本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，具體涉及一種通用的抗血栓物質活性檢測方法。

背景技術：

1、在生物醫(yī)藥領域，尤其是抗血栓治療和研究中，準確評估抗血栓藥物活性至關重要。

2、傳統(tǒng)的抗血栓活性檢測方法，如凝血酶滴定法、白瓷板滴定法、血漿復鈣時間測定方法和發(fā)色底物測定法等，凝血酶滴定法的操作相對簡單，在臨床和研究中廣泛應用，但仍存在一些局限性，測定結果容易受到環(huán)境溫度和凝血酶活力的影響，這要求實驗操作在嚴格控制的環(huán)境條件下進行，并且該方法只針對于直接作用于凝血酶的抗凝劑，不具備通用性。白瓷板滴定法使用白瓷板作為滴定終點的指示，可以直觀地觀察到顏色變化，有助于判斷反應是否完成。不足之處是由于白瓷板滴定依賴于顏色變化的主觀判斷，可能會受到觀察者主觀因素的影響，從而影響滴定的準確性。血漿復鈣時間測定方法可以快速得到結果，對于需要快速診斷的情況有其優(yōu)勢。但是該方法只能通過肉眼觀察，會造成誤差，只能定量分析，無法進行定性分析。發(fā)色底物法對于檢測的物質具有較高的靈敏度，能夠提供相對準確的測定結果，但是具有單一性一種發(fā)色底物只適用一種物質，且成本高，不廣泛適用，且對實驗室條件有一定要求。

3、近年來，隨著對抗血栓藥物的深入研究，人們開始尋求更為簡便、快速且成本效益高的檢測方法。例如水蛭素，作為一種強效的凝血酶抑制劑，其抗凝血活性的準確測定對于評估其作為潛在治療劑的應用前景具有重要意義。然而，現(xiàn)有的檢測手段往往無法滿足快速、高通量篩選的需求，尤其是在藥物開發(fā)和臨床前研究階段。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于至少解決現(xiàn)有技術中存在的技術問題之一，提供一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，該方法不僅能夠克服現(xiàn)有技術的局限，還能提供一種操作簡便、成本低，效益高、檢測速度快，通用性廣且結果準確的抗血栓物質活性檢測方法。

2、本發(fā)明的技術解決方案如下：

3、一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，包括以下步驟：

4、將待測抗血栓物質通過0.9%氯化鈉溶液進行稀釋，然后經過離心處理，吸取上清液作為待測溶液；

5、將血液加入到模具中，靜置，待所述血液凝固成血塊后，將所述血塊按壓擠入裝有0.9%氯化鈉緩沖液的容器中浸泡，取出所述血塊，吸干表面水分，得到處理后的血塊；

6、將所述待測溶液加入離心管中，在預設波長下測量其吸光度初始值；繼續(xù)往所述離心管中加入所述處理后的血塊，以預設時間搖晃所述離心管，在同一波長下測定其吸光度終點值；

7、比較所述待測溶液的吸光度終點值和吸光度初始值，得到吸光度相對變化量，即檢測出抗血栓物質活性。

8、可選地，所述檢測方法還包括：

9、將0.9%氯化鈉緩沖液加入另一離心管中作為陰性對照組，在同一波長下測量陰性對照組的吸光度初始值；繼續(xù)往所述離心管中加入所述處理后的血塊，以預設時間搖晃所述離心管，在同一波長下測定陰性對照組的吸光度終點值。

10、可選地，比較所述待測溶液的吸光度相對變化量和陰性對照組的吸光度相對變化量，即檢測出抗血栓物質活性。

11、可選地，所述預設波長為500-600nm，所述預設時間為10~60min。

12、可選地，所述預設時間包括第一預設時間、第二預設時間和第三預設時間，所述第一預設時間為10min，所述第二預設時間為30min，所述第三預設時間為60min。

13、可選地，將待測物質通過0.9%氯化鈉溶液進行稀釋2~10倍。

14、可選地，所述離心處理的轉速為3000-8000轉/分鐘，所述離心處理的時間為2-5分鐘。

15、可選地，用移液槍吸取所述血液，打入具有若干個圓柱狀凹槽的模具中，靜置5-10分鐘；

16、所述血液為動物血液，所述動物血液包括小白鼠、家兔、雞、鵪鶉的血液。

17、可選地，待血液凝固成血塊后，將所述血塊按壓擠入含有0.9%氯化鈉緩沖液的容器中浸泡5-10min。

18、10.根據權利要求1所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，所述待測抗血栓物質包括水蛭內容物、水蛭凍干粉。

19、本發(fā)明至少具有以下有益效果之一：

20、1、本發(fā)明提出了一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，通過對待測物質進行稀釋和離心，除去干擾雜質，然后將血夜通過模具凝固成血塊，確保了血塊的一致性，并通過浸泡去除了可能影響檢測結果的血清因素，最后用分光分光法測量吸光度的變化，可以準確地評估抗血栓效果。

21、2、本發(fā)明的檢測方法具有操作簡便、成本效益高、檢測速度快等優(yōu)點，適用于快速篩選和評估抗血栓物質的活性。該方法的通用性廣，不僅適用于水蛭內容物的檢測，也可推廣至其他潛在的抗血栓物質的活性評估。

技術特征：

1.一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，所述檢測方法還包括：

3.根據權利要求2所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，比較所述待測溶液的吸光度相對變化量和陰性對照組的吸光度相對變化量，即檢測出抗血栓物質活性。

4.根據權利要求2所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，所述預設波長為500-600nm，所述預設時間為10~60min。

5.根據權利要求4所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，所述預設時間包括第一預設時間、第二預設時間和第三預設時間，所述第一預設時間為10min，所述第二預設時間為30min，所述第三預設時間為60min。

6.根據權利要求1所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，將待測物質通過0.9%氯化鈉溶液進行稀釋2~10倍。

7.根據權利要求1所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，所述離心處理的轉速為3000-8000轉/分鐘，所述離心處理的時間為2-5分鐘。

8.根據權利要求1所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，

9.根據權利要求1所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，待血液凝固成血塊后，將所述血塊按壓擠入含有0.9%氯化鈉緩沖液的容器中浸泡5-10min。

10.根據權利要求1所述的一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，其特征在于，所述待測抗血栓物質包括水蛭內容物、水蛭凍干粉。

技術總結
本發(fā)明公開了一種通用的抗血栓物質活性檢測方法，涉及生物醫(yī)藥技術領域，包括：將待測抗血栓物質通過0.9%氯化鈉溶液稀釋，離心處理，吸取上清液作為待測溶液；將血液加入到模具中，靜置，待血液凝固成血塊后，將血塊按壓擠入0.9%氯化鈉緩沖液中浸泡，取出血塊，吸干表面水分；將待測溶液加入離心管中，在預設波長下測量其吸光度初始值；繼續(xù)加入處理后的血塊，以預設時間搖晃離心管，在同一波長下測定其吸光度終點值；比較待測溶液的吸光度終點值和吸光度初始值，得到吸光度相對變化量，即檢測出抗血栓物質活性。本發(fā)明的有益效果是檢測方法具有操作簡便、成本效益高、檢測速度快等優(yōu)點，適用于快速篩選和評估抗血栓物質的活性。

技術研發(fā)人員：葉天渝,林恭華,黃族豪
受保護的技術使用者：井岡山大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/19