本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥和分子生物學(xué)，具體涉及stbd1蛋白在制備炎癥防治藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、現(xiàn)有研究認(rèn)為，炎癥反應(yīng)是免疫初始階段一種常見生理和病理性反應(yīng)。其主要反應(yīng)過程是：當(dāng)抗原進(jìn)入機(jī)體后，巨噬細(xì)胞或上皮細(xì)胞會分泌趨化因子，進(jìn)而引起血管上皮細(xì)胞空隙增大、血管膨脹，大量的中性粒細(xì)胞、嗜酸性嗜堿性細(xì)胞從血管中進(jìn)入組織液，最終造成局部的紅、腫、熱、痛等生理和病理反應(yīng)。進(jìn)一步的分子機(jī)理研究認(rèn)為，巨噬細(xì)胞上的模式識別受體被激活后可以誘導(dǎo)一系列細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)，如nf-κb和mapk信號通路，這些信號通路的激活將會導(dǎo)致相關(guān)炎癥因子的產(chǎn)生，如一氧化氮（no）、活性氧（ros）、腫瘤壞死因子-α（tnf-α）等，這些炎癥因子可以間接地反映出炎癥反應(yīng)的程度。另外，其他研究也表明，除了細(xì)胞因子外，一些具有抗炎效果的植物活性成分還能夠通過作用于環(huán)氧合酶-2（cox-2）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inos)）等關(guān)鍵調(diào)控分子來發(fā)揮抗炎作用，因此抑制cox-2和inos的表達(dá)對于炎癥的抑制也具有關(guān)鍵作用。

2、總之，鑒于炎癥反應(yīng)在相關(guān)疾病防治中的重要作用，因此，基于相關(guān)炎癥信號分子探討對于炎癥反應(yīng)具有調(diào)控作用的靶點(diǎn)蛋白，對于改善和提高相關(guān)疾病的防治效果具有十分重要的技術(shù)意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、已有研究中，研究認(rèn)為stbd1主要用途是通過與同源自噬蛋白gabarapl1結(jié)合將糖原束縛在膜上，本申請主要目的是提供該蛋白作為靶點(diǎn)在炎癥反應(yīng)中的新應(yīng)用，從而為炎癥反應(yīng)機(jī)理及相關(guān)防治藥物開發(fā)奠定一定技術(shù)基礎(chǔ)。

2、本申請所采取的技術(shù)方案具體如下。

3、stbd1蛋白在制備炎癥防治藥物中的應(yīng)用，應(yīng)用時(shí)，通過敲低stbd1蛋白表達(dá)，可以減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)；

4、所述減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)，是指降低no、tnf- α以及相關(guān)炎癥蛋白的表達(dá)；

5、所述敲低stbd1蛋白，例如可以利用sirna技術(shù)敲低stbd1蛋白的表達(dá)；

6、所述防治藥物，有效成分包含但不限于針對stbd1的rna干擾分子或反義寡核苷酸、小分子抑制劑、sirna、實(shí)施慢病毒感染或基因敲除的物質(zhì)以及針對stbd1本身或其上下游分子的特異性抗體（包括抗stbd1抗體）；

7、所述防治藥物，藥物劑型包括但不限于注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、緩釋劑和皮下埋植劑；基于這些藥物劑型，給藥方式包括但不限于舌下含化、口服、肌肉注射或靜脈注射中的一種或多種。

8、利用sirna技術(shù)敲低stbd1蛋白表達(dá)時(shí)，針對stbd1的sirna序列具體參考如下：

9、正向序列：5’-gugcacuacaccacaaacatt-3’；

10、反向序列：5’-uguuugugguguagugcactt-3’。

11、現(xiàn)有研究中，研究認(rèn)為stbd1是一種糖自噬介質(zhì)，可通過與同源自噬蛋白gabarapl1結(jié)合將糖原束縛在膜上，進(jìn)一步經(jīng)溶酶體相關(guān)酶的作用可將糖原降解為葡萄糖，從而形成了一種特定的糖自噬機(jī)制。

12、本申請中，發(fā)明人基于lps誘導(dǎo)raw264.7細(xì)胞構(gòu)建的細(xì)胞炎癥模型，發(fā)現(xiàn)stbd1蛋白在細(xì)胞炎癥模型中高表達(dá)，表明stbd1蛋白的水平升高導(dǎo)致或伴隨炎癥的發(fā)生發(fā)展。因此，進(jìn)一步地，結(jié)合sirna技術(shù)，進(jìn)行了降低炎癥模型raw264.7細(xì)胞中stbd1蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)。進(jìn)一步對no、tnf- α、相關(guān)炎癥蛋白、以及mapk-erk信號通路相關(guān)蛋白檢測結(jié)果表明：敲低stbd1蛋白后，lps誘導(dǎo)raw264.7細(xì)胞所產(chǎn)no、tnf- α有明顯降低，同時(shí)，抑制了inos和cox-2?mrna及其對應(yīng)蛋白的表達(dá)，也降低了mapk信號通路中erk蛋白的磷酸化水平。也即，敲低stbd1蛋白可以減輕raw264.7細(xì)胞炎癥。

13、總之，鑒于stbd1蛋白在炎癥反應(yīng)中是一個重要的分子靶點(diǎn)，因此，對相關(guān)作用機(jī)理的進(jìn)一步深入研究和探討，以及基于該靶點(diǎn)進(jìn)一步開發(fā)相關(guān)防治藥物，對于炎癥反應(yīng)的防治具有十分重要的技術(shù)理論和技術(shù)應(yīng)用意義。

技術(shù)特征：

1.stbd1蛋白在制備炎癥防治藥物中的應(yīng)用。

2.如權(quán)利要求1所述stbd1蛋白在制備炎癥防治藥物中的應(yīng)用，其特征在于，應(yīng)用時(shí)，通過敲低stbd1蛋白表達(dá)，用以減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)。

3.如權(quán)利要求2所述stbd1蛋白在制備炎癥防治藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)，是指降低no、tnf-α的表達(dá)；所述敲低stbd1蛋白，利用sirna技術(shù)敲低stbd1蛋白的表達(dá)。

4.如權(quán)利要求3所述stbd1蛋白在制備炎癥防治藥物中的應(yīng)用，其特征在于，利用sirna技術(shù)敲低stbd1蛋白表達(dá)時(shí)，針對stbd1的sirna序列如下：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥和分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及STBD1蛋白在制備炎癥防治藥物中的應(yīng)用。應(yīng)用時(shí)，通過敲低STBD1蛋白表達(dá)，用以減輕細(xì)胞炎癥反應(yīng)。利用siRNA技術(shù)敲低STBD1蛋白的表達(dá)后，相關(guān)檢測結(jié)果表明：敲低STBD1蛋白后，LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞所產(chǎn)NO、TNF?α有明顯降低，同時(shí)，抑制了iNOS和COX?2?mRNA及其對應(yīng)蛋白的表達(dá)，也降低了MAPK信號通路中ERK蛋白的磷酸化水平。鑒于STBD1蛋白在炎癥反應(yīng)中是一個重要的分子靶點(diǎn)，因此，對相關(guān)作用機(jī)理的進(jìn)一步深入研究和探討，以及基于該靶點(diǎn)進(jìn)一步開發(fā)相關(guān)防治藥物，對于炎癥反應(yīng)的防治具有十分重要的技術(shù)理論和技術(shù)應(yīng)用意義。

技術(shù)研發(fā)人員：康文藝,張于,劉振花,馬常陽,劉緒強(qiáng),陳宜笑
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/10