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      一種代謝標志物組合及其檢測試劑盒、檢測方法和女性糖尿病前期的輔助診斷方法

      文檔序號:40374311發(fā)布日期:2024-12-20 11:56閱讀:10來源:國知局
      一種代謝標志物組合及其檢測試劑盒、檢測方法和女性糖尿病前期的輔助診斷方法

      本發(fā)明涉及臨床醫(yī)學,具體涉及一種代謝標志物組合及其檢測試劑盒、檢測方法和女性糖尿病前期的輔助診斷方法。


      背景技術(shù):

      1、根據(jù)世界衛(wèi)生組織(who?1999)診斷標準,糖尿病前期(pre-diabetic?mellitus,predm)是指血糖水平介于正常和糖尿病之間的一個狀態(tài),包括空腹血糖受損、糖耐量受損以及空腹血糖受損合并糖耐量受損三種狀態(tài)。糖尿病前期可以被認為是一種標志或分水嶺,如出現(xiàn)則標志著將來發(fā)生糖尿病、心腦血管疾病、微血管病變、腫瘤、癡呆等疾病的風險增高。糖尿病前期在診斷為2型糖尿?。╰2dm)的個體中可發(fā)展數(shù)年,早期診斷和治療可有效預防糖尿病的發(fā)生發(fā)展。許多研究表明,t2dm可以通過高危人群的強化行為生活方式和藥物干預來預防或延緩,特別是在患有predm的受試者中。

      2、圍絕經(jīng)期婦女血壓、低密度脂蛋白膽固醇和hba1c的增加與身體脂肪分布不利變化通常并行發(fā)生,特別是患有多囊癥、睪丸激素水平較高的女性患t2dm的風險更高。然而,現(xiàn)有技術(shù)利用脂質(zhì)聯(lián)合標志物對predm進行診斷時沒有考慮到上述因素對糖尿病前期的影響。

      3、基于此,有必要為女性的糖尿病前期診斷提供一種更為可靠的方式,從而更好地幫助和指導患者進行早期治療。


      技術(shù)實現(xiàn)思路

      1、為解決目前缺少針對女性糖尿病前期的診斷方法的技術(shù)問題,本發(fā)明提供一種代謝標志物組合及其檢測試劑盒、檢測方法和女性糖尿病前期的輔助診斷方法。

      2、第一方面,本發(fā)明提供一種用于輔助診斷女性糖尿病前期的代謝標志物組合,由cer、cer?d18:0/16:0、cer?d18:1/18:0、cer?d18:1/20:0、cer?d18:0/22:0、cer?d18:1/24:0和cer?d18:0/24:0組成。

      3、第二方面,本發(fā)明提供一種上述代謝標志物組合的檢測試劑盒,包括:

      4、標準品:cer?d18:1/17:0,用于血清樣本中cer、cer?d18:0/16:0、cer?d18:1/18:0、cer?d18:1/20:0、cer?d18:0/22:0、cer?d18:1/24:0、cer?d18:0/24:0的定性、定量檢測;

      5、提取劑:含內(nèi)標cer?d18:1/17:0的甲醇溶液,甲基叔丁基醚以及超純水。

      6、進一步的,提取劑的內(nèi)標濃度為0.2~0.5?μg/ml。

      7、第三方面,本發(fā)明提供一種上述代謝標志物組合的檢測方法,至少包括如下步驟:

      8、s1:采用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分離檢測預處理后的血清樣本,預處理后的血清樣本中含有內(nèi)標cer?d18:1/17:0;

      9、s2:根據(jù)cer?d18:1/17:0標準品的保留時間以及二級碎片信息定性出血清樣本中cer、cer?d18:0/16:0、cer?d18:1/18:0、cer?d18:1/20:0、cer?d18:0/22:0、cer?d18:1/24:0、cer?d18:0/24:0,并提取色譜峰強度;

      10、s3:比較血清樣本中cer、cer?d18:0/16:0、cer?d18:1/18:0、cer?d18:1/20:0、cerd18:0/22:0、cer?d18:1/24:0、cer?d18:0/24:0與血清樣本中內(nèi)標cer?d18:1/17:0的色譜峰強度,獲得各神經(jīng)酰胺的相對濃度。

      11、進一步的,血清樣本的預處理方法為:

      12、(1)將血清樣本用含有內(nèi)標的提取劑進行提取,提取劑為含內(nèi)標cer?d18:1/17:0的甲醇、甲基叔丁基醚和超純水的混合體系,其中甲醇、甲基叔丁基醚和超純水的體積比為1:2~4:1的,內(nèi)標濃度為0.2~0.5?μg/ml;

      13、(2)對提取產(chǎn)物進行離心,取上層溶液凍干后待用,檢測前復溶。

      14、進一步的,步驟(2)復溶使用內(nèi)含乙酸銨的乙腈/異丙醇/水體系,乙腈/異丙醇/水的體積比為65:30:5,乙酸銨濃度為10?mm。

      15、進一步的,超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分離檢測中液相色譜使用的洗脫溶劑包括流動相a和流動相b,流動相a為內(nèi)含乙酸銨的乙腈/水體系,乙腈/水的體積比為6:4,流動相b為內(nèi)含乙酸銨的異丙醇/水體系,異丙醇/水的體積比為9:1,流動相a和流動相b中乙酸銨濃度均為10?mm。

      16、進一步的,超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分離檢測中液相色譜采用反向色譜c8柱(2.1×100?mm,1.7?μm),柱溫為55℃,柱流速為0.26?ml/min;

      17、超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分離檢測中質(zhì)譜采用電噴霧離子正離子模式(esi+)下檢測。

