本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法。

背景技術(shù)：

1、麻痹性貝類毒素（psp）是一類由特定貝類產(chǎn)生的劇毒化合物，其檢測對于確保食品安全至關(guān)重要。在開發(fā)針對麻痹性貝類毒素的免疫檢測試劑盒過程中，一個關(guān)鍵的技術(shù)挑戰(zhàn)在于毒素的提取過程。由于麻痹性貝類毒素通常需要酸性條件進行提取，提取液中的酸性成分往往會對后續(xù)檢測中使用的單克隆抗體造成不利影響。具體來說，麻痹性貝類毒素單克隆抗體在低ph值（即過酸環(huán)境）下，其結(jié)構(gòu)中的天門冬氨酸和谷氨酸羧基會發(fā)生質(zhì)子化，導(dǎo)致蛋白質(zhì)攜帶大量正電荷。這種電荷狀態(tài)會引發(fā)靜電排斥作用，進而降低蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，使其更容易發(fā)生變性，最終影響抗體與抗原的結(jié)合能力，甚至導(dǎo)致抗體完全失活。

2、傳統(tǒng)上，為了克服這一問題，研究人員嘗試了多種方法，但往往效果有限，無法滿足實際應(yīng)用中對抗體穩(wěn)定性和活性的高要求。因此，尋找一種能夠有效提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的方法，成為提升免疫檢測試劑盒性能和可靠性的關(guān)鍵。

3、近年來，抗體修飾技術(shù)取得了顯著進展，為改善抗體的理化性質(zhì)和生物活性提供了新的途徑。其中，通過特定的化學(xué)修飾手段改變抗體表面的電荷狀態(tài)，進而提高其在不同環(huán)境條件下的穩(wěn)定性，已成為研究熱點。而現(xiàn)有技術(shù)中并無采用抗體修飾技術(shù)提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的相關(guān)記載。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法，其有效提高了麻痹性貝類毒素單克隆抗體在低ph環(huán)境下的穩(wěn)定性。

2、本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

3、本發(fā)明提供了一種提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法，包括以下步驟：

4、（1）將麻痹性貝類毒素單克隆抗體加入含有1-羥基苯并三唑的dmf溶液中；

5、（2）加入偶聯(lián)試劑及β-氨基乙磺酸水溶液，攪拌反應(yīng)；

6、（3）再加入偶聯(lián)試劑，繼續(xù)反應(yīng)；

7、（4）反應(yīng)完成后，在磷酸鹽緩沖溶液中離心透析，即得陰離子化的麻痹性貝類毒素抗體。

8、進一步的，在步驟（1）中，所述1-羥基苯并三唑的濃度為50-500?mmol。

9、進一步的，在步驟（2）中，所述偶聯(lián)試劑為10-30mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，所述β-氨基乙磺酸水溶液的濃度為10-30mmol，ph值為4-7。

10、進一步的，在步驟（3）中，所述偶聯(lián)試劑為28mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。

11、進一步的，在步驟（4）中，所述磷酸鹽緩沖溶液的ph為7.0。

12、本發(fā)明還提供了一種利用所述的修飾方法所制得的陰離子化的麻痹性貝類毒素抗體。

13、本發(fā)明還提供了一種所述的陰離子化的麻痹性貝類毒素抗體在制備免疫檢測試劑盒中的應(yīng)用，所述陰離子化的麻痹性貝類毒素抗體能夠提高所述免疫檢測試劑盒的穩(wěn)定性。

14、有益效果

15、本發(fā)明通過磺酸基修飾羧基的方法，有效提高了麻痹性貝類毒素單克隆抗體在低ph環(huán)境下的穩(wěn)定性。這解決了在酸提取麻痹性貝類毒素過程中，酸對抗體穩(wěn)定性造成的不良影響。修飾后的抗體在ph6-7的范圍內(nèi)保持了良好的活性，盡管在ph5以下抗體的活性有所損失，但在整個實驗ph范圍內(nèi)，修飾后的抗體活力保持均優(yōu)于未修飾的抗體。特別是在ph6.0時，修飾后的抗體活力較ph7.0時下降較少，顯示出較強的耐酸性。由于麻痹性貝類毒素需要酸提取，而修飾后的抗體具有更好的耐酸性，因此可以應(yīng)用于開發(fā)更穩(wěn)定、更可靠的免疫檢測試劑盒，提高檢測結(jié)果的準確性和可靠性。該修飾方法不僅適用于麻痹性貝類毒素單克隆抗體，還可以為其他需要在酸性環(huán)境下使用的抗體提供有益的參考和借鑒，從而拓寬抗體的應(yīng)用范圍。

技術(shù)特征：

1.一種提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.如權(quán)利要求1所述的提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法，其特征在于，在步驟（1）中，所述1-羥基苯并三唑的濃度為50-500?mmol。

3.如權(quán)利要求1所述的提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法，其特征在于，在步驟（2）中，所述偶聯(lián)試劑為10-30mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，所述β-氨基乙磺酸水溶液的濃度為10-30mmol，ph值為4-7。

4.如權(quán)利要求1所述的提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法，其特征在于，在步驟（3）中，所述偶聯(lián)試劑為28mmol的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。

5.如權(quán)利要求1所述的提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法，其特征在于，在步驟（4）中，所述磷酸鹽緩沖溶液的ph為7.0。

6.一種利用權(quán)利要求1-5任一項所述的修飾方法所制得的陰離子化的麻痹性貝類毒素抗體。

7.如權(quán)利要求6所述的陰離子化的麻痹性貝類毒素抗體在制備免疫檢測試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述陰離子化的麻痹性貝類毒素抗體能夠提高所述免疫檢測試劑盒的穩(wěn)定性。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高麻痹性貝類毒素單克隆抗體耐酸性的修飾方法，包括以下步驟：將麻痹性貝類毒素單克隆抗體加入含有1?羥基苯并三唑的DMF溶液中；加入偶聯(lián)試劑及β?氨基乙磺酸水溶液，攪拌反應(yīng)；再加入偶聯(lián)試劑，繼續(xù)反應(yīng)；反應(yīng)完成后，在磷酸鹽緩沖溶液中離心透析，即得陰離子化的麻痹性貝類毒素抗體。本發(fā)明通過磺酸基修飾羧基的方法，有效提高了麻痹性貝類毒素單克隆抗體在低pH環(huán)境下的穩(wěn)定性。這解決了在酸提取麻痹性貝類毒素過程中，酸對抗體穩(wěn)定性造成的不良影響。

技術(shù)研發(fā)人員：蘇捷,李聰,黃奕雯,陳火榮,朱志煌,張涵
受保護的技術(shù)使用者：福建省水產(chǎn)研究所（福建水產(chǎn)病害防治中心）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19