本發(fā)明屬于肝癌疾病預(yù)后診斷。更具體地，涉及測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的cd93蛋白與cd68蛋白水平的試劑在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌(簡(jiǎn)稱肝癌)是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率分別位于第四位和第二位。目前臨床針對(duì)肝癌的治療仍以手術(shù)切除和放化療為主要手段，然而，由于肝癌在確診時(shí)大多已處于中晚期，加上手術(shù)切除后的高復(fù)發(fā)率，使得肝癌患者的總體生存率仍維持著較低的水平。因此，通過(guò)找尋能夠有效預(yù)測(cè)肝癌患者預(yù)后的相關(guān)標(biāo)記物，將為患者更好地實(shí)現(xiàn)臨床預(yù)后評(píng)估以及精準(zhǔn)治療提供重要的參考意義。

2、目前臨床上可依據(jù)肝癌病理診斷以及單個(gè)分子標(biāo)記物對(duì)患者術(shù)后生存情況進(jìn)行預(yù)測(cè)，包括：(1)肝癌分期；(2)血清腫瘤標(biāo)記物(甲胎蛋白)；(3)肝功能指標(biāo)；(4)免疫學(xué)指標(biāo)，如淋巴細(xì)胞或者髓系細(xì)胞的數(shù)量等。以上指標(biāo)雖然在一定程度上能夠幫助評(píng)估肝癌患者的預(yù)后情況，但仍存在預(yù)測(cè)精度和有效性均較差的問(wèn)題。例如，免疫細(xì)胞如髓系細(xì)胞在肝癌腫瘤的浸潤(rùn)水平這單一指標(biāo)無(wú)法準(zhǔn)確反映髓系細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮的實(shí)際功能，進(jìn)而影響肝癌患者術(shù)后預(yù)后評(píng)估的準(zhǔn)確性。

3、cd68是一種細(xì)胞質(zhì)蛋白，與溶酶體顆粒有關(guān)，常被用于特異性標(biāo)記單核巨噬細(xì)胞，且有研究表明腫瘤相關(guān)單核巨噬細(xì)胞主要扮演促腫瘤的角色。cd93是一種c型凝集素14家族蛋白，主要由內(nèi)皮細(xì)胞以及單核巨噬細(xì)胞表達(dá)，在體內(nèi)發(fā)揮著促進(jìn)血管生成和調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的功能。cd93已被報(bào)道在腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞上高表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤血管生成進(jìn)而調(diào)控腫瘤的進(jìn)展。

4、目前，有關(guān)單核巨噬細(xì)胞表達(dá)的cd93水平在肝癌患者預(yù)后生存中的研究還尚未有報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的cd93蛋白與cd68蛋白水平的試劑在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

2、本發(fā)明的另一目的是提供一種用于肝癌切除術(shù)后預(yù)后預(yù)測(cè)的免疫組化染色檢測(cè)試劑盒。

3、本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

4、本發(fā)明研究發(fā)明，只有癌旁間質(zhì)區(qū)域的巨噬細(xì)胞才高表達(dá)cd93。而巨噬細(xì)胞高表達(dá)cd93的表型與肝癌患者的預(yù)后生存情況高度相關(guān)。因此本發(fā)明提供以下應(yīng)用方案：

5、測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的標(biāo)志物水平的試劑在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用，所述標(biāo)志物為cd93蛋白與cd68蛋白。

6、測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的巨噬細(xì)胞cd93水平的試劑在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

7、測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的標(biāo)志物水平的抗體在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用，所述標(biāo)志物為cd93蛋白與cd68蛋白。

8、測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的標(biāo)志物水平的抗體在制備肝癌切除術(shù)后預(yù)后的免疫組化檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，所述標(biāo)志物為cd93蛋白與cd68蛋白。

9、具體地，所述肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)為肝癌切除術(shù)后患者生存期預(yù)測(cè)。

10、本發(fā)明利用數(shù)字切片掃描儀和qupath等專業(yè)圖像處理軟件分析肝癌癌旁間質(zhì)中cd68分子單陽(yáng)性細(xì)胞、cd93與cd68分子雙陽(yáng)性細(xì)胞的密度，分別采用中位值法將肝癌患者分為高低兩組。在本發(fā)明中，通過(guò)中位值法分別確定cd68分子單陽(yáng)性細(xì)胞密度大于等于405.7cells/mm2為高表達(dá)組，低于該值的樣本為低表達(dá)組；cd93與cd68分子雙陽(yáng)性細(xì)胞密度大于等于22.1cells/mm2為高表達(dá)組，低于該值的樣本為低表達(dá)組。高表達(dá)組則提示肝癌患者預(yù)后生存期較差，低表達(dá)組則提示肝癌患者預(yù)后生存期較好，且與cd68分子單陽(yáng)性細(xì)胞密度指標(biāo)相比，以cd93與cd68分子雙陽(yáng)性細(xì)胞密度作為預(yù)測(cè)指標(biāo)能更精準(zhǔn)地評(píng)估肝癌患者的預(yù)后生存情況。因此，本發(fā)明提供以下優(yōu)選方案：

11、作為可實(shí)施的優(yōu)選方案，通過(guò)分析肝癌癌旁間質(zhì)區(qū)域中cd93和cd68雙陽(yáng)性細(xì)胞的密度，以cd68單陽(yáng)性密度405.7cells/mm2，cd93和cd68雙陽(yáng)性細(xì)胞密度22.1cells/mm2為閾值，若高于閾值則預(yù)測(cè)患者預(yù)后生存期差，若低于閾值則預(yù)測(cè)患者預(yù)后生存期好。

