本發(fā)明屬于化學(xué)分析，具體涉及一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。

背景技術(shù)：

1、在多肽合成過程中會產(chǎn)生一些與目標(biāo)肽鏈結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì)，如缺失肽、插入肽、錯結(jié)肽和差向肽等，肽相關(guān)雜質(zhì)可由起始物料引入、生產(chǎn)工藝副反應(yīng)或長期放置過程中降解產(chǎn)生。由于部分肽相關(guān)雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與主成分較為相似，采用單一原理的分析方法可能無法完全分離，通常采用多種不同原理的檢測方法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查。有關(guān)物質(zhì)檢查方法除常見的高效液相色譜外，還可考慮使用離子交換色譜、毛細(xì)管電泳法等。聚合物檢查可采用分子排阻色譜、聚丙烯酰胺凝膠電泳法等。

2、醋酸阿托西班是由9個(gè)氨基酸組成的二硫鍵型的環(huán)狀多肽，在藥品中以醋酸鹽的形式存在，通用名為醋酸阿托西班。醋酸阿托西班是一種合成多肽，由于合成過程中反應(yīng)步驟、投料數(shù)量等較多，造成合成雜質(zhì)種類比較多，此外，生產(chǎn)和運(yùn)輸過程中產(chǎn)生的降解雜質(zhì)也很多，部分雜質(zhì)因?yàn)榕c主成分阿托西班結(jié)構(gòu)極為相似，這些雜質(zhì)在生產(chǎn)及儲存運(yùn)輸期間都較容易產(chǎn)生且難分離，嚴(yán)重影響藥品的安全性及有效性，如果控制不好，有可能產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用。專利文獻(xiàn)cn101696959a公開了一種醋酸阿托西班及其制劑的含量測定和有關(guān)物質(zhì)測定的方法，然而該法中雜質(zhì)b與主峰的分離效果差；專利文獻(xiàn)cn105949283a公開了醋酸阿托西班雜質(zhì)、制備及檢測方法，但其無法分離與主成分極性相近的雜質(zhì)。專利文獻(xiàn)cn117907506a公開了一種醋酸阿托西班雜質(zhì)的超高效液相色譜檢測方法，然而其對儀器設(shè)備的要求高，洗脫體系復(fù)雜，且雜質(zhì)之間分離效果差。此外，利用進(jìn)口藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)檢測方法進(jìn)行檢測，由于色譜柱溫高，體系穩(wěn)定性較差，導(dǎo)致峰形拖尾，雜質(zhì)b與主峰分離度較差。

3、因此，開發(fā)一種安全、可靠、且能同時(shí)有效檢測和分離醋酸阿托西班原料及制劑雜質(zhì)的分析方法，不僅能保障產(chǎn)品質(zhì)量，還具有重大臨床價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，以解決醋酸阿托西班在合成過程中產(chǎn)生的工藝雜質(zhì)及其制劑在存儲過程中產(chǎn)生的降解雜質(zhì)難以測定和控制的問題。

2、本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

3、一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，采用高效液相法，以c18色譜柱為固定相、以紫外檢測器為檢測器、以緩沖鹽溶液-有機(jī)相為流動相，采用梯度洗脫程序，對醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的含量進(jìn)行檢測；

4、所述有關(guān)物質(zhì)包括：di-gly9-阿托西班、δ-ava7-阿托西班、des-gly9-阿托西班、gly9-ol-阿托西班、asp5-阿托西班、gly9-oh-阿托西班、二聚體(gly-orn)、des-gly-aminopiperidone8-阿托西班。

5、進(jìn)一步的，所述流動相為六氟磷酸鹽溶液-乙腈。

6、進(jìn)一步，所述檢測方法，包括以下步驟：

7、1)設(shè)置色譜條件；

8、2)稀釋液配制系統(tǒng)適應(yīng)性溶液進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證；再取醋酸阿托西班原料或制劑樣品適量，用稀釋液溶解，得到供試品溶液；取供試品溶液，用稀釋液稀釋100倍，得到對照溶液；

9、3)將供試品溶液和對照溶液分別注入液相色譜儀進(jìn)行檢測，記錄色譜圖，按照自身對照法計(jì)算供試品溶液色譜圖中有關(guān)物質(zhì)峰面積相對于對照溶液主峰面積的百分比。

10、進(jìn)一步的，所述稀釋液為ph＝3-3.5的三氟乙酸水溶液，所述三氟乙酸水溶液，通過如下步驟制備：向2000ml去離子水中用10％的三氟乙酸調(diào)ph至3-3.5。

