本申請(qǐng)涉及釀酒，具體涉及一種基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法。

背景技術(shù)：

1、不同谷物制成的白酒，具有巨大的感官差異，在釀酒行業(yè)中，高粱具有舉足輕重的地位，作為釀造白酒的主要原料，高粱的品質(zhì)直接決定了白酒的質(zhì)量，其淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪、單寧等營養(yǎng)物質(zhì)在微生物的作用下經(jīng)過降解和合成作用形成乙醇及一系列呈香呈味物質(zhì)，共同鑄就了白酒的酒體風(fēng)格。

2、類胡蘿卜素是一類重要的天然色素的總稱，是一類呈黃色、橙色或紅色的具有多個(gè)共軛雙鍵的萜類物質(zhì)。類胡蘿卜素是在光合生物中發(fā)現(xiàn)的一類具有抗氧化性、抗炎性的天然色素，是一類人和動(dòng)物自身不能合成需要從外界攝取的一類色素，也是體內(nèi)維生素a的主要來源。類胡蘿卜素種類繁多，不同的類胡蘿卜素具有不同的生理功能，應(yīng)用領(lǐng)域也非常廣泛。近年來，類胡蘿卜素在谷物中提供生物功能也逐漸引起重視，類胡蘿卜素的含量和種類正成為谷物的一個(gè)重要品質(zhì)特征。

3、目前，分析檢測(cè)類胡蘿卜素的方法很多，主要包括紫外分光度法(uv)、薄層色譜(tlc)、高效液相色譜法(hplc)、超高效液相色譜法(uplc)、液相色譜–三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用法(lc-ms/ms)等，但這些方法需要對(duì)目標(biāo)物逐個(gè)優(yōu)化子離子及相關(guān)參數(shù)，不僅檢測(cè)時(shí)間長，還容易受基質(zhì)干擾而產(chǎn)生假陽性現(xiàn)象，效率和準(zhǔn)確性較差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本申請(qǐng)旨在解決現(xiàn)有檢測(cè)類胡蘿卜素的方式存在效率和準(zhǔn)確性較差的問題，提出一種基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法。

2、本申請(qǐng)解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：

3、基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，所述方法包括：

4、制作待檢測(cè)高粱的樣品溶液，并獲取多個(gè)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)溶液；

5、基于設(shè)定的液相條件和質(zhì)譜條件，在全掃模式下分別對(duì)所述樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析檢測(cè)；

6、根據(jù)所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的分析檢測(cè)結(jié)果建立類胡蘿卜素?cái)?shù)據(jù)庫，將所述樣品溶液的分析檢測(cè)結(jié)果與類胡蘿卜素?cái)?shù)據(jù)庫進(jìn)行對(duì)比，獲得樣品溶液的類胡蘿卜素定性檢測(cè)結(jié)果；

7、配制類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照品溶液，選擇離子監(jiān)測(cè)模式對(duì)所述對(duì)照品溶液進(jìn)行掃描，獲得對(duì)照品溶液中各個(gè)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的定量信號(hào)的質(zhì)譜峰強(qiáng)度數(shù)據(jù)；

8、根據(jù)所述質(zhì)譜峰強(qiáng)度數(shù)據(jù)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，質(zhì)譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)繪制各個(gè)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并確定各標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)應(yīng)的線性方程；

9、根據(jù)樣品溶液的類胡蘿卜素定性檢測(cè)結(jié)果以及對(duì)應(yīng)的線性方程計(jì)算樣品溶液中各類胡蘿卜素的含量，獲得樣品溶液的類胡蘿卜素定量檢測(cè)結(jié)果。

10、進(jìn)一步地，制作待檢測(cè)高粱的樣品溶液，具體包括：

11、稱取高粱粉末，加入提取液混合搖勻，所述提取液為含0.01％bht的己烷、丙酮和乙醇，己烷、丙酮和乙醇的比例為2:1:1；

12、低溫超聲萃取1h，在4℃下8000rpm離心8min，收集上清液，重復(fù)操作三至四次，直至萃取液無顏色；

13、在收集的上清液中加入飽和食鹽水溶液，用力搖晃30s，靜置分層，收集上層液體，濃縮氮吹，獲得樣品溶液。

14、進(jìn)一步地，所述液相條件為：

15、色譜柱：ymc?c30?carotenoid(150mm*2.1*2.6μm)；

16、流動(dòng)相a：甲醇：乙腈：水，流動(dòng)相b：甲基叔丁基醚；

17、柱溫：20℃；

18、進(jìn)樣量：1ul；

19、流速：0.2ml/min；

20、洗脫梯度程序：

21、0min-2min，流動(dòng)相a與流動(dòng)相b的體積比為100：0；

22、15min，流動(dòng)相a與流動(dòng)相b的體積比為60：40；

23、18min，流動(dòng)相a與流動(dòng)相b的體積比為20：80；

24、22min，流動(dòng)相a與流動(dòng)相b的體積比為0：100。

25、進(jìn)一步地，所述質(zhì)譜條件為：

26、掃描模式：full?scan-sim；

27、離子源：apci+；

28、離子傳輸管溫度：300℃；

29、離子源加熱溫度：350℃；

30、輔助氣：5arb；

31、鞘氣：45arb；

32、一級(jí)分辨率：12000；

33、sim模式分辨率：60000；

34、掃描范圍：40-1400。

35、進(jìn)一步地，所述多個(gè)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品包括新黃質(zhì)、花藥黃質(zhì)、3，-表葉黃素、葉黃素、辣椒紅素、玉米黃質(zhì)、e/z-八氫番茄紅素、海膽烯酮、e/z-六氫番茄紅素和β-胡蘿卜素。

