本發(fā)明屬于化學制藥和藥物分析,涉及一種d-葡萄糖酸-δ-內酯中差向異構體的定量檢測方法。更具體地說,本發(fā)明涉及一種d-葡萄糖酸-δ-內酯中d-甘露糖酸-δ-內酯的定量檢測方法。
背景技術:
1、d-葡萄糖酸-δ-內酯(簡稱d-葡萄糖酸-δ-內酯,gdl)為白色晶體或結晶性粉末,極易溶于水,微溶于乙醇,不溶于乙醚。d-葡萄糖酸-δ-內酯是目前國際上公認的無毒食品添加劑,可用于制造豆腐的凝固劑、制造面包的膨松劑、制造沙拉的保鮮劑、制造奶酪的酸味劑、制造香腸臘肉的保色劑。也可作為工業(yè)添加劑,在牙膏中作為清洗劑有助于清除牙垢,在混凝土中作為減水劑降低水的比例,增強水泥的初期強度。此外,d-葡萄糖酸-δ-內酯在醫(yī)藥領域還被廣泛用于鈉-葡萄糖協(xié)同轉運蛋白2(sglt-2)抑制劑類降糖藥物的合成。
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3、例如,阿斯利康開發(fā)的達格列凈,勃林格殷格翰公司研制的恩格列凈,以及強生公司開發(fā)的坎格列凈等sglt-2抑制劑類降糖藥物的合成工藝中,均使用d-葡萄糖酸-δ-內酯作為關鍵起始物料,用于其分子中糖元結構片段的構建。
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5、在藥物的合成過程中,物料帶入的雜質也會參與藥物合成的各步化學反應,生成相應的新雜質,從而進一步影響到藥物的純度、藥效,甚至增大藥物的毒副作用。所以,藥物的質量控制包括對其合成過程中使用到的各物料的質量控制。同樣,d-葡萄糖酸-δ-內酯作為合成恩格列凈、達格列凈等sglt-2抑制劑類降糖藥物的關鍵起始物料,其所含的特征雜質也會在很大程度上影響到恩格列凈、達格列凈的特征雜質譜。
6、d-葡萄糖酸-δ-內酯產業(yè)化的制備工藝通常采用化學催化氧化法,即在過渡金屬鈀的催化作用下,以活性炭為載體,將d-葡萄糖催化氧化為d-葡萄糖酸,d-葡萄糖酸再在一定條件下發(fā)生分子內酯化反應得到d-葡萄糖酸-δ-內酯。
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8、酯化反應是一個可逆反應,d-葡萄糖酸很難實現完全轉化,所以,d-葡萄糖酸-δ-內酯中通常含有d-葡萄糖酸。其次,d-d-葡萄糖酸-δ-內酯化過程中,更傾向于生成構象更穩(wěn)定的六元環(huán)內酯,即d-葡萄糖酸-δ-內酯,但同時也可能會生成五元環(huán)內酯。所以,d-葡萄糖酸-δ-內酯中通常含有五元環(huán)的d-葡萄糖酸-γ-內酯。最重要的是,酯化反應通常在酸的催化作用下進行,d-葡萄糖酸羧基α位碳上的羥基在酸性條件下容易發(fā)生消旋,生成其羧基α位的差向異構體,內酯化后即生成d-甘露糖酸-δ-內酯。所以,d-葡萄糖酸-δ-內酯中通常含有c2位的差向異構體d-甘露糖酸-δ-內酯。
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10、如何有效檢測d-葡萄糖酸-δ-內酯中上述的潛在雜質,對于d-葡萄糖酸-δ-內酯的質量控制以及后續(xù)恩格列凈、達格列凈原料藥成品的質量控制都具有非常重要的意義。其中,d-葡萄糖酸和d-葡萄糖酸-γ-內酯因結構上與d-葡萄糖酸-δ-內酯具有較大的差異。所以,通常這兩種雜質在常規(guī)的色譜系統(tǒng)下,利用通用檢測器(如:示差檢測器和cad檢測器)和常規(guī)色譜柱即可實現有效的分離和定量檢測?,F有技術中d-葡萄糖酸-δ-內酯的分析方法含量通常采用滴定的方式測定,相關物質的檢測如葡萄糖、葡萄糖酸和d-葡萄糖酸-γ-內酯通常使用高效液相色譜法檢測。
