專利名稱：大鼠促黃體生成素和催乳素的四氯二苯脲標(biāo)記法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測(cè)定大白鼠垂體分泌的促黃體生成素(rLH)和催乳素(rPRL)的標(biāo)記方法。
在生殖生理和計(jì)劃生育科研中，經(jīng)常需要測(cè)定大白鼠垂體分泌的促黃體生成素(rLH)和催乳素(rPRL)，放射免疫測(cè)定的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一是標(biāo)記抗原的制備，它要求標(biāo)記物具有高純度、高比活度，并且保持良好的免疫活性和穩(wěn)定性。在國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道rLH和rPRL的標(biāo)記方法，國(guó)外對(duì)人生長(zhǎng)激素等多肽激素的標(biāo)記從60年代開始見諸報(bào)道，但多采用氯胺-T(Chloramine-T)法，這種方法，存在一些缺點(diǎn)，如需要較大劑量的碘化鈉(Na125I)和氯胺T，需要加還原劑，標(biāo)記率較低等。
本發(fā)明的目的是提供一種用碘量小，標(biāo)記率高，不需要加還原劑，可獲得免疫活性高，穩(wěn)定性好的標(biāo)記抗原大白鼠促黃體生成素(rLH)和催乳素(rPRL)的四氯二苯脲(Iodogen)標(biāo)記法。
為此，本發(fā)明rLH和rPRL的Iodogen標(biāo)記法如下所述先將氧化劑四氯二苯脲(Iodogen)溶于二氯甲烷中，濃度為0.4～0.6mg/μl，取其中40～60ml置于具蓋反應(yīng)管中，在15～20℃室溫下干燥使溶劑揮發(fā)干，這樣，可使氧化劑在反應(yīng)管底部形成均勻的薄膜。標(biāo)記用促黃體生成素(rLH)或催乳素(rPRL)10～20μg溶液，8～12μl及0.5M、PH7.2～7.6的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)90～110ml，分別置于上述的具蓋反應(yīng)管中，然后加入0.4～0.6mCi的碘化鈉溶液，連續(xù)攪拌7～10分鐘，此時(shí)即把125碘標(biāo)記到了激素酪氨酸殘基的羥基上。最后加入150～250μl、0.05M、PH7.2～7.6的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)靜置4～6分鐘后上柱。以30×1.0cm葡聚糖G100層析柱分離純化，0.05M、PH7.2～7.6的PBS平衡并洗脫柱子，用自動(dòng)收集器收集洗脫液，流速1ml/2分鐘管，共收集30～40管，然后依次測(cè)定各管的放射性。標(biāo)記產(chǎn)品(125I-rLH或125I-rPRL)為大分子物質(zhì)，通過(guò)凝膠間隙向下速度較快，首先被淋洗下來(lái)，即在第9～11管出現(xiàn)標(biāo)記激素峰，而小分子的無(wú)機(jī)碘在第19～21管出現(xiàn)，即游離峰。標(biāo)記激素(產(chǎn)品)以0.1M、PH7.2～7.6含有0.4～0.6的牛血清白蛋白和0.1～0.3%的迭氮鈉的PBS稀釋一倍，存在2～5℃溫度下存放備用。
經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)，本方法標(biāo)記率達(dá)80%，放射化學(xué)純度在90%以上，最大抗體結(jié)合在80%以上，而非特異性結(jié)合較低，為3%，貯存8周而無(wú)明顯變化，適于放射免疫分析或放射受體測(cè)定。
本發(fā)明采用Iodogen方法標(biāo)記大鼠rLH和rPRL，獲得了純度和比活度均較高的產(chǎn)品，而且激素旦白免疫活性損傷小，較為穩(wěn)定，重復(fù)性好。此外，本方法用碘量小、標(biāo)記率高，不需要加還原劑，就可獲得免疫活性高、穩(wěn)定性好的標(biāo)記抗原。
實(shí)施例將Iodegen溶于二氯甲烷中，濃度為0.5mg/ml，取其中50ml置于3.6×1.2cm的具蓋聚丙管中，在20℃溫度使溶液揮發(fā)干。標(biāo)記用rLH或rPRL15μg溶液10μl及0.5M、PH7.4的PBS100μl，分別置于上述的聚丙烯管中，然后加入0.5mCi的碘化鈉溶液，連續(xù)攪拌8分鐘，最后加入200μl、0.05M、PH7.4的PBS靜置5分鐘后上柱，以30×1.0cm葡聚糖G100層析柱分離，0.05M、PH7，4的PBS平衡，采用BS-100A自動(dòng)收集器收集洗脫液，以1ml/2分鐘/管的流速收集30管，然后依次測(cè)定各管的放射性。
權(quán)利要求
1.一種大鼠促黃體生成素和催乳素的四氯二苯脲標(biāo)記法，其特征在于先將氧化劑四氯二苯脲溶于二氯甲烷中，濃度為0.4～0.6mg/ml，取其中40～60μl置于具蓋反應(yīng)管中，在15～20℃室溫下干燥，標(biāo)記用促黃體生成素或催乳素10～20μg溶液8～12μl及0.5M、PH7.2～7.6的磷酸鹽緩沖溶液90～110μl，分別置于上述的蓋反應(yīng)管中，然后加入0.5～0.6mCi的碘化鈉溶液，連續(xù)攪拌7～10分鐘，最后加入150～250μl、0.05M、7.2～7.6的磷酸鹽緩沖溶液，靜置3～5分鐘后上柱，以30×1.0cm葡聚糖G100層析柱分離，0.05M、PH7.2～7.6磷酸鹽緩沖溶液平衡并洗脫柱子，用自動(dòng)收集器收集洗脫液，流速1ml/2分鐘/管，共收集30～40管，然后依次測(cè)定各管的放射性，標(biāo)記激素以0.1M、PH7.2～7.6含有0.4～0.6%的牛血清白蛋白和0.1～0.3%的迭氮鈉的磷酸鹽緩沖溶液稀釋一倍，在2～5℃溫度下存放。
全文摘要
一種測(cè)定大鼠rLE和rPRL的Iodogen標(biāo)記法。將Iodogen溶于CH
文檔編號(hào)G01N33/534GK1063941SQ9110078
公開日1992年8月26日 申請(qǐng)日期1991年2月9日 優(yōu)先權(quán)日1991年2月9日
發(fā)明者毛培忠, 李愛英, 胡白正, 王燕復(fù) 申請(qǐng)人:天津市計(jì)劃生育研究所