本發(fā)明涉及藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法。

背景技術(shù)：

1、ii型糖尿病是一種慢性代謝疾病，多在35～40歲之后發(fā)病，占糖尿病患者90％以上?；颊咛卣鳛楦哐?、相對缺乏胰島素、胰島素抵抗等。磷酸西格列汀(sitagliptinphosphate)是一種二肽基肽酶4(dpp-4)抑制劑，在ii型糖尿病患者中可通過增加活性腸促胰島激素的水平而改善血糖控制。磷酸西格列汀是美國fda于2006年10月17日批準用于治療ii型糖尿病的首個ddp-4抑制劑。

2、磷酸西格列汀(sitagliptin?phosphate)，化學(xué)名稱7-[(3r)-3-氨基-1-氧-4-(2,4,5-三氟苯基)丁基]-5,6,7,8-四氫-3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑酮[4,3-a]吡嗪磷酸鹽(1:1)一水合物，分子式：c16h15f6n5o·h3po4·h2o，分子量：523.32，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

3、

4、目前，磷酸西格列汀原料藥在ep、usp和jp中均有收錄，其有關(guān)物質(zhì)使用色譜柱為氰基柱(150mm×4.6mm，5μm)，流動相為10mmol/l磷酸二氫鉀溶液(ph2.0)-乙腈(85∶15)，等度洗脫，使用該方法有關(guān)物質(zhì)v與主成分無法達到基線分離，而有關(guān)物質(zhì)v是生產(chǎn)成品的工藝雜質(zhì)，在加氫還原過程中極易生成的脫氟雜質(zhì)。在中試生產(chǎn)過程中，四個批次的樣品均檢出有關(guān)物質(zhì)v，其含量在0.10％～0.12％之間，均超過未知雜質(zhì)的限度(0.10％)，故需將有關(guān)物質(zhì)v訂入質(zhì)量標準中進行控制。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，解決磷酸西格列汀原料藥雜質(zhì)與主成分分離問題，該方法操作簡便，通用性強，可用于磷酸西格列汀原料藥的質(zhì)量控制與評價。

2、本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：

3、本發(fā)明提供了一種磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，包括如下步驟：

4、(1)供試品溶液配制；

5、(2)對照溶液配制；

6、(3)系統(tǒng)適用性溶液配制；

7、(4)空白溶液：0.1％磷酸溶液-乙腈v/v＝90:10；

8、(5)測定法：分別取上述空白溶液、系統(tǒng)適用性溶液、對照溶液、供試品溶液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按加校正因子的自身對照法計算雜質(zhì)；

9、所述磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法色譜條件為：

10、色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，柱長為100～150mm；

11、柱溫：15～25℃；流速：0.15～0.25ml/min；進樣量：1～3μl；

12、uv檢測器波長：200～210nm；

13、稀釋液v/v：0.1％磷酸溶液-乙腈＝90：10；

14、流動相a：v/v0.01～0.025mol/l用磷酸調(diào)節(jié)ph值至6～7磷酸氫二鉀溶液：甲醇＝95：5；

15、流動相b：v/v甲醇-乙腈＝70:30；流動相a和流動相b以不同的體積比進行梯度洗脫；

16、所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)分別是3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氫-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪、(r)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸、(3r)-3-氨基-4-(2,5-二氟苯基)-1-(3-(三氟甲基)-5,6-二氫-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8h)-基)丁烷-1-酮、(3r)-3-氨基-4-(2,4-二氟苯基)-1-(3-(三氟甲基)-5,6-二氫-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8h)-基)丁烷-1-酮、(3r)-3-氨基-4-(3,4-'二氟苯基)-1-(3-(三氟甲基)-5,6-二氫-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8h)-基)丁烷-1-酮、(r)-3-(((r)-1-苯基乙基)氨基)-1-(3-(三氟甲基)-5,6-二氫-[1,2,4]三唑[4,3-a]吡嗪-7(8h)-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-1-酮、1-[3-(三氟甲基)-5,6-二氫-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-7(8h)-基]-4-(2,4,5-三氟苯基)丁烷-1-酮。

