專利名稱：用一種試劑的生物素藥盒及快速測試技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物素快速反應(yīng)藥盒及簡便測試技術(shù)。
生物素藥盒及相應(yīng)的檢測技術(shù)是八十年代問世的一種新的微量敏感，先進的測試技術(shù)，目前國內(nèi)外廠家采用羧基琥珀酰亞胺為活化劑來生產(chǎn)藥盒是通過胺基與羧基的反應(yīng)來進行標(biāo)記，但這種生物素試劑藥盒操作程序復(fù)雜，操作時間長，它分別用四種獨立試劑組成，即(1)生物素標(biāo)記的抗人IgG或SPA，(2)親和素(Avidin)，(3)生物素標(biāo)記的酶(B-RRP)，(4)稀釋劑分次按序使用。其操作程序需要十個步驟4～6小時才能完成，這由于該項技術(shù)反應(yīng)層次多，操作顯得非常煩鎖，使用時也顯得不方便，這樣生產(chǎn)工序多，用量大，成本高，因而不少防治單位都希望盡快地研究簡便快速的生物素藥盒和檢測技術(shù)。
本發(fā)明目的是根據(jù)上述存在的問題和克服上述不足之處，而研制一種新型的溴化琥珀酰亞胺為活化劑，它根據(jù)生物素與親和素反應(yīng)的機制，采用正交優(yōu)選法生產(chǎn)一種用單一試劑的生物素藥盒及簡便、快速測試技術(shù)，它比目前采用的羥基琥珀酰亞胺要活潑，易標(biāo)記，使用范圍廣，具有效強反應(yīng)能力，并具有靈敏度高，速度快、穩(wěn)定性能好特點。
本發(fā)明的生物素測試藥盒，主要由(1)生物素標(biāo)記的金黃色葡萄球菌蛋白A(B～SPA)，(2)親和素(Avidin)，(3)生物素標(biāo)記的辣根過氧化物酶三種組合成一種快速反應(yīng)試劑。它根據(jù)Biotin與Avidin結(jié)合牢固的特點。其親和常數(shù)比抗原抗體復(fù)合物，酶和底物，受體與配體等生物活性物質(zhì)的結(jié)合要小幾個數(shù)量級以及Avidin參予的反應(yīng)有4個活性部位，能同時與B-HRP和SPA-B發(fā)生反應(yīng)，加之形成的復(fù)合物分子量為70000左右，均明顯小于抗原抗體復(fù)合物等生物大分子(＞20萬)的機理，設(shè)計了這種藥盒和一次加入的方法，通過等量混合后室溫15分鐘形成的復(fù)合物，具有較好的參予反應(yīng)的活性，并十分穩(wěn)定，置4℃冰箱內(nèi)放置1年以上仍可使用，室溫(20°～39°)可保存半年以上，這樣就比過去的ABC一類的生物素(藥盒)使用貯藏都方便得多，因為只需要一次加入，用量只有原來的三分之一，減少了包裝，減輕了重量，方便運輸，大大降低成本，在診斷血吸蟲病方面使用這種試劑時不需要用牛血清白蛋白之類的非反應(yīng)系統(tǒng)的蛋白質(zhì)進行保護。
本發(fā)明用一種試劑的生物素藥盒的測試技術(shù)，它簡化了操作程序，由原來10個程序減少為7個程序;縮短了反應(yīng)時間由原需要4～6小時完成，縮短為0.5～1小時內(nèi)完成，其新的溴化琥珀酰亞胺生物素為活化劑新藥盒的操作程序和反應(yīng)方法如下Ag包被(室溫2小時→NS洗滌一次→加待測血清(室溫15分鐘)→NS洗滌三次→加生物素快速反應(yīng)試劑(室溫15分鐘)→NS洗滌三次→加低物顯色共7次完成。其原來的ABC測試技術(shù)程序如下Ag包被過夜→PBS緩沖液洗滌3次→加待測血清(37℃，60分鐘)→洗滌3次→加B-SPA(37℃，60分鐘)→洗滌3次→加ABC(37℃30分鐘)→洗滌3次→加底物顯色共10次完成。
本發(fā)明以溴代琥珀酰亞胺活化劑生產(chǎn)的藥盒及發(fā)明的測試技術(shù)它明顯的簡化了操作程序和縮短了操作時間，基本上不受環(huán)境條件的限制，它不僅用于準(zhǔn)確的診斷還特別適合廣大基層防治單位流行病普查和疫情的監(jiān)測。如沒有電和儀器，通過觀察也可到現(xiàn)場直接測試，用這種試劑和簡便快速的檢測技術(shù)診斷血吸蟲等病取得了滿意診斷效果。并能廣范用于人、畜疾病的診斷調(diào)查和基因探測等生物技術(shù)領(lǐng)域。
權(quán)利要求
1.用一種試劑的生物素藥盒及簡便，快速的測試技術(shù)，廣泛用于人、畜疾病的診斷、調(diào)查和基因探測等生物技術(shù)領(lǐng)域，其特征(1)生物素藥盒用N-溴化琥珀酰亞胺活化生物素來標(biāo)記抗人IgG，SPA，NRP凝集素(2)本發(fā)明的生物素快速反應(yīng)試劑藥盒，由(a)生物素標(biāo)記的金黃色葡萄球菌蛋A(B-SPA)，(b)親和素(Avidin)，(c)生物素標(biāo)記的辣根過氧化物酶，三種配合而成，(3)用生物素快速反應(yīng)試劑藥盒的測試技術(shù)程序于下Ag包被(室溫2小時)→NS洗滌1次→加待測血清(室溫15分鐘)→NS洗滌三次→加生物素快速反應(yīng)試劑(室溫15分鐘)，→NS洗滌三次→加底物顯色，由原來10個程序減少為7個程序，測試時間由原來4～6小時減少為0.5～1小時。
全文摘要
本發(fā)明屬于用一種試劑的生物素藥盒及簡便快速的測試技術(shù)。本發(fā)明采用N-溴化琥珀酰亞胺為活化劑生產(chǎn)的生物素藥盒它具有活潑易標(biāo)記，使用方便，應(yīng)用范圍廣，檢測靈敏度高，速度快，穩(wěn)定性能好。藥盒容易貯存，保管，成本低，效益高，它簡化了操作程序和縮短了操作時間，不受環(huán)境條件限制，特別適應(yīng)廣大基層防治單位的病疫普查和其它生物技術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用。
文檔編號G01N33/52GK1044340SQ9010541
公開日1990年8月1日 申請日期1990年2月22日 優(yōu)先權(quán)日1990年2月22日
發(fā)明者姜光斗, 易詠梅 申請人:姜光斗, 易詠梅