本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)，具體涉及一種心臟切片染色裝置和染色方法。

背景技術(shù)：

1、ttc(2，3，5—氯化三苯基四氮唑)染色是組織損傷分析檢測中采用的步驟，借助ttc可與活細(xì)胞線粒體當(dāng)中的琥珀酸脫氫酶反應(yīng)呈現(xiàn)紅色的原理，來區(qū)分心肌梗死區(qū)和非梗死區(qū)。非梗死區(qū)為活細(xì)胞，被染成紅色；梗死區(qū)因細(xì)胞損傷或死亡而不被染色，呈白色。染色后，通過分析白色梗死區(qū)的面積大小以判斷心肌損傷的嚴(yán)重程度。ttc染色在腦組織、心臟組織以及腎臟組織的缺血缺氧性損傷分析中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，是實(shí)驗(yàn)室最常用的技術(shù)手段之一。

2、在目前已有的染色過程中，切片在何種容器中進(jìn)行染色無特別要求，普遍的操作是將切片浸泡在染液里即可。然而，來自不同組織的切片的染色效果存在巨大差異。最為直接的原因便是來自不同臟器的切片其結(jié)構(gòu)和組成存在顯著差異，如構(gòu)成腦組織的主要是神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞，而心肌組織主要由成纖維細(xì)胞、心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞構(gòu)成。其中，心肌細(xì)胞是具有顯著收縮特性的細(xì)胞。因此，腦組織切片在染色過程中可以保持較好的形態(tài)。但心臟切片在染色過程中常出現(xiàn)內(nèi)部隆起，組織皺縮的現(xiàn)象。心臟切片的不平整導(dǎo)致染色前后橫截面積出現(xiàn)顯著差異，這既導(dǎo)致切片原貌無法呈現(xiàn)，又增加了梗死面積分析的難度，造成了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出一種心臟切片染色裝置，以及采用該裝置的心臟切片染色方法。

2、本發(fā)明所采用的技術(shù)解決方案是：

3、一種心臟切片染色裝置，包括染色上盤和染色下盤，染色上盤置于染色下盤中，且染色上盤底部底側(cè)面與染色下盤底部頂側(cè)面密封貼合；

4、在染色上盤底部設(shè)置有切片孵育室和液路，切片孵育室和液路相連通，在液路的端部設(shè)置有試劑孔；

5、所述切片孵育室和液路均是由染色上盤底部底側(cè)面向上凸起形成，縱向截面呈凹槽狀，在染色上盤底部底側(cè)面處敞口；

6、當(dāng)染色上盤置于染色下盤中時，切片孵育室和液路的敞口由染色下盤底部頂側(cè)面封堵。

7、優(yōu)選的，每個液路均對應(yīng)與多個切片孵育室相連通。

8、優(yōu)選的，所述液路共設(shè)置兩個，分別為第一液路和第二液路，第一液路和第二液路呈垂直交叉布置，分隔出四個樣本區(qū)，第一液路和第二液路在對應(yīng)每個樣本區(qū)均分別與3個切片孵育室連通，所有切片孵育室沿第一液路或第二液路的長度方向排布。

9、優(yōu)選的，在每個樣本區(qū)均設(shè)置有一個記錄區(qū)。

10、優(yōu)選的，所述試劑孔設(shè)置在染色上盤的側(cè)面。

11、優(yōu)選的，所述切片孵育室的橫向截面呈圓弧狀，在圓弧狀的缺口處切片孵育室與液路連通。

12、優(yōu)選的，所述染色上盤和染色下盤均呈圓盤狀，染色下盤的頂端敞口，內(nèi)部中空；染色下盤的內(nèi)徑為染色上盤外徑的1.2-1.5倍，且染色上盤的高度高于染色下盤。

13、優(yōu)選的，所述染色上盤是采用透明材料加工制成的。

14、一種心臟切片染色方法，采用如上所述的裝置，包括以下步驟：

15、(1)染色前預(yù)先在樣本區(qū)的記錄區(qū)標(biāo)記樣本名稱；

16、(2)根據(jù)樣本名稱，將心臟切片轉(zhuǎn)移至染色上盤相應(yīng)樣本區(qū)的切片孵育室；

17、(3)心臟切片放好后，將染色上盤置入染色下盤；

18、(4)從試劑孔加入ttc染液，使ttc染液充盈液路和切片孵育室，使心臟切片浸在ttc染液中；

19、(5)將染色上盤和染色下盤放入37度條件下孵育，染色共進(jìn)行30-45分鐘；

20、(6)染色結(jié)束后，保持染色上盤位置不動，從試劑孔吸除ttc染液；然后從試劑孔加入多聚甲醛使其浸沒心臟切片；

21、(7)待固定結(jié)束，取出心臟切片進(jìn)行拍照或者直接對染色上盤進(jìn)行拍照，最后分析梗死區(qū)域的面積。

22、優(yōu)選的，步驟(5)中：在染色期間每隔10分鐘，從試劑孔吸除舊的ttc染液，并補(bǔ)給新鮮ttc染液，以保障切片處于良好的染色環(huán)境下。

