專利名稱：活性維生素d檢測藥盒的制作方法
技術領域：
活性維生素D檢測藥盒。
本發(fā)明屬生物化學領域。
活性維生素D也稱為1.25－雙羥膽鈣化醇。(1.25－Di－h(huán)ydrOXychOLecaLciferOL.DHec)。是維生素D在體內(nèi)經(jīng)肝臟和腎臟羥化后轉(zhuǎn)變而成的一種高活性形式。在正常情況下，體內(nèi)合成量充足，合成后經(jīng)血液運輸?shù)桨衅鞴伲ㄟ^受體而發(fā)揮作用，所以它是一種新的甾族激素?；钚跃S生素D參與免疫調(diào)節(jié)，促進某些腫瘤細胞(如白血病細胞)的正常分化以及對生長素，泌乳素分泌等都有重要影響，對佝僂病的早期診斷和防治，對老年性骨病和某些內(nèi)分泌疾病的研究有應用價值。同時，血清中活性維生素D含量的檢測對奶牛產(chǎn)奶率，家禽產(chǎn)蛋率，淡水養(yǎng)魚及實驗動物的飼養(yǎng)條件，飼料配方等均有重要的指導意義。
活性維生素D檢測測方法國外已開展，但方法的技術難度較大，需要昂貴的儀器設備，不經(jīng)專門的訓練難以掌握操作技術。受體蛋白制作技術復雜，周期長，不穩(wěn)定，測量血清量大，不易為患者所接受。目前國內(nèi)尚沒有理想的測試手段和方法，更沒有試劑盒的供應和使用。
本發(fā)明的目的是為了在國內(nèi)開展活性維生素D檢測技術，制備國產(chǎn)化試劑盒，使此項超微量檢測技術盡快地為經(jīng)濟建設服務。
本實用新型的結(jié)構(gòu)示意圖由附圖給出。

圖1為盒蓋，圖2為盒底。盒內(nèi)容物裝入盒底(1)中，內(nèi)容物包括受體蛋白(2)，標準品(3)，標記物(4)，磷酸緩沖液(5)，活性炭(6)，各種試劑的制備如下1.1.受體蛋白(2)的制備以正常兔小腸胞漿受體蛋白制備為例。用日本大白兔活體積取小腸環(huán)，灌洗腸腔，縱向剖開，刮下粘膜層，用2倍體積的高滲緩沖液制備勻漿，離心，取上清液超速離心，上清液測蛋白濃度后，分裝，通氮條件下抽干，冷凍于玻璃瓶中。
2.標準品(3)的制備以結(jié)晶維生素D3為原料，采用體外羥化的方法進行孵育，經(jīng)葡聚糖凝膠LH－20柱層析及高壓液相分離，制得1.25－(OH)－D，分裝于玻璃瓶中。
3.標記物(4)的制備活性維生素D的氚標記物采用低溫交換法。以催化劑為鈀，氚離子由氚分子激發(fā)獲得。粗標記樣品經(jīng)真空脫游離氚后，經(jīng)葡聚糖凝膠LH－20柱層析分離，純化，分裝于玻璃瓶中。－20℃水箱保存。比活性87ci／mmOL。
4.磷酸緩沖液(5)的配制用磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉加氮化鈉溶于重蒸水中，溶均即可，分裝于玻璃瓶中。
5.活性炭(6)的制備取活性炭經(jīng)酸，堿及重蒸水清洗后烘烤，分裝瓶中，密封保存。
上述試劑裝入盒底，用泡沫塑料固定，封上蓋即可。
使用時取靜脈血離心，取血清1mL，按側(cè)定程序及計算公式便可可測定血清中活性維生素D含量。本試劑盒測定正常值為20－65pg／mL。
本發(fā)明藥盒使用方法簡便，靈敏，快速，不需要高效液相等昂貴貴的儀器，一般市級醫(yī)院均可開展此項技術。檢測方法穩(wěn)定，精密度及回收率均合格，所用血清樣品量少，容易被患者所接受。
權利要求1.一種由盒底(1)和盒蓋組成的活性維生素D檢測藥盒，其特征在于盒底內(nèi)受體蛋白(2)，標準品(3)，標記物(4)，磷酸緩沖液(5)，活性炭(6)所組成。
專利摘要活性維生素D檢測藥盒。本實用新型屬生物化學領域。該檢測藥盒是由盒底、盒蓋組成的。盒內(nèi)有受體蛋白，標準品，標記物，磷酸緩沖液，活性炭等五種試劑所組成。本檢測藥盒使用方法簡便，靈敏、快速、所用血清樣品少，容易為患者所接受。
文檔編號G01N33/50GK2049359SQ89208520
公開日1989年12月13日 申請日期1989年6月11日 優(yōu)先權日1989年6月11日
發(fā)明者石育原, 張培茵, 李亞娟, 谷秀彬, 于貴, 儀明光 申請人:白求恩醫(yī)科大學