本發(fā)明屬于檢測，特別涉及一種裂解劑triton?n-101含量的檢測方法。

背景技術：

1、triton?n-101別名聚乙二醇單辛基苯基醚，是一種非離子型表面活性劑，具有一定的刺激性。在流感病毒裂解疫苗和亞單位疫苗生產過程中，需加入裂解劑(如triton?n-101)進行病毒裂解，再經過純化，制備得到流感病毒裂解疫苗和亞單位疫苗?，F(xiàn)行版《中國藥典》三部“流感病毒裂解疫苗”中規(guī)定半成品中triton?n-101殘留量應小于300μg/ml，因此triton?n-101殘留量的檢測對于監(jiān)控疫苗產品質量較為重要。

2、目前對于triton?n-101殘留量檢測的相關研究較少，張鵬艷報道了硫氰鈷胺比色法檢測triton?n-101殘留量(張鵬艷,楊欣.硫氰鈷胺比色法檢測流感裂解疫苗中tritonn-101殘留量[c]//第五次全國免疫診斷暨疫苗學術研討會論文匯編.2011.)，依據《中國藥典》“3203聚山梨酯80殘留量測定法”進行檢定，其原理是triton?n-101含有和聚山梨酯80(吐溫80)相同的聚乙氧基，該基團能夠和銨鈷硫氰酸鹽反應形成藍色復合物，可溶于二氯甲烷，從而用比色法測定出流感裂解疫苗和亞單位疫苗中的triton?n-101殘留量。

3、但是該檢測方法僅適用于疫苗中不含有聚山梨酯80和/或含聚乙氧基的干擾物存在，并且實驗步驟過于繁瑣。張艷報道了另一種比色法測定triton?n-101殘留量(張艷,潘曉男,任靜.流感疫苗中裂解劑tritonn-101殘余量的快速檢測方法[j].中國生物制品學雜志,2007,20(9):3.)，通過扣除樣品中蛋白吸光度值的差值來計算樣品中的裂解劑含量，但實驗步驟繁瑣，專屬性較差。因此，實踐中亟需一種快速、準確、穩(wěn)定的檢測疫苗中tritonn-101殘留量的方法。

技術實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術中存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種triton?n-101含量的測定方法，所述方法包括將待測樣品采用rp-hplc-elsd法進行檢測的操作；所述rp-hplc-elsd法中采用的流動相包括流動相a、流動相b和流動相c；其中，流動相a為水，流動相b為甲醇，流動相c為異丙醇；所述方法采用所述流動相進行梯度洗脫。

2、優(yōu)選地，所述梯度洗脫的過程和參數包括：

3、0.0-1.0min時，流動相a、流動相b和流動相c的體積比為保持(40-60):(40-60):0；優(yōu)選保持50:50:0；

4、1.0-3.0min時，流動相a、流動相b和流動相c的體積比為從(40-60):(40-60):0線性變化至(10-30):(70-90):0；優(yōu)選為從50:50:0線性變化至20:80:0；

5、3.0-6.0min時，流動相a、流動相b和流動相c的體積比為從(10-30):(70-90):0線性變化至(0-10):(90-100):0；優(yōu)選為從20:80:0線性變化至5:95:0；

6、6.0-7.0min時，流動相a、流動相b和流動相c的體積比為(0-10):(90-100):0線性變化至(0-5)：(0-10)：(85-100)；優(yōu)選為從5:95:0線性變化至0:0:100；

7、7.0-9.0min時，流動相a、流動相b和流動相c的體積比為保持(0-5)：(0-10)：(85-100)；優(yōu)選保持0:0:100；

8、9.0-9.01min時，流動相a、流動相b和流動相c的體積比為從(0-5)：(0-10)：(85-100)線性變化至(40-60):(40-60):0；優(yōu)選為從0:0:100線性變化至50:50:0；

9、9.01-11.0min時，流動相a、流動相b和流動相c的體積比為保持(40-60):(40-60):0；優(yōu)選保持50:50:0。

10、本發(fā)明提供的裂解劑triton?n-101含量的檢測方法，尤其適用于含乳佐劑的亞單位流感疫苗中triton?n-101殘留量的準確測定，該檢測方法快速、準確、線性、專屬性好，不受乳佐劑各組分和樣品制劑組分中其他成分干擾，對于含乳佐劑的亞單位流感疫苗中triton?n-101殘留量檢測具有指導意義。

技術特征：

1.一種triton?n-101含量的測定方法，所述方法包括將待測樣品采用rp-hplc-elsd法進行檢測的操作；所述rp-hplc-elsd法中采用的流動相包括流動相a、流動相b和流動相c；其中，流動相a為水，流動相b為甲醇，流動相c為異丙醇；所述方法采用所述流動相進行梯度洗脫。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于：

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于：

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于：

7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于：

8.根據權利要求1-7中任一項所述的方法，其特征在于：

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：

10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其特征在于：

技術總結
本發(fā)明屬于檢測技術領域，提供了一種Triton?N?101含量的測定方法，包括將待測樣品采用RP?HPLC?ELSD法進行檢測的操作；所述RP?HPLC?ELSD法中采用的流動相包括流動相A、流動相B和流動相C；其中，流動相A為水，流動相B為甲醇，流動相C為異丙醇；該方法采用所述流動相進行梯度洗脫。本發(fā)明提供的方法可以準確測定含乳佐劑的亞單位流感疫苗中Triton?N?101的殘留量，快速、準確、線性、專屬性好，不受乳佐劑各組分和樣品制劑組分中其他成分干擾。

技術研發(fā)人員：喬曼,劉志磊,王少燕
受保護的技術使用者：易慧生物技術（上海）有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/19