23、本發(fā)明的有益技術(shù)效果是：

24、(1)本發(fā)明心臟切片染色裝置通過染色上盤和染色下盤的配合，并根據(jù)常規(guī)心臟切片的大小和厚度在染色上盤設(shè)置切片孵育室，為每一個心臟切片打造一個特定的染色空間，以解決染色過程中組織隆起的問題。本發(fā)明既可以避免組織因收縮而導(dǎo)致的切面隆起，又可以保持切面原有的平整度和形態(tài)，同時保障了心臟切片呈現(xiàn)時的視覺效果，更強(qiáng)有力地提高了梗死區(qū)域面積計(jì)算的精準(zhǔn)性。

25、(2)本發(fā)明設(shè)有試劑孔和液路，可以在不翻動切片的情況下，根據(jù)需要在染色過程中加入或者補(bǔ)加所需試劑。既減少操作步驟，節(jié)約大量的時間，又可以保護(hù)切片免于操作損傷，有效保障了切片形態(tài)的完美呈現(xiàn)。

26、(3)本發(fā)明設(shè)有多個樣本區(qū)，可以同時進(jìn)行多顆心臟的染色。一個樣本區(qū)設(shè)有多個切片孵育室，如具體可設(shè)置6個、8個等，也可以滿足一個心臟進(jìn)行多張連續(xù)切片的需求。

27、(4)本發(fā)明適用范圍廣，尤其適用于以心臟為代表的具有收縮特性的組織切片，既保證組織切面的呈現(xiàn)度，又減少因組織皺縮導(dǎo)致的樣本耗損。當(dāng)然，本發(fā)明裝置不局限于心臟切片染色，同樣適用于常規(guī)厚度和大小的其他非收縮性組織的染色。

28、(5)本發(fā)明可保障心臟切片的完美呈現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，這將大大提高實(shí)驗(yàn)效率，減少基礎(chǔ)研究中大量的重復(fù)性操作，節(jié)約組織樣本并減少資金投入，有力地保障相關(guān)研究的推進(jìn)。

技術(shù)特征：

1.一種心臟切片染色裝置，其特征在于：包括染色上盤和染色下盤，染色上盤置于染色下盤中，且染色上盤底部底側(cè)面與染色下盤底部頂側(cè)面密封貼合；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟切片染色裝置，其特征在于：每個液路均對應(yīng)與多個切片孵育室相連通。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟切片染色裝置，其特征在于：所述液路共設(shè)置兩個，分別為第一液路和第二液路，第一液路和第二液路呈垂直交叉布置，分隔出四個樣本區(qū)，第一液路和第二液路在對應(yīng)每個樣本區(qū)均分別與3個切片孵育室連通，所有切片孵育室沿第一液路或第二液路的長度方向排布。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種心臟切片染色裝置，其特征在于：在每個樣本區(qū)均設(shè)置有一個記錄區(qū)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟切片染色裝置，其特征在于：所述試劑孔設(shè)置在染色上盤的側(cè)面。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟切片染色裝置，其特征在于：所述切片孵育室的橫向截面呈圓弧狀，在圓弧狀的缺口處切片孵育室與液路連通。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟切片染色裝置，其特征在于：所述染色上盤和染色下盤均呈圓盤狀，染色下盤的頂端敞口，內(nèi)部中空；染色下盤的內(nèi)徑為染色上盤外徑的1.2-1.5倍，且染色上盤的高度高于染色下盤。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟切片染色裝置，其特征在于：所述染色上盤是采用透明材料加工制成的。

9.一種心臟切片染色方法，采用如權(quán)利要求1-8任一所述的裝置，其特征在于包括以下步驟：

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述一種心臟切片染色方法，其特征在于，步驟(5)中：在染色期間每隔10分鐘，從試劑孔吸除舊的ttc染液，并補(bǔ)給新鮮ttc染液，以保障切片處于良好的染色環(huán)境下。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種心臟切片染色裝置和染色方法，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。該染色裝置包括染色上盤和染色下盤，染色上盤置于染色下盤中，且染色上盤底部底側(cè)面與染色下盤底部頂側(cè)面密封貼合；在染色上盤底部設(shè)置有切片孵育室和液路，切片孵育室和液路相連通，在液路的端部設(shè)置有試劑孔；所述切片孵育室和液路均是由染色上盤底部底側(cè)面向上凸起形成，縱向截面呈凹槽狀，在染色上盤底部底側(cè)面處敞口；當(dāng)染色上盤置于染色下盤中時，切片孵育室和液路的敞口由染色下盤底部頂側(cè)面封堵。本發(fā)明可降低心臟切片的操作難度，保障切片的原始面貌，改善切片的呈現(xiàn)度，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度。

技術(shù)研發(fā)人員：苗爍,王建勛,張慶松,毛昕,陳濤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：青島大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10