11、但c2位的差向異構體雜質d-甘露糖酸-δ-內酯結構與d-葡萄糖酸-δ-內酯極其相似,僅在c2上存在一個手性構象差異,且紫外吸收弱,在一般色譜系統(tǒng)下實現分離和定量檢測難度極大。也并未見有現有技術報道d-葡萄糖酸-δ-內酯中c2差向異構體d-甘露糖酸-δ-內酯的定量檢測方法。但d-葡萄糖酸-δ-內酯作為列凈類藥物的關鍵起始物料,差相異構體如不嚴格控制,則該異構體雜質一直參與后續(xù)反應,并帶入原料藥成品中,給最終產品質量帶來巨大風險。因此,開發(fā)快速、靈敏有效的分析方法定量檢測d-葡萄糖酸-δ-內酯中d-甘露糖酸-δ-內酯含量具有非常重要的意義。
技術實現思路
1、本發(fā)明提供了一種d-葡萄糖酸-δ-內酯中d-甘露糖酸-δ-內酯的定量檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:
2、(1)d-葡萄糖酸-δ-內酯供試樣品經還原反應衍生為d-山梨糖醇,該供試樣品中所含的雜質d-甘露糖酸-δ-內酯同樣也會經還原反應衍生為d-甘露糖醇,
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4、(2)利用高效液相色譜儀,經鈣柱色譜柱分離步驟(1)衍生所得混合物,在示差檢測器中可定量檢測d-山梨糖醇中d-甘露糖醇的含量,即為d-葡萄糖酸-δ-內酯中d-甘露糖酸-δ-內酯的含量。
5、本發(fā)明所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(1)中d-葡萄糖酸-δ-內酯供試樣品的衍生步驟包括:供試樣品分散在有機溶劑中,經還原劑還原、淬滅、濃縮,得到衍生混合物用于步驟(2)。
6、本發(fā)明所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(1)中d-葡萄糖酸-δ-內酯供試樣品的還原反應中,還原劑選自硼氫化鉀、硼氫化鈉、二異丁基氫化鋁,有機溶劑選自四氫呋喃。
7、本發(fā)明所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(1)還原反應中還原劑用量為d-葡萄糖酸-δ-內酯供試樣品的4~6摩爾當量。
8、本發(fā)明所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(1)還原反應的溫度選擇60~70℃。
9、本發(fā)明所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(2)中高效液相色譜儀的檢測條件為:色譜柱選自鈣柱或其等效柱;流速0.5ml/min±0.05ml/min;進樣量20μl;柱溫80℃±2℃;示差檢測器溫度50℃±2℃;運行時間30min~60min;流動相為純化水。
10、本發(fā)明所述的定量檢測方法,為一種新的定量檢測方法,未見有文獻報道,具有顯著的實用性。
1.一種d-葡萄糖酸-δ-內酯中d-甘露糖酸-δ-內酯的定量檢測方法,其特征在于,包括以下步驟:
2.如權利要求1所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(1)中d-葡萄糖酸-δ-內酯供試樣品的衍生步驟包括:供試樣品分散在有機溶劑中,經還原劑還原、淬滅、濃縮,得到衍生混合物用于步驟(2)。
3.如權利要求1或2所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(1)中d-葡萄糖酸-δ-內酯供試樣品的還原反應中,還原劑選自硼氫化鉀、硼氫化鈉、二異丁基氫化鋁,有機溶劑選自四氫呋喃。
4.如權利要求3所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(1)還原反應中還原劑用量為d-葡萄糖酸-δ-內酯供試樣品的4~6摩爾當量。
5.如權利要求3所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(1)還原反應的溫度選擇60~70℃。
6.如權利要求1所述的定量檢測方法,其特征在于,步驟(2)中高效液相色譜儀的檢測條件為:色譜柱選自鈣柱或其等效柱;流速0.5ml/min±0.05ml/min;進樣量20μl;柱溫80℃±2℃;示差檢測器溫度50℃±2℃;