發(fā)明領(lǐng)域本申請(qǐng)屬于抗體領(lǐng)域和生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體地，本申請(qǐng)?zhí)峁┝撕锒徊《究焖贆z測(cè)試紙及特異性單克隆抗體。

背景技術(shù)：

1、猴痘是一種由猴痘病毒(monkeypox?virus，mpxv)感染所致的一種人獸共患病毒性疾病，臨床上主要表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹、淋巴結(jié)腫大。

2、猴痘病毒是一種包膜雙鏈dna病毒，屬痘病毒科正痘病毒屬，是能對(duì)人類致病的4種正痘病毒之一，另外3種分別是天花病毒(variola?virus，varv)、痘苗病毒(vacciniavirus，vacv)和牛痘病毒(cowpox?virus，cpxv)。電鏡下猴痘病毒顆粒呈磚形或橢圓形，病毒顆粒存在有兩種感染形式:胞外包膜病毒(enveloped?virion，ev)和胞內(nèi)成熟毒粒(mature?virion，mv)，ev是病毒在細(xì)胞內(nèi)獲得一層外膜形成的，mv形式最為豐富，在環(huán)境中也最穩(wěn)定，是病毒在宿主間傳播的主要形式。目前已有20多重結(jié)構(gòu)蛋白在mv和ev病毒顆粒表面被鑒定，其中不少是中和抗體識(shí)別的靶抗原。其中a29l主要與細(xì)胞表面糖胺聚糖結(jié)合，介導(dǎo)病毒和細(xì)胞的融合，是猴痘病毒mv的重要膜蛋白，在痘苗病毒和牛痘病毒中與之同源的分別為a27l和162蛋白；

3、目前，pcr作為猴痘特異診斷的主要技術(shù)，但依賴于設(shè)備且易造成污染，目前也尚未建立核酸檢測(cè)以外的其他檢測(cè)方法。因此，需要密切關(guān)注猴痘病毒的流行情況，加強(qiáng)病毒檢測(cè)和監(jiān)測(cè)，盡快開發(fā)診斷試劑方法，以應(yīng)對(duì)猴痘病毒可能出現(xiàn)的流行。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝撕锒徊《究焖贆z測(cè)試紙，所述試紙為免疫層析試紙，其中包含猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4和猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5；

2、所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：sytfscyw、h-cdr2：ilpasgst、h-cdr3：ssalctiittrgmdc；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：ssvnf、l-cdr2：sts、l-cdr3：hqwssypwt；

3、所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：gftvtsyw、h-cdr2：ilpgcdst、h-cdr3：stalstmittrgmdc；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：lsnvdsngnty、l-cdr2：kv、l-cdr3：fehshvplt。

4、進(jìn)一步地，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的重鏈氨基酸序列為seq?idno.1，和/或所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.6；

5、所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的重鏈氨基酸序列為seq?id?no.11，和/或所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.16。

6、進(jìn)一步地，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4為試紙上的劃膜抗體；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5為試紙上的標(biāo)記抗體。

7、進(jìn)一步地，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5上標(biāo)記有乳膠微球。

8、本申請(qǐng)免疫層析試紙中可用于標(biāo)記物不限于各種顏色的乳膠微球，經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)恼{(diào)整和驗(yàn)證，膠體金等標(biāo)記也可以使用。

9、進(jìn)一步地，所述試紙包含背板、硝酸纖維膜、乳膠微球墊、樣品墊、吸水紙；乳膠微球墊上噴涂有標(biāo)記有乳膠微球的猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5；硝酸纖維膜噴涂有猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4。

10、本申請(qǐng)免疫層析試紙的結(jié)構(gòu)不局限于上述基本結(jié)構(gòu)，在抗體不變的基礎(chǔ)上，其他基于雙抗夾心法的免疫層析試紙的部分和結(jié)構(gòu)也可以常規(guī)換用。背板、膜和墊部分的材料可以選用各種可用的種類。

11、另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝藱z測(cè)猴痘病毒的非診斷方法，所述方法使用上述猴痘病毒快速檢測(cè)試紙進(jìn)行檢測(cè)。

