本發(fā)明屬于非奈利酮原料及其組合物檢測分析，具體涉及一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法。

背景技術(shù)：

1、非奈利酮是一種非甾體選擇性鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑，在臨床前研究中顯示可阻斷鹽皮質(zhì)激素受體過度激活導(dǎo)致的有害影響。在糖尿病患者中，鹽皮質(zhì)激素受體過度激活被認為會導(dǎo)致慢性腎病進展和心血管受損，這可能由代謝、血流動力學(xué)或炎癥和纖維化等因素驅(qū)動。

2、

3、

4、現(xiàn)有方法中僅適用原料或針對kerendia一種產(chǎn)品檢測，方法檢測能力有限，可被檢出的雜質(zhì)較少，無法滿足檢測多個雜質(zhì)的需求。因此，結(jié)合非奈利酮原料及其組合物可能出現(xiàn)的降解雜質(zhì)，開發(fā)一種快速高效的分析方法，用于測定非奈利酮原料及其組合物的有關(guān)物質(zhì)具有重大實際意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明提供一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，達到一種方法就能對非奈利酮6種雜質(zhì)進行有效分離和定量檢測的目的。

2、本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

3、本發(fā)明目的在于提供一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，包括以下步驟：

4、s1：配置非奈利酮樣品溶液；

5、s2：采用hplc法對樣品溶液進行梯度洗脫。

6、hplc法為現(xiàn)有技術(shù)，由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，經(jīng)流量與壓力測量之后，導(dǎo)入進樣器。被測物由進樣器注入，并隨流動相通過色譜柱，在柱上進行分離后進入檢測器，檢測信號由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復(fù)雜的混合物分離可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似，不同的是氣相色譜改變溫度，而hplc改變的是流動相極性，使樣品各組分在最佳條件下得以分離。

7、進一步的，s2中hplc法的色譜條件為：采用紫外檢測器檢測，色譜柱采用c18色譜柱，以磷酸二氫鉀為流動相a，以乙腈為流動相b，流動相采用梯度洗脫。

8、進一步的，梯度洗脫時，流速為0.9～1.1ml/min，柱溫為30～40℃。

9、進一步的，紫外檢測器的檢測波長為248nm～252nm。

10、進一步的，檢測波長為250nm；流速為1.0ml/min；柱溫為35℃。

11、進一步的，采用鬼峰捕集柱捕集流動相雜質(zhì)。

12、進一步的，梯度洗脫為：

13、0～5min，流動相a的比例為78％～82％，流動相b的比例為22％～18％；

14、5～30min，流動相a的比例為23％～28％，流動相b的比例為77％～72％；

15、30～40min，流動相a的比例為78％～82％，流動相b的比例為22％～18％；

16、40～45min，流動相a的比例為72％～68％，流動相b的比例為28％～32％；

17、45～50min，流動相a的比例為78％～82％，流動相b的比例為22％～18％。

18、進一步的，梯度洗脫設(shè)置如下表

19、 時間(min) 流動相a(％) 流動相b(％) 0 80 20 5 80 20 30 25 75 40 80 20 45 70 30 50 80 20

20、進一步的，s1中配置樣品溶液的方法為：取非奈利酮原料或其組合物，加入稀釋劑，超聲提取，冷卻至室溫后，加入稀釋劑定容，過濾，取濾液作為待測樣品溶液。

21、進一步的，稀釋劑為體積比1:1的乙腈：水。

22、進一步的，超聲提取時間為15min。

23、進一步的，過濾采用0.45μm孔徑的尼龍材質(zhì)的針式過濾頭。

24、進一步的，用稀釋劑稀釋至每1ml中含有5mg的非奈利酮。

25、進一步的，所述空白輔料乳糖、甘露醇、赤蘚醇、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚維酮k30、二氧化硅、硬脂酸鎂和硬脂富馬酸鈉中的一種或多種。

26、本發(fā)明可以同時分離測定6個雜質(zhì)。采用高效液相色譜法，待測樣品的進樣體積為10μl～100μl，采用紫外檢測器，色譜柱使用c18色譜柱(4.6x?250mm,3.5μm)，稀釋劑為乙腈：水(1:1)，以0.01mol/l磷酸二氫鉀為流動相a，以乙腈為流動相b，加鬼峰捕集柱(4.6mm×50mm)，檢測波長為248nm～252nm，流速為0.9～1.1ml/min，柱溫為30～40℃。

27、其中，可檢測的6個雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式見下表

28、

29、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益技術(shù)效果在于：

30、本發(fā)明采用hplc法進行檢測，僅用一種方法就能對6種雜質(zhì)進行有效分離和定量檢測，且尚未有公開的某一種方法可以同時分離和定量檢測這6個雜質(zhì)，本技術(shù)存在檢測雜質(zhì)種類多，成本低，檢測時間短等特點。同時，本發(fā)明在非奈利酮組合物由如下輔料(乳糖、甘露醇、赤蘚醇、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚維酮k30、二氧化硅、硬脂酸鎂和硬脂富馬酸鈉)時，具有良好的專屬性。因此本發(fā)明可以廣泛使用在非奈利酮及其組合物的有關(guān)物質(zhì)檢測中。

31、上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，而可依照說明書的內(nèi)容予以實施，并且為了讓本發(fā)明的上述內(nèi)容和其目的、特征和優(yōu)點能夠更明顯易懂，以下特舉本發(fā)明的具體實施方式。

技術(shù)特征：

1.一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：s2中hplc法的色譜條件為：采用紫外檢測器檢測，色譜柱采用c18色譜柱，以磷酸二氫鉀為流動相a，以乙腈為流動相b，流動相采用梯度洗脫。

3.如權(quán)利要求2所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：梯度洗脫時，流速為0.9～1.1ml/min，柱溫為30～40℃。

4.如權(quán)利要求2所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：紫外檢測器的檢測波長為248nm～252nm。

5.如權(quán)利要求2所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：采用鬼峰捕集柱捕集流動相雜質(zhì)。

6.如權(quán)利要求2所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：梯度洗脫為：

7.如權(quán)利要求1所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：s1中配置樣品溶液的方法為：取非奈利酮原料或其組合物，加入稀釋劑，超聲提取，冷卻至室溫后，加入稀釋劑定容，過濾，取濾液作為待測樣品溶液。

8.如權(quán)利要求7所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：稀釋劑為1:1的乙腈：水。

9.如權(quán)利要求7所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：超聲提取時間為15min。

10.如權(quán)利要求7所述一種用hplc法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，其特征在于：過濾采用0.45μm孔徑的尼龍材質(zhì)的針式過濾頭。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于非奈利酮原料及其組合物檢測分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用HPLC法檢測非奈利酮雜質(zhì)的方法，包括以下步驟：S1：配置非奈利酮樣品溶液；S2：采用HPLC法對樣品溶液進行梯度洗脫，HPLC法的色譜條件為：采用紫外檢測器檢測，色譜柱采用C18色譜柱，以磷酸二氫鉀為流動相A，以乙腈為流動相B，流動相采用梯度洗脫，本發(fā)明采用HPLC法進行檢測，僅用一種方法就能對6種雜質(zhì)進行有效分離和定量檢測，本技術(shù)存在檢測雜質(zhì)種類多，成本低，檢測時間短等特點。本發(fā)明可以廣泛使用在非奈利酮及其組合物的有關(guān)物質(zhì)檢測中。

技術(shù)研發(fā)人員：陳用芳,楊緒鳳,宋富文,張玉芳,馮文利
受保護的技術(shù)使用者：重慶康刻爾制藥股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10