本申請(qǐng)涉及生物分析領(lǐng)域。具體地，本申請(qǐng)涉及一種用于檢測(cè)樣品中各抗體及其酸堿電荷異質(zhì)體含量的方法。

背景技術(shù)：

1、單克隆抗體藥物具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、安全性好的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)已成為全球制藥領(lǐng)域發(fā)展主流之一。在抗體藥物治療過(guò)程中，往往需要對(duì)患者同時(shí)給予多種單克隆抗體進(jìn)行協(xié)同治療，多種單克隆抗體(mab)聯(lián)合用藥的療效明顯更優(yōu)；而共處方蛋白制劑是通過(guò)聯(lián)合用藥機(jī)制和劑量使用多種單克隆抗體組合成單一處方一并用藥，這給患者用藥帶來(lái)更多的有效性和便利性；對(duì)于共處方制劑，監(jiān)管機(jī)構(gòu)需要一種方法來(lái)定量確認(rèn)共處方制劑的成分組成和各組分的含量；研發(fā)者需要一種方法來(lái)定量共處方制劑的成分組成和各組分含量，同時(shí)保證工藝過(guò)程的穩(wěn)定性。

2、多種治療性抗體的聯(lián)合治療可在不犧牲安全性的情況下提高療效。開(kāi)發(fā)聯(lián)合治療的策略包括兩種或兩種以上單克隆抗體(mab)的聯(lián)合給藥和兩種或兩種以上單克隆抗體(mab)或雙特異性抗體(bsab)的共處方制劑(co-formulation)到一種制劑(dp)中。為了能夠使用共處方抗體制劑進(jìn)行聯(lián)合治療，共處方制劑的安全性和有效性與多個(gè)單組制劑聯(lián)合給藥時(shí)的情況應(yīng)相似；盡管共處方制劑方法提供了幾個(gè)優(yōu)勢(shì)，包括減少用藥錯(cuò)誤和增強(qiáng)患者便利性，但也增加了藥物的復(fù)雜性以及產(chǎn)品開(kāi)發(fā)過(guò)程的難度，為產(chǎn)品表征和控制帶來(lái)了質(zhì)量挑戰(zhàn)。即使共處方制劑中的單個(gè)抗體已作為單藥治療藥物完成了全面的療效和安全性檢測(cè)，但重要的是進(jìn)行穩(wěn)定性研究，以證明它們聯(lián)合使用時(shí)它們之間的相互作用風(fēng)險(xiǎn)較低。當(dāng)多種藥物根據(jù)治療需要組合成單一制劑時(shí)，即共處方制劑時(shí)，必須保證各藥物的質(zhì)量可控和安全性。當(dāng)共處方制劑的抗體具有相似的理化性質(zhì)和不同的濃度時(shí)，這種挑戰(zhàn)尤其加劇。此外，共處方制劑中每種抗體在大小、電荷和翻譯后修飾方面可表現(xiàn)出生產(chǎn)過(guò)程中的異質(zhì)性。鑒于這些原因，需要表征和了解共處方制劑組分中各mab或bsab之間的相互作用。

3、現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道了針對(duì)于共處方蛋白制劑的含量測(cè)定，使用了hic技術(shù)對(duì)共處方制劑中各蛋白進(jìn)行分離和定量，該方法僅僅對(duì)樣品中蛋白組分含量進(jìn)行測(cè)定，但無(wú)法獲得其它更多樣品信息。另一篇現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道了sec-hplc(尺寸排阻色譜)技術(shù)可在各組分相似的情況下測(cè)定總的聚集體，但是無(wú)法測(cè)出每一種組分的具體含量。此外還有文獻(xiàn)報(bào)道了icief(全柱成像毛細(xì)管等電聚焦電泳技術(shù))為蛋白酸堿電荷異質(zhì)體的金方法。但是其僅可以對(duì)pi值差距較大時(shí)能夠?qū)蔡幏街懈鞯鞍走M(jìn)行分別測(cè)定，當(dāng)共處方中蛋白pi值差距較小時(shí)，蛋白1的酸堿電荷異質(zhì)體與蛋白2的酸堿電荷異質(zhì)體會(huì)出現(xiàn)重疊，干擾判斷。

