本發(fā)明屬于獸藥殘留的檢測領(lǐng)域，尤其涉及一種quechers結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中16種獸藥殘留量的方法。

背景技術(shù)：

1、作為世界上主要的豬肉生產(chǎn)和消費(fèi)國，獸藥在畜牧業(yè)中扮演著至關(guān)重要的角色，在預(yù)防動(dòng)物疫病，確保食品產(chǎn)量方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。然而，部分養(yǎng)殖戶為了經(jīng)濟(jì)利益，可能會(huì)濫用獸藥或不遵守用藥規(guī)范，造成豬肉中獸藥殘留超過規(guī)定限度，進(jìn)而引起食品安全的問題。如果人們長期攝入這些獸殘超標(biāo)的動(dòng)物源性食品，體內(nèi)藥物的累積可能會(huì)誘發(fā)毒性反應(yīng)，危害健康。因此，確保市售豬肉符合質(zhì)量和安全標(biāo)準(zhǔn)，加強(qiáng)對(duì)豬肉中獸藥殘留的檢測和研究顯得尤為關(guān)鍵。現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)gb?31650-2019《食品中獸藥最大殘留限量》和gb?31650.1-2022《食品中41種獸藥最大殘留限量》等標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)已經(jīng)為肉類、蛋類、乳制品等動(dòng)物源食品的獸藥殘留量設(shè)定了明確的限制標(biāo)準(zhǔn)。為了保護(hù)消費(fèi)者的健康和確保動(dòng)物源食品的質(zhì)量安全，開發(fā)出快捷、高效且能同時(shí)準(zhǔn)確檢測多種獸藥殘留的分析方法具有重要意義。

2、動(dòng)物源食品由于其基質(zhì)的復(fù)雜性，潛在干擾物多，這給獸藥殘留的檢測帶來了挑戰(zhàn)。由于獸藥殘留在樣品中含量很低，儀器的高選擇性和高靈敏度成為了推動(dòng)獸藥殘留檢測技術(shù)發(fā)展的關(guān)鍵因素。高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（hplc-ms/ms）結(jié)合了液相色譜的高效分離能力和質(zhì)譜檢測器的高靈敏度與選擇性的優(yōu)點(diǎn)，使其成為獸藥殘留檢測的首選方法?，F(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)gb?31658.17-2021《動(dòng)物性食品中四環(huán)素類,磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定?液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》已提供一種用于檢測豬肉中36種獸藥殘留的檢測分析方法。然而，該標(biāo)準(zhǔn)中的樣品前處理過程較為繁瑣，處理效率不高，溶劑使用量大，成本也相對(duì)較高，無法很好地滿足獸藥殘留快速檢測的需求。因此，開發(fā)更為高效的樣品前處理方法成為了當(dāng)前獸藥殘留分析領(lǐng)域的重點(diǎn)。

3、quechers技術(shù)是通過提取劑、吸水劑和凈化劑對(duì)樣品進(jìn)行前處理。往試樣的提取液中直接添加十八烷基硅烷鍵合硅膠（c18）、n-丙基乙二胺（psa）、石墨化炭黑（gcb）等凈化劑，能夠有效吸附并去除大部分雜質(zhì)，達(dá)到凈化樣品的目的。quechers技術(shù)因其高效省時(shí)、操作便捷、成本低、穩(wěn)定性強(qiáng)和安全性佳等優(yōu)勢，在獸藥殘留分析領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。因此，本研究基于quechers的前處理方法與lc-ms/ms技術(shù)相結(jié)合，對(duì)前處理?xiàng)l件、色譜、質(zhì)譜條件等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，建立了一種針對(duì)豬肉中常見的幾類獸藥殘留包括磺胺類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類等16種獸藥殘留進(jìn)行同時(shí)檢測的簡單高效且具有高靈敏度的檢測方法，以期為今后獸藥殘留檢測提供借鑒。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種quechers結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中16種獸藥殘留量的方法。

