專利名稱：有機膦酸酯酶檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及整體包裝在一個盒子里的由酶底物、緩沖液和終止劑等配套組成的有機膦酸酯酶檢測試劑盒。
人血清有機膦酸酯酶是正常健康成年人血清中存在的一種水解酶。目前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在人發(fā)生肝臟纖維化或肝硬化時血清中有機膦酸酯酶活性升高。利用檢測人血清中有機膦酸酯酶活性有助臨床診斷肝硬化。
現(xiàn)在已報道的血清有機膦酸酯酶的活性測定都是采用自配試劑進行檢測。因隨時需要稱量和配制試劑而使用不方便。同時，因試劑配制人員的熟練程度、儀器的準確性等原因產(chǎn)生的系統(tǒng)誤差較大。本實用新型的任務是提供一套預先已由生產(chǎn)廠商稱量配制和分裝好，臨用時只需簡便操作即能使用的檢測試劑盒。它應該具有制做容易，裝配合理、使用方便的特點，并能同時滿足測定多個樣品的需要。
本實用新型的任務是以如下方式完成的將檢測試劑“苯基膦酸(對硝基)苯酚酯”稱量后裝入一個有色玻璃瓶內(nèi)，將玻璃瓶用膠塞密封蓋好，此作為“試劑瓶(1)”。
將三羥甲基氨基甲烷配制成0.03－0.2mol／L濃度，并用濃鹽酸調節(jié)成PH＝8.5－9.2的緩沖液，吸取一定量裝入另一個有色玻璃瓶內(nèi)，將玻璃瓶用膠塞密封蓋好，此為“試劑瓶(2)”。
將總量為1克分子(84.01克)無水碳酸氫鈉，10毫克分子(3.8克)磷酸三鈉和10毫克分子(3.72克)乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)共溶于0.9升蒸餾水中，溶完后補加蒸餾水到總體積1.0升。吸取一定量分裝于小試劑瓶內(nèi)，此作為“試劑瓶(3)”。
將上述三瓶試劑和1－6塊各具有多個微孔(每個微孔容積為250ul)的塑料反應板(4)，共同裝配在一個適當大小的盒子(5)內(nèi)，就構成配套的檢測試劑盒。通過上述三種試劑與微孔反應板配合使用，就能一次測定多個血清樣品中的有機膦酸酯酶活性。本實用新型簡化了實驗操作步驟，方便臨床檢測人員的使用，能較好地滿足實驗操作標準化、規(guī)范化的需求。
以下將結合檢測試劑盒的構成與附圖
及使用方法，對本實用新型作進一步的詳細描述。
檢測試劑盒的構成試劑瓶(1)內(nèi)裝已按固定重量準確稱量并閉封包裝的“苯基膦酸(對硝基)苯酚酯銨鹽”試劑1瓶，試劑瓶總容量12－27毫升，試劑凈重量為10－100毫克。
試劑瓶(2)內(nèi)裝已準確配制并閉封包裝的三羥甲基氨基甲烷(Tris)與鹽酸的混合溶液，試劑的酸堿度在PH8.5－9.2之間，三羥甲基氨基甲烷(Tris)的濃度為0.03－0.2mol／L。
試劑瓶(3)也稱終止劑，內(nèi)裝無水碳酸氫鈉、磷酸三鈉和乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)的混合溶液，混合后各物質的最終濃度為0.5－1mol／L NaHCO3，5－50mmol／LNa3PO4和5－50mmol／LEDTA。
微孔反應板(4)每個檢測盒配裝有1－6塊微孔反應板，每塊板的微孔數(shù)為5－80個，每個微孔的總容積為200－400ul。
上述試劑和反應板一起裝在一個由塑料或硬紙等材料制成的適當大小的方形盒子(5)中。組裝好的檢測盒可以放置在4－20℃保存。
檢測試劑盒的使用方法臨使用前打開各號試劑瓶的密封瓶塞，將試劑瓶(2)內(nèi)的試劑全部倒入試劑瓶(1)內(nèi)。搖動溶解成“底物溶液”。將檢測盒裝備的微孔反應板(4)取出，在每個微孔中分別加入5－50ul待測血清標本，每塊反應板留出2個孔不加標本。再向各孔內(nèi)加入50－100ul“底物溶液”，立刻用微量振蕩器混勻后，放入37－50℃環(huán)境溫育0.5－2小時。待溫育時間到達，立即向每孔中加入100ul終止劑(瓶內(nèi)試劑)(3)?；靹蚝蠓胖?0分鐘，即可采用酶聯(lián)免疫檢測儀比色測定各孔400－410nm波長處的光吸收值。兩個沒加血清標本的對照孔中，除不加血清外，其它試劑加量與測定孔相同。各孔光吸收值按加樣量和稀釋倍數(shù)進行適當換算即可得到各血清樣品中所含有機膦酸酯酶活性單位。
采用這套檢測試劑盒測定血清或其它樣品中有機膦酸酯酶活性定量準確、操作方便，適用于醫(yī)院檢驗室或臨床生化實驗室常規(guī)定量測定血清或其它樣品中的有機膦酸酯酶活性。
權利要求1.一套由三瓶試劑和數(shù)塊微孔反應板配套組成的有機膦酸酯酶檢測試劑盒，其特征是三瓶試劑中有一瓶裝有定量的“苯基膦酸(對硝基)苯酚酯銨鹽”作為酶的檢測底物，另外二瓶分別裝有緩沖液和終止劑。
2.按權利要求1規(guī)定的有機膦酸酯酶檢測試劑盒，其特征是在裝有終止劑的試劑瓶內(nèi)，終止劑是由0.5－1mol／L NaHCO3，5－50mmol／L Na3PO4和5－50mmol／L EDTA混合組成。
3.按權利要求1規(guī)定的有機膦酸酯酶檢測試劑盒，其特征是外層包裝盒可以采用塑料、硬紙等材料制作。
專利摘要本實用新型是一套適用于醫(yī)院檢驗科或臨床生化實驗室進行有機膦酸酯酶定量研究的有機膦酸酯酶活性檢測試劑盒。本檢測試劑盒是由一瓶裝有“苯基膦酸(對硝基)苯酚酯”的試劑瓶(1)，一瓶裝有緩沖液的試劑瓶(2)和一瓶裝有終止劑的試劑瓶(3)以及數(shù)塊微孔反應板(4)，由一個塑料或硬紙等材料做成的盒子(5)包裝在一起組成。由試劑盒內(nèi)的試劑(1)、(2)、(3)和微孔反應板(4)配套使用，可以定量測定血清或其它樣品中的有機膦酸酯酶活性。
文檔編號G01N33/50GK2194003SQ9422579
公開日1995年4月5日 申請日期1994年2月19日 優(yōu)先權日1994年2月19日
發(fā)明者韓剛毅, 靳曉紅, 閻祥華, 王實 申請人:中國人民解放軍濟南軍區(qū)后勤部軍事醫(yī)學研究所