36、進(jìn)一步地，獲得樣品溶液的類胡蘿卜素定性檢測(cè)結(jié)果，具體包括：

37、對(duì)所述樣品溶液的分析檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)篩選，將篩選結(jié)果中每個(gè)類胡蘿卜素的保留時(shí)間和二級(jí)碎片離子信息與類胡蘿卜素?cái)?shù)據(jù)庫進(jìn)行對(duì)比，獲得樣品溶液的類胡蘿卜素定性檢測(cè)結(jié)果。

38、進(jìn)一步地，獲得樣品溶液的類胡蘿卜素定量檢測(cè)結(jié)果，具體包括：

39、將樣品溶液的分析檢測(cè)結(jié)果中的類胡蘿卜素的積分峰面積比值代入對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)方程中計(jì)算獲得濃度，根據(jù)所述濃度計(jì)算樣品溶液中對(duì)應(yīng)類胡蘿卜素的含量。

40、進(jìn)一步地，所述樣品溶液中對(duì)應(yīng)類胡蘿卜素的含量的計(jì)算公式如下：

41、

42、其中，m表示樣品溶液中對(duì)應(yīng)類胡蘿卜素的含量，c表示樣品溶液中對(duì)應(yīng)類胡蘿卜素的濃度，v表示樣品溶液的體積，m表示樣本溶液的質(zhì)量。

43、進(jìn)一步地，所述液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用為vanquish?flex?binary超高效液相色譜儀串聯(lián)orbitrap?exploris?120質(zhì)譜儀。

44、本申請(qǐng)的有益效果是：本申請(qǐng)?zhí)峁┑幕谝合嗌V-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，通過超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀在全掃模式下進(jìn)行定性分析，然后通過選擇離子監(jiān)測(cè)模式，利用目標(biāo)物母離子的精確質(zhì)荷比直接定量，無需對(duì)目標(biāo)物逐個(gè)優(yōu)化子離子及相關(guān)參數(shù)，降低檢測(cè)時(shí)間的同時(shí)又能很好地避免受基質(zhì)干擾而產(chǎn)生假陽性現(xiàn)象，提高了檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性，且通過建立類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)庫后，能夠更加準(zhǔn)確分析檢測(cè)相關(guān)類胡蘿卜素。

技術(shù)特征：

1.基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，制作待檢測(cè)高粱的樣品溶液，具體包括：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，所述液相條件為：

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，所述質(zhì)譜條件為：

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，所述多個(gè)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品包括新黃質(zhì)、花藥黃質(zhì)、3，-表葉黃素、葉黃素、辣椒紅素、玉米黃質(zhì)、e/z-八氫番茄紅素、海膽烯酮、e/z-六氫番茄紅素和β-胡蘿卜素。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，獲得樣品溶液的類胡蘿卜素定性檢測(cè)結(jié)果，具體包括：

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，獲得樣品溶液的類胡蘿卜素定量檢測(cè)結(jié)果，具體包括：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，所述樣品溶液中對(duì)應(yīng)類胡蘿卜素的含量的計(jì)算公式如下：

9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，其特征在于，所述液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用為vanquish?flex?binary超高效液相色譜儀串聯(lián)orbitrap?exploris?120質(zhì)譜儀。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)涉及釀酒技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種基于液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)高粱中類胡蘿卜素的方法，旨在解決現(xiàn)有檢測(cè)類胡蘿卜素的方式存在效率和準(zhǔn)確性較差的問題，方案主要包括：制作待檢測(cè)高粱的樣品溶液，并獲取多個(gè)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)溶液；在全掃模式下分別對(duì)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用分析檢測(cè)；根據(jù)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液的分析檢測(cè)，獲得樣品溶液的類胡蘿卜素定性檢測(cè)結(jié)果；配制類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照品溶液，選擇離子監(jiān)測(cè)模式對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行掃描，繪制各個(gè)類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線；計(jì)算樣品溶液中各類胡蘿卜素的含量。本申請(qǐng)?zhí)岣吡祟惡}卜素檢測(cè)的效率和準(zhǔn)確性，特別適用于釀酒高粱。

技術(shù)研發(fā)人員：柴瑤,楊康卓,鄭佳,王建力,趙東,蘇建
受保護(hù)的技術(shù)使用者：宜賓五糧液股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10