12、所述非診斷方法包括但不限于檢測(cè)環(huán)境、器械、食品、藥品是否受到病毒污染的方法。

13、另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝撕锒徊《咎禺愋詥慰寺】贵w，所述單克隆抗體重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：sytfscyw、h-cdr2：ilpasgst、h-cdr3：ssalctiittrgmdc；所述單克隆抗體輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：esvdnyglsf、l-cdr2：aa、l-cdr3：qqskevpwt；或者單克隆抗體重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：gftvtsyw、h-cdr2：ilpgcdst、h-cdr3：stalstmittrgmdc；所述單克隆抗體輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：lsnvdsngnty、l-cdr2：kv、l-cdr3：fehshvplt。

14、進(jìn)一步地，所述單克隆抗體重鏈氨基酸序列為seq?id?no.1，所述單克隆抗體輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.6；或者，所述單克隆抗體重鏈氨基酸序列為seq?id?no.11，所述單克隆抗體輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.16。

15、另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝松鲜鰡慰寺】贵w在制備猴痘病毒檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

16、所述檢測(cè)試劑不限于上述雙抗夾心法免疫層析試紙，包括但不限于阻斷法免疫層析試紙、一般elisa方法檢測(cè)試劑等均在本申請(qǐng)的保護(hù)范圍之內(nèi)。

17、另一方面，本申請(qǐng)?zhí)峁┝司幋a猴痘病毒特異性單克隆抗體的基因，所述基因包含seq?id?no.5和seq?id?no.10，或者所述基因包含seq?id?no.15和seq?id?no.20。

18、通過(guò)構(gòu)建載體、轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)、收獲、純化等本領(lǐng)域常規(guī)步驟，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用上述基因生產(chǎn)前述抗體，其中的載體、宿主細(xì)胞等本領(lǐng)域技術(shù)人員可以常規(guī)構(gòu)建。

技術(shù)特征：

1.猴痘病毒快速檢測(cè)試紙，其特征在于，所述檢測(cè)試紙為免疫層析試紙，其中包含猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4和猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的重鏈氨基酸序列為seq?id?no.1，和/或所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4的輕鏈氨基酸序列為seqid?no.6；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的重鏈氨基酸序列為seq?id?no.11，和/或所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5的輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.16。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)試紙，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4為試紙上的劃膜抗體；所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5為試紙上的標(biāo)記抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)試紙，所述猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5上標(biāo)記有乳膠微球。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)試紙，所述試紙包含背板、硝酸纖維膜、乳膠微球墊、樣品墊、吸水紙；乳膠微球墊上噴涂有標(biāo)記有乳膠微球的猴痘病毒特異性單克隆抗體9d5；硝酸纖維膜噴涂有猴痘病毒特異性單克隆抗體4c4。

6.檢測(cè)猴痘病毒的非診斷方法，其特征在于，所述方法使用根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的檢測(cè)試紙進(jìn)行檢測(cè)。

7.猴痘病毒特異性單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：sytfscyw、h-cdr2：ilpasgst、h-cdr3：ssalctiittrgmdc；所述單克隆抗體輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：esvdnyglsf、l-cdr2：aa、l-cdr3：qqskevpwt；或者單克隆抗體重鏈cdr的氨基酸序列為h-cdr1：gftvtsyw、h-cdr2：ilpgcdst、h-cdr3：stalstmittrgmdc；所述單克隆抗體輕鏈cdr的氨基酸序列為l-cdr1：lsnvdsngnty、l-cdr2：kvs、l-cdr3：fehshvplt。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈氨基酸序列為seq?idno.1，所述單克隆抗體輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.6；或者，所述單克隆抗體重鏈氨基酸序列為seq?id?no.11，所述單克隆抗體輕鏈氨基酸序列為seq?id?no.16。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的單克隆抗體在制備猴痘病毒檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

10.編碼猴痘病毒特異性單克隆抗體的基因，其特征在于，所述基因包含seq?id?no.5和seq?id?no.10，或者所述基因包含seq?id?no.15和seq?id?no.20。

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)?zhí)峁┝撕锒徊《究焖贆z測(cè)試紙及其中的猴痘病毒特異性抗體，該檢測(cè)試紙為免疫層析試紙，其中包含猴痘病毒特異性單克隆抗體4C4和猴痘病毒特異性單克隆抗體9D5。本申請(qǐng)的猴痘病毒快速檢測(cè)試紙對(duì)猴痘病毒具有良好的靈敏度和特異性，完善了猴痘病毒檢測(cè)手段。

技術(shù)研發(fā)人員：盧帥,宋文俊,孫宇天,李月
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京溯本源和生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19