本發(fā)明涉及蜂產(chǎn)品測定相關(guān)領(lǐng)域，具體涉及一種蜂產(chǎn)品(蜂王漿和蜂王漿凍干粉)中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法。

背景技術(shù)：

1、蜂王漿是極好的營養(yǎng)食品，并具有一定的醫(yī)療作用。目前，很多廠家將蜂王漿加工制成各種制劑，給消費者提供食用和藥用，蜂王漿也越來越得到重視。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉寄生曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機率最高，黃曲霉素對人體危害極大，其危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。蜂產(chǎn)品中黃曲霉素類的檢測目前尚無相關(guān)文獻報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足，而提供一種蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，適用于蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素族殘留afb1、afb2、afg1、afg2測定前處理。

2、本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是：一種蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，其特征是，步驟如下：

3、1)取蜂王漿凍干粉5m?g加10m?g水溶解充分復(fù)水至無顆粒，稱取5m?g復(fù)水后的樣品；

4、2)在2m?g蜂王漿樣品中加入20m?ml乙腈-水-乙酸提取液，乙腈、水、乙酸體積比為85：14：1；在5m?g復(fù)水后的樣品中加入20m?ml乙腈-水-乙酸提取液，乙腈、水、乙酸體積比為92：7：1；振蕩提?。?/p>

5、3)離心；

6、4)取全部上清液，加m?g氯化鈉振蕩溶解；

7、5)鹽析后離心，吸取全部上層液至茄形瓶中，蒸干，去除溶液中的乙腈及多余的水分，富集目標(biāo)物；

8、6)加2m?ml水，使后續(xù)溶液濃度一致；超聲溶解，加5m?ml氯仿；

9、7)用吸管吸取全部溶液至離心管，之后離心，分層，氯仿層即含有提純后的黃曲霉素，水層是雜質(zhì)層；

10、8)取氯仿層，稱取100m?mg?psa和100m?mg?c18，加入氯仿層，振蕩；

11、9)離心，使psa和c18快速沉積至底部，取上清液，蒸干；

12、10)加入m?ml?50％乙腈水溶液，乙腈、水的體積比為1：1，溶解，過膜；

13、11)進lc/ms/ms。

14、優(yōu)選的，步驟2)中，振蕩提取1min。

15、優(yōu)選的，步驟3)中，在4500rpm離心10min。

16、優(yōu)選的，步驟8)中，振蕩60秒。

17、優(yōu)選的，步驟9)中，在4500rpm離心3分鐘。

18、優(yōu)選的，步驟10)中，過膜采用尼龍微孔濾膜：0.22um。

19、優(yōu)選的，步驟11)中，稀釋倍數(shù)：蜂王漿0.5，蜂王漿凍干粉0.6。

20、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和效果：本發(fā)明采用乙腈-水-乙酸提取液去除雜質(zhì)，用鹽析的方法初步凈化，蒸干富集目標(biāo)物，以水分散殘渣，用氯仿再次凈化，用psa和c18進一步去除色素、脂類。樣品凈化效果良好，檢測精密度良好，檢測限能夠達到出口限量的要求。避免了使用固相萃取小柱(使用免疫親和小柱是現(xiàn)有常規(guī)的檢測方法，成本極高)，大大節(jié)約了檢測成本，提升了產(chǎn)品競爭力。

技術(shù)特征：

1.一種蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，其特征是，步驟如下：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，其特征是，步驟2）中，振蕩提取1min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，其特征是，步驟3）中，在4500rpm離心10min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，其特征是，步驟8）中，振蕩60秒。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，其特征是，步驟9）中，在4500rpm離心3分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，其特征是，步驟10）中，過膜采用尼龍微孔濾膜：0.22um。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留lc/ms/ms測定前處理方法，其特征是，步驟11）中，稀釋倍數(shù)：蜂王漿0.5，蜂王漿凍干粉0.6。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種蜂產(chǎn)品中黃曲霉毒素殘留LC/MS/MS測定前處理方法，涉及蜂產(chǎn)品測定相關(guān)領(lǐng)域，蜂產(chǎn)品中黃曲霉素類的檢測目前尚無相關(guān)文獻報道。本發(fā)明采用乙腈?水?乙酸提取液去除雜質(zhì)，用鹽析的方法初步凈化，蒸干富集目標(biāo)物，以水分散殘渣，用氯仿再次凈化，用PSA和C18進一步去除色素、脂類。樣品凈化效果良好，檢測精密度良好，檢測限能夠達到出口限量的要求。避免了使用固相萃取小柱（使用免疫親和小柱是現(xiàn)有常規(guī)的檢測方法，成本極高），大大節(jié)約了檢測成本，提升了產(chǎn)品競爭力。

技術(shù)研發(fā)人員：周星聯(lián),陳宏鋼
受保護的技術(shù)使用者：杭州和蜂園保健品有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10