11、優(yōu)選的，所述稀釋液為ph＝3.2的三氟乙酸水溶液。

12、進(jìn)一步的，所述高效液相法的色譜條件為：

13、色譜柱：c18色譜柱；

14、流速：0.8-1.2ml/min；

15、進(jìn)樣量：10-50μl；

16、柱溫：30-50℃；

17、檢測波長：200-240nm；

18、流動相a：0.01-0.5mol/l六氟磷酸鹽溶液，1％磷酸或0.1mol/l磷酸氫二鉀調(diào)ph至2.0-6.0；

19、流動相b：乙腈；

20、以流動相的總體積為100％計(jì)，所述梯度洗脫程序：

21、

22、優(yōu)選的，所述高效液相法的色譜條件為：

23、色譜柱：hiq?sil?c18hs?4.6mm×250mm?5μm色譜柱；

24、流速：1.0ml/min；

25、進(jìn)樣量：25μl；

26、柱溫：37℃；

27、檢測波長：220nm；

28、流動相a：0.05mol/l六氟磷酸鹽溶液，根據(jù)六氟磷酸鹽溶液的酸堿性，選擇1％磷酸或0.1mol/l磷酸氫二鉀調(diào)節(jié)ph至4.5；

29、流動相b：乙腈；

30、以流動相的總體積為100％計(jì)，所述梯度洗脫程序如下：

31、

32、進(jìn)一步的，所述六氟磷酸鹽溶液包括六氟磷酸鉀溶液、六氟磷酸鈉溶液、六氟磷酸銨溶液。

33、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

34、1.本發(fā)明提供了一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，可以有效地檢測出醋酸阿托西班在合成過程中以及在存儲期間產(chǎn)生的降解雜質(zhì)：di-gly9-阿托西班、δ-ava7-阿托西班、des-gly9-阿托西班、gly9-ol-阿托西班、asp5-阿托西班、gly9-oh-阿托西班、二聚體(gly-orn)、des-gly-aminopiperidone8-阿托西班，本方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，可以有效控制醋酸阿托西班及其制劑產(chǎn)品質(zhì)量。

35、2.本發(fā)明針對醋酸阿托西班雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征，采用特殊的雜質(zhì)分離方法，通過自身對照，有效地檢測與主成分極性相近的雜質(zhì)，該方法體系配制簡單方便、尤其對于雜質(zhì)b(δ-ava7-阿托西班)的分離，分離度達(dá)到1.5以上。

技術(shù)特征：

1.一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，采用高效液相色譜法，以緩沖鹽溶液-有機(jī)相為流動相，采用梯度洗脫程序，對醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的含量進(jìn)行檢測；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法，包括以下步驟：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述色譜條件為：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述色譜柱為hiq?silc18hs?4.6mm×250mm?5μm色譜柱。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述流動相a為0.05mol/l六氟磷酸鹽溶液，1％磷酸或0.1mol/l磷酸氫二鉀調(diào)節(jié)ph至4.5；

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述柱溫為37℃。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，以流動相的總體積為100％計(jì)，所述梯度洗脫程序：

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述稀釋液為ph＝3-3.5的三氟乙酸水溶液。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，屬于化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域。所述方法采用高效液相色譜法，以C18色譜柱為固定相、以紫外檢測器為檢測器、以緩沖鹽溶液?有機(jī)相為流動相，采用梯度洗脫程序，對醋酸阿托西班及其制劑中有關(guān)物質(zhì)的含量進(jìn)行檢測；所述有關(guān)物質(zhì)包括：Di?Gly<supgt;9</supgt;?阿托西班、δ?Ava<supgt;7</supgt;?阿托西班、Des?Gly<supgt;9</supgt;?阿托西班、Gly<supgt;9</supgt;?ol?阿托西班、Asp<supgt;5</supgt;?阿托西班、Gly<supgt;9</supgt;?OH?阿托西班、二聚體(Gly?Orn)、Des?Gly?Aminopiperidone<supgt;8</supgt;?阿托西班。本方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，可以有效控制醋酸阿托西班及其制劑產(chǎn)品質(zhì)量。

技術(shù)研發(fā)人員：宋禮華,李增禮,卞從明,劉虎,王政,李靜,范子健
受保護(hù)的技術(shù)使用者：安徽安科生物工程（集團(tuán)）股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19