      18、第四方面,本發(fā)明提供一種女性糖尿病前期的輔助診斷方法,包括如下步驟:

      19、采用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分離檢測用于診斷模型構(gòu)建的訓練集受試者的血清樣本,獲得代謝標志物組合中各神經(jīng)酰胺的濃度水平,代謝標志物組合由cer、cerd18:0/16:0、cer?d18:1/18:0、cer?d18:1/20:0、cer?d18:0/22:0、cer?d18:1/24:0和cerd18:0/24:0組成;

      20、采用spss軟件對訓練集受試者的代謝標志物組合中各神經(jīng)酰胺的濃度水平、臨床危險指標和臨床保護因素進行二元邏輯回歸分析,獲取roc曲線,計算得到曲線上敏感度與特異性之和最大的點,該點對應的prob值為roc曲線的最佳截斷值;

      21、采用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分離檢測待檢受試者的血清樣本,將待檢受試者代謝標志物組合中各神經(jīng)酰胺的濃度水平、臨床危險指標和臨床保護因素代入上步分析得到的二元邏輯回歸方程中計算y值,根據(jù)公式prob=1/(1+e^(-y))確定待檢受試者患有糖尿病前期的概率,當待檢受試者患有糖尿病前期的概率≥roc曲線的最佳截斷值時,提示待檢受試者存在糖尿病前期風險;

      22、該輔助診斷方法的全部步驟由計算機等裝置實施。

      23、進一步的,臨床危險指標包括年齡(age)、身體質(zhì)量指數(shù)(bmi)、腰臀比(whr)、甘油三酯(tg);

      24、臨床保護因素為高密度脂蛋白(hdl)。

      25、本發(fā)明的有益效果在于:

      26、本發(fā)明利用超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜檢測血清代謝、脂質(zhì)譜,優(yōu)選出了一組小分子代謝物(cer、cer?d18:0/16:0、cer?d18:1/18:0、cer?d18:1/20:0、cer?d18:0/22:0、cer?d18:1/24:0和cer?d18:0/24:0)。這組小分子代謝物是與胰島素抵抗、葡萄糖耐量受損和慢性炎癥密切相關(guān)的生物活性代謝物,與糖尿病前期的發(fā)病機制有關(guān)。目前尚無將此組代謝物用于輔助診斷糖尿病前期的報道。本發(fā)明的代謝標志物組合與總臨床指標綜合用于輔助診斷糖尿病前期發(fā)生風險的效果良好,大大提高了女性人群糖尿病前期的診斷性能。



      技術(shù)特征:

      1.?一種用于輔助診斷女性糖尿病前期的代謝標志物組合,其特征在于,由cer、cerd18:0/16:0、cer?d18:1/18:0、cer?d18:1/20:0、cer?d18:0/22:0、cer?d18:1/24:0和cerd18:0/24:0組成。

      2.一種如權(quán)利要求1所述的代謝標志物組合的檢測試劑盒,其特征在于,包括:

      3.?如權(quán)利要求2所述的檢測試劑盒,其特征在于,提取劑的內(nèi)標濃度為0.2~0.5?μg/ml。

      4.一種如權(quán)利要求1所述的代謝標志物組合的檢測方法,其特征在于,至少包括如下步驟:

      5.如權(quán)利要求4所述的檢測方法,其特征在于,血清樣本的預處理方法為:

      6.?如權(quán)利要求5所述的檢測方法,其特征在于,步驟(2)復溶使用內(nèi)含乙酸銨的乙腈/異丙醇/水體系,乙腈/異丙醇/水的體積比為65:30:5,乙酸銨濃度為10?mm。

      7.?如權(quán)利要求4所述的檢測方法,其特征在于,超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分離檢測中液相色譜使用的洗脫溶劑包括流動相a和流動相b,流動相a為內(nèi)含乙酸銨的乙腈/水體系,乙腈/水的體積比為6:4,流動相b為內(nèi)含乙酸銨的異丙醇/水體系,異丙醇/水的體積比為9:1,流動相a和流動相b中乙酸銨濃度均為10?mm。

      8.?如權(quán)利要求4所述的檢測方法,其特征在于,超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜分離檢測中液相色譜采用反向色譜c8柱,柱溫為55℃,柱流速為0.26?ml/min;

      9.一種女性糖尿病前期的輔助診斷方法,其特征在于,包括如下步驟:

      10.如權(quán)利要求9所述的輔助診斷方法,其特征在于,臨床危險指標包括年齡、身體質(zhì)量指數(shù)、腰臀比、甘油三酯;


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明涉及臨床醫(yī)學技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種代謝標志物組合及其檢測試劑盒、檢測方法和女性糖尿病前期的輔助診斷方法。代謝標志物組合由Cer、Cer?d18:0/16:0、Cer?d18:1/18:0、Cer?d18:1/20:0、Cer?d18:0/22:0、Cer?d18:1/24:0和Cer?d18:0/24:0組成。本發(fā)明優(yōu)選出了一組小分子代謝物。這組小分子代謝物是與胰島素抵抗、葡萄糖耐量受損和慢性炎癥密切相關(guān)的生物活性代謝物,與糖尿病前期的發(fā)病機制有關(guān)。本發(fā)明的代謝標志物組合與總臨床指標綜合用于輔助診斷糖尿病前期發(fā)生風險的效果良好,大大提高了女性人群糖尿病前期的診斷性能。

      技術(shù)研發(fā)人員:趙家軍,軒秋慧,杜曉倩,盧軼彤,高聆
      受保護的技術(shù)使用者:山東第一醫(yī)科大學附屬省立醫(yī)院(山東省立醫(yī)院)
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/12/19
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