保護(hù)蛋白質(zhì)和細(xì)胞膜完整性的作用，可使免疫組化切片結(jié)果細(xì)胞形態(tài)完好；氨基醇化合物具有穩(wěn)定溶液pH的作用，在配制抗原修復(fù)液時(shí)不需要再調(diào)節(jié)pH；EDTA?2Na或EGTA均具有與金屬離子形成穩(wěn)定絡(luò)合物的性質(zhì)，常被用作緩沖液的成分之一，其中EGTA專一性強(qiáng)，用于抗原修復(fù)時(shí)，修復(fù)效果更好；氨基醇化合物抗原修復(fù)液用于免疫組化染色，切片染色結(jié)果強(qiáng)度較佳的同時(shí)背景干凈。

技術(shù)研發(fā)人員：陳贊烽,李妙君,魯璐淋,林齊心
受保護(hù)的技術(shù)使用者：福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9