4、綜上，開(kāi)發(fā)一種能夠測(cè)定含有兩種或兩種以上理化性質(zhì)相似的共處方制劑中各蛋白含量和各組分酸堿電荷異質(zhì)體的方法，成為開(kāi)發(fā)共處方制劑的一個(gè)亟需解決的技術(shù)問(wèn)題，同時(shí)由于多種組分同時(shí)存在的復(fù)雜性，使得該技術(shù)開(kāi)發(fā)面臨重大挑戰(zhàn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N用于檢測(cè)樣品中各抗體及其酸堿電荷異質(zhì)體含量的方法，該方法包括：通過(guò)陽(yáng)離子交換色譜對(duì)樣品中各抗體及其酸堿電荷異質(zhì)體的含量進(jìn)行檢測(cè)，樣品中包含至少兩種抗體及其酸堿電荷異質(zhì)體。

2、有益效果：

3、本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N從包含兩種或多種抗體分子的樣品中定量各抗體含量和對(duì)應(yīng)酸堿電荷異質(zhì)體含量的方法，該方法包括通過(guò)陽(yáng)離子交換色譜(cex-hplc)從共處方抗體制劑中分離兩種或多種抗體以及各抗體的酸堿電荷異質(zhì)體，并定量每個(gè)抗體和對(duì)應(yīng)酸堿電荷異質(zhì)體的含量的過(guò)程；其中，兩個(gè)或多個(gè)抗體在cex-hplc上單獨(dú)運(yùn)行時(shí)，分別在不同的運(yùn)行時(shí)間洗脫，與共處方抗體制劑中其它抗體以及對(duì)應(yīng)酸堿電荷異質(zhì)體沒(méi)有重疊。同時(shí)上述方法具有很高的精密度和重復(fù)性，而且操作簡(jiǎn)單，成本低，可進(jìn)行高通量化地應(yīng)用，易于被廣泛推廣。

技術(shù)特征：

1.一種用于檢測(cè)樣品中各抗體及其酸堿電荷異質(zhì)體含量的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述檢測(cè)的過(guò)程為梯度洗脫過(guò)程，所述梯度洗脫過(guò)程中使用第一流動(dòng)相和第二流動(dòng)相，所述第一流動(dòng)相包括第一緩沖液和鹽酸，所述第一緩沖液為咪唑、2-甲基哌嗪和三羥甲基氨基甲烷的混合液，第二流動(dòng)相包括所述第一緩沖液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一緩沖液中，咪唑、2-甲基哌嗪和三羥甲基氨基甲烷的物質(zhì)的量之比為(1～6):(1～6):(1～6)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述第一流動(dòng)相的ph為5.0～6.5，所述第二流動(dòng)相的ph為9.0～11.5。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，第二流動(dòng)相還包括水和/或氯化鈉，所述第一流動(dòng)相的ph為5.0～6.5，所述第二流動(dòng)相的ph為9.0～11.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述第一緩沖液中，咪唑、2-甲基哌嗪和三羥甲基氨基甲烷的濃度依次為2～12mmol/l，2～12mmol/l，2～12mmol/l。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述檢測(cè)的過(guò)程在設(shè)置有陽(yáng)離子交換色譜柱的高效液相色譜儀中進(jìn)行，檢測(cè)條件如下：

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品為包含至少兩種抗體及其酸堿電荷異質(zhì)體的原料藥和/或制劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，各所述抗體均為單克隆抗體，或至少一種所述抗體為雙特異性抗體。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，當(dāng)所述樣品包括制劑時(shí)，所述制劑為單一共處方蛋白制劑，或至少兩種單一共處方蛋白制劑的混合物。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N用于檢測(cè)樣品中各抗體及其酸堿電荷異質(zhì)體含量的方法。該方法包括：采用陽(yáng)離子交換色譜對(duì)所述樣品中各抗體及其酸堿電荷異質(zhì)體的含量進(jìn)行檢測(cè)，樣品中包含至少兩種抗體。本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N從包含兩種或多種抗體分子的樣品中定量各抗體含量和對(duì)應(yīng)酸堿電荷異質(zhì)體含量的方法，該方法包括通過(guò)陽(yáng)離子交換色譜(CEX?HPLC)從共處方抗體制劑中分離兩種或多種抗體以及各抗體的酸堿電荷異質(zhì)體，并定量每個(gè)抗體和對(duì)應(yīng)酸堿電荷異質(zhì)體的含量的過(guò)程；其中，兩個(gè)或多個(gè)抗體在CEX?HPLC上單獨(dú)運(yùn)行時(shí)，分別在不同的運(yùn)行時(shí)間洗脫，與共處方抗體制劑中其它抗體以及對(duì)應(yīng)酸堿電荷異質(zhì)體沒(méi)有重疊。

技術(shù)研發(fā)人員：吳衛(wèi)良,王曉輝,郭哲明,吳紅兵
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海藥明生物技術(shù)有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10