12、另外，本發(fā)明還提供一種用于肝癌切除術(shù)后預(yù)后預(yù)測(cè)的免疫組化染色檢測(cè)試劑盒，包括第一抗體和第二抗體，所述第一抗體為cd93與cd68的抗體的組合。

13、作為可選擇的實(shí)施方案，所述第二抗體是辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的第二抗體。

14、作為可選擇的實(shí)施方案，所述免疫組化染色檢測(cè)試劑盒還包含aec顯色試劑。

15、作為可選擇的實(shí)施方案，所述aec顯色試劑為3-氨基-9-乙基卡唑。

16、作為可選擇的實(shí)施方案，所述免疫組化染色檢測(cè)試劑盒還包含免疫組化檢測(cè)所需試劑。

17、本發(fā)明具有以下有益效果：

18、本發(fā)明研究表明，只有癌旁間質(zhì)區(qū)域的巨噬細(xì)胞才高表達(dá)cd93。而巨噬細(xì)胞高表達(dá)cd93的表型與肝癌患者的預(yù)后生存情況高度相關(guān)。因此，本發(fā)明通過(guò)分析肝癌癌旁間質(zhì)區(qū)域中cd93和cd68雙陽(yáng)性細(xì)胞的密度，以cd68單陽(yáng)性密度405.7cells/mm2，cd93和cd68雙陽(yáng)性細(xì)胞密度22.1cells/mm2為閾值，來(lái)更加高效準(zhǔn)確地評(píng)估肝癌患者的預(yù)后生存情況。

19、另外，本發(fā)明還提供一種用于肝癌切除術(shù)后預(yù)后預(yù)測(cè)的雙抗體檢測(cè)試劑盒，該試劑盒可通過(guò)多重免疫組化染色方法檢測(cè)癌旁間質(zhì)區(qū)域表達(dá)cd93巨噬細(xì)胞的密度，相比于巨噬細(xì)胞密度指標(biāo)，具有更高效準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)，更能有效預(yù)測(cè)肝癌患者手術(shù)切除后的生存情況，并能幫助醫(yī)生選擇適合治療手段進(jìn)而提高患者的治療效果，最終實(shí)現(xiàn)延長(zhǎng)患者生存時(shí)間的目的，具有很好的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的標(biāo)志物水平的試劑在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用，所述標(biāo)志物為cd93蛋白與cd68蛋白。

2.測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的巨噬細(xì)胞cd93水平的試劑在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

3.測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的標(biāo)志物水平的抗體在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用，所述標(biāo)志物為cd93蛋白與cd68蛋白。

4.測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的標(biāo)志物水平的抗體在制備肝癌切除術(shù)后預(yù)后的免疫組化檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，所述標(biāo)志物為cd93蛋白與cd68蛋白。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述應(yīng)用，其特征在于，所述肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)為肝癌切除術(shù)后患者生存期預(yù)測(cè)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述應(yīng)用，其特征在于，通過(guò)分析肝癌癌旁間質(zhì)區(qū)域中cd93和cd68雙陽(yáng)性細(xì)胞的密度，以cd68單陽(yáng)性密度405.7cells/mm2，cd93和cd68雙陽(yáng)性細(xì)胞密度22.1cells/mm2為閾值，若高于閾值則預(yù)測(cè)患者預(yù)后生存期差，若低于閾值則預(yù)測(cè)患者預(yù)后生存期好。

7.一種用于肝癌切除術(shù)后預(yù)后預(yù)測(cè)的免疫組化染色檢測(cè)試劑盒，包括第一抗體和第二抗體，其特征在于，所述第一抗體為cd93與cd68的抗體的組合。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述免疫組化染色檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述第二抗體是辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的第二抗體。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述免疫組化染色檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包含aec顯色試劑。

10.根據(jù)權(quán)利要求7～9任一所述免疫組化染色檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包含免疫組化檢測(cè)所需試劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于肝癌疾病預(yù)后診斷技術(shù)領(lǐng)域，提供了測(cè)定肝癌患者癌旁組織中的標(biāo)志物水平的試劑在制備肝癌預(yù)后預(yù)測(cè)試劑盒中的應(yīng)用，所述標(biāo)志物為CD93蛋白與CD68蛋白。本發(fā)明研究表明，只有癌旁間質(zhì)區(qū)域的巨噬細(xì)胞才高表達(dá)CD93。而巨噬細(xì)胞高表達(dá)CD93的表型與肝癌患者的預(yù)后生存情況高度相關(guān)。因此，本發(fā)明通過(guò)分析肝癌癌旁間質(zhì)區(qū)域中CD93和CD68雙陽(yáng)性細(xì)胞的密度，以CD68單陽(yáng)性密度405.7cells/mm<supgt;2</supgt;，CD93和CD68雙陽(yáng)性細(xì)胞密度22.1cells/mm<supgt;2</supgt;為閾值，來(lái)更加高效準(zhǔn)確地評(píng)估肝癌患者的預(yù)后生存情況。本發(fā)明能幫助醫(yī)生選擇適合治療手段進(jìn)而提高患者的治療效果，最終實(shí)現(xiàn)延長(zhǎng)患者生存時(shí)間的目的，具有很好的應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：吳艷,鄭利民,姜達(dá)
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中山大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10