17、本發(fā)明所檢測的磷酸西格列汀原料藥有關(guān)物質(zhì)化學(xué)名稱及結(jié)構(gòu)如下：

18、

19、進一步的，所述步驟(1)具體為取自制磷酸西格列汀原料藥適量，用稀釋液溶解并稀釋制成1.25mg/ml的溶液，作為供試品溶液。

20、進一步的，所述步驟(2)具體為精密量取供試品溶液適量，用稀釋液稀釋制成濃度為1.25μg/ml的溶液，作為對照溶液。

21、進一步的，所述步驟(3)具體為分別精密取磷酸西格列汀對照品與各有關(guān)物質(zhì)對照品適量，加適量乙腈溶解，用稀釋液制成含磷酸西格列汀為1.25mg/ml，有關(guān)物質(zhì)為1.875μg/ml的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。

22、進一步的，所述色譜條件為，柱溫為18-20℃；流速為0.18-0.22ml/min，uv檢測器檢測波長為203-207nm。

23、進一步的，使用的色譜柱尺寸2.1×100mm，1.7μm，柱溫為20℃；流速為0.2ml/min，進樣量為1μl，uv檢測器檢測波長為205nm；流動相a為0.01mol/l磷酸氫二鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)ph值至6.6)：甲醇＝95：5；流動相b為甲醇：乙腈＝70：30。

24、本發(fā)明中化合物的中文命名與結(jié)構(gòu)式有沖突的，以結(jié)構(gòu)式為準；結(jié)構(gòu)式有明顯錯誤的除外。

25、本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供了磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，通過對色譜條件進行反復(fù)優(yōu)化篩選，包括流動相的ph(1.96～10.82)；色譜柱類型(c18柱、phenyl柱、cyano柱、pfp柱)；流動相(有機相和添加劑)；不同梯度；稀釋液；色譜柱溫度等，最終確定本發(fā)明的分析方法。該方法能夠?qū)崿F(xiàn)多種雜質(zhì)與主成分的有效分離及定量檢測，實現(xiàn)了各色譜峰之間的有效分離，該法簡便易行。其專屬性、檢測限與定量限、線性范圍、準確度、精密度、重復(fù)性、耐用性等試驗均良好，可用于磷酸西格列汀成品及其有關(guān)物質(zhì)的常規(guī)分析及定量檢測，滿足研發(fā)及生產(chǎn)的需求。

技術(shù)特征：

1.磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)具體為取自制磷酸西格列汀原料藥適量，用稀釋液溶解并稀釋制成1.25mg/ml的溶液，作為供試品溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)具體為精密量取供試品溶液適量，用稀釋液稀釋制成濃度為1.25μg/ml的溶液，作為對照溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，所述步驟(3)具體為分別精密取磷酸西格列汀對照品與各有關(guān)物質(zhì)對照品適量，加適量乙腈溶解，用稀釋液制成含磷酸西格列汀為1.25mg/ml，有關(guān)物質(zhì)為1.875μg/ml的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，所述的梯度洗脫程序為：0-3min，90％-90％a，10％-10％b；3-15min，90％-45％a，10-55％b；15-20min，45％-20％a，55％-80％b；20-25min，20％-20％a，80％-80％b；25-25.1min，20％-90％a，80％-10％b；25.1-30min，90％～90％a，10％～10％b。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，所述色譜條件為，柱溫為18-20℃；流速為0.18-0.22ml/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，所述uv檢測器檢測波長為203-207nm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，使用的色譜柱尺寸2.1×100mm，1.7μm，柱溫為20℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，流速為0.2ml/min，進樣量為1μl，uv檢測器檢測波長為205nm。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的hplc檢測方法，其特征在于，流動相a為0.01mol/l磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)ph值至6.6：甲醇＝95：5；流動相b為甲醇：乙腈＝70：30。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的HPLC檢測方法，本發(fā)明能夠?qū)崿F(xiàn)多種雜質(zhì)的有效分離及定量檢測，實現(xiàn)了各色譜峰之間的有效分離，且各色譜峰峰形良好，能夠準確定性及定量磷酸西格列汀及其有關(guān)物質(zhì)情況，該法簡便易行；其專屬性、檢測限與定量限、線性范圍、準確度、精密度、重復(fù)性、耐用性、穩(wěn)定性等試驗均良好，表明其可用于磷酸西格列汀原料藥及其有關(guān)物質(zhì)的常規(guī)分析及定量檢測，滿足研發(fā)及生產(chǎn)的需求。

技術(shù)研發(fā)人員：衣學(xué)福,陳葉,孫光祥,劉榮,黃冰,沈娟,孫彥
受保護的技術(shù)使用者：常州制藥廠有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10