2、本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

3、一種quechers結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中16種獸藥殘留量的方法，包括以下步驟：

4、s1：動(dòng)物源性食品樣品分散于水中，經(jīng)甲酸乙腈溶液提取和萃取鹽包萃取，萃取鹽包為質(zhì)量比為無水硫酸鈉和氯化鈉，得到提取液；

5、s2：采用quechers凈化劑凈化提取液，quechers凈化劑為psa、c18和無水硫酸鎂，離心后取上清液；上清液依次經(jīng)濃縮、復(fù)溶、乙腈飽和正己烷凈化和過濾處理，得到待測液；

6、s3：利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜方法檢測待測液中的16種獸藥殘留量。

7、進(jìn)一步的，上述動(dòng)物源性食品包括禽畜肉和內(nèi)臟。

8、進(jìn)一步的，上述步驟s1具體為：將動(dòng)物源性食品樣品絞碎后取5g放入離心管內(nèi)，加入3ml超純水和適量陶瓷均質(zhì)子，漩渦混合1min，再加入20ml?0.1%甲酸乙腈溶液，充分振搖1min，再渦旋振蕩提取5min，然后加入4g無水硫酸鈉和1g氯化鈉，渦旋5min后，4℃、5500rpm離心10min，所得上清液即為提取液。

9、進(jìn)一步的，上述步驟s2具體為：將提取液轉(zhuǎn)移到裝有50mg?psa粉末、200mg?c18粉末和1g無水硫酸鈉的離心管中，渦旋振蕩2min，再6000rpm離心10min，收集上清液；移取5ml上清液于40℃下氮吹至干，加入1ml?25％乙腈水溶液溶解殘?jiān)偌尤?ml乙腈飽和正己烷，渦旋混勻，5000rpm離心5min，分成兩層，將下層溶液通過0.22μm孔徑的微孔濾膜進(jìn)行過濾，得到待測液。

10、進(jìn)一步的，上述步驟s3中的色譜條件為：色譜柱：agilent?eclipse?plus?c18色譜柱，2.1mm×50mm×1.8μm；柱溫：40℃；流動(dòng)相a：0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相b：乙腈；流速：0.4ml/min；進(jìn)樣量：2μl；梯度洗脫程序：0~3.60min，5％?b；3.60~3.80min，5%~12%b；3.80~7.00min，12％?b；7.00~7.10min，12%~26%?b；7.10~9.00min，26%~55%?b；9.00~9.10min，55%~100%?b；9.10~11.50min，100%?b；11.50~11.60min，100%~5%?b；11.60~14.00min，5%?b。

11、進(jìn)一步的，上述步驟s3中的質(zhì)譜條件為：電噴霧離子源正離子模式，多反應(yīng)離子監(jiān)測模式檢測；鞘氣溫度250℃，流速11.0l/min；霧化氣壓力45psi；毛細(xì)管電壓3.5kv；干燥氣溫度300℃，流速8.0l/min。

12、進(jìn)一步的，上述16種獸藥為磺胺甲惡唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹惡啉、磺胺嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、林可霉素、羅紅霉素、替米考星、鹽酸金剛乙胺、左旋咪唑、甲氧氯普胺、洛美沙星、氧氟沙星和沙拉沙星。

13、進(jìn)一步的，上述16種獸藥的質(zhì)譜檢測參數(shù)為：

14、

15、*為定量離子。

16、本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)在于：

17、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用quechers前處理方式進(jìn)行提取凈化的方法，比國標(biāo)中的方法提高了分析物的回收率和靈敏度；反相色譜柱進(jìn)行分離后采用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)畜禽肉、內(nèi)臟樣品中16種獸藥進(jìn)行同時(shí)檢測。本發(fā)明的檢測方法靈敏準(zhǔn)確快速，可在9min內(nèi)同時(shí)對(duì)16種獸藥進(jìn)行定性和定量分析，檢出限（lod）為0.01μg/kg~0.25μg/kg。本發(fā)明的檢測方法對(duì)其他種獸藥的檢測也具有一定的參考價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種quechers結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中16種獸藥殘留量的方法，其特征在于：包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述動(dòng)物源性食品包括禽畜肉和內(nèi)臟。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟s1具體為：將動(dòng)物源性食品樣品絞碎后取5g放入離心管內(nèi)，加入3ml超純水和適量陶瓷均質(zhì)子，漩渦混合1min，再加入20ml0.1%甲酸乙腈溶液，充分振搖1min，再渦旋振蕩提取5min，然后加入4g無水硫酸鈉和1g氯化鈉，渦旋5min后，4℃、5500rpm離心10min，所得上清液即為提取液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟s2具體為：將提取液轉(zhuǎn)移到裝有50mg?psa粉末、200mg?c18粉末和1g無水硫酸鈉的離心管中，渦旋振蕩2min，再6000rpm離心10min，收集上清液；移取5ml上清液于40℃下氮吹至干，加入1ml?25％乙腈水溶液溶解殘?jiān)?，再加?ml乙腈飽和正己烷，渦旋混勻，5000rpm離心5min，分成兩層，將下層溶液通過0.22μm孔徑的微孔濾膜進(jìn)行過濾，得到待測液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟s3中的色譜條件為：色譜柱：agilent?eclipse?plus?c18色譜柱，2.1mm×50mm×1.8μm；柱溫：40℃；流動(dòng)相a：0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相b：乙腈；流速：0.4ml/min；進(jìn)樣量：2μl；梯度洗脫程序：0~3.60min，5％?b；3.60~3.80min，5%~12%?b；3.80~7.00min，12％?b；7.00~7.10min，12%~26%?b；7.10~9.00min，26%~55%?b；9.00~9.10min，55%~100%?b；9.10~11.50min，100%?b；11.50~11.60min，100%~5%?b；11.60~14.00min，5%?b。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟s3中的質(zhì)譜條件為：電噴霧離子源正離子模式，多反應(yīng)離子監(jiān)測模式檢測；鞘氣溫度250℃，流速11.0l/min；霧化氣壓力45psi；毛細(xì)管電壓3.5kv；干燥氣溫度300℃，流速8.0l/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述16種獸藥為磺胺甲惡唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹惡啉、磺胺嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、林可霉素、羅紅霉素、替米考星、鹽酸金剛乙胺、左旋咪唑、甲氧氯普胺、洛美沙星、氧氟沙星和沙拉沙星。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述16種獸藥的質(zhì)譜檢測參數(shù)為：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種QuEChERS結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物源性食品中16種獸藥殘留量的方法，包括以下步驟：動(dòng)物源性食品樣品分散于水中，經(jīng)甲酸乙腈溶液提取和萃取鹽包萃取，萃取鹽包為無水硫酸鈉和氯化鈉，得到提取液；采用QuEChERS凈化劑凈化提取液，QuEChERS凈化劑為PSA、C18和無水硫酸鎂，離心后取上清液；上清液依次經(jīng)濃縮、復(fù)溶、乙腈飽和正己烷凈化和過濾處理，得到待測液；利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜方法檢測待測液中的16種獸藥殘留量。該方法采用QuEChERS結(jié)合高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)常見的磺胺類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類等16種獸藥殘留量進(jìn)行測定，經(jīng)方法學(xué)考察試驗(yàn)，確認(rèn)本方法檢測速度快、靈敏度高、重現(xiàn)性好，是同時(shí)測定多種獸藥殘留量的快速有效手段。

技術(shù)研發(fā)人員：陳楠楠,陳秀明,方東升,詹清,鄭孝賢,揭曉玲,周阿容,王海龍,林夢(mèng)丹
受保護(hù)的技術(shù)使用者：福建省微生物研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10