專(zhuān)利名稱(chēng)：檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的免疫膠體金試劑及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于采用免疫測(cè)定法檢測(cè)肝炎所用的試劑及方法技術(shù)領(lǐng)域。
目前在臨床上用于檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗體，核心抗體、e抗體所用的一種檢測(cè)儀器為γ計(jì)數(shù)儀，采用放射免疫測(cè)定法來(lái)檢測(cè)，該儀器所用的放射性同位素很容易污染環(huán)境，不利于操作人員的身體健康，而且這種儀器價(jià)格昂貴、操作復(fù)雜，不利于廣泛推廣使用。另一種檢測(cè)儀器為酶聯(lián)檢測(cè)儀，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法來(lái)檢測(cè)，該儀器同樣價(jià)格昂貴、而且采用活性較好的酶進(jìn)行標(biāo)記，實(shí)驗(yàn)流程長(zhǎng)，操作復(fù)雜。上述兩種檢測(cè)儀器及檢測(cè)方法僅能在科研單位和較大型醫(yī)院使用，很難得到廣泛推廣使用。
本發(fā)明的目的在于克服上述兩種測(cè)試儀器及檢測(cè)方法的缺點(diǎn)，提供一種不需要測(cè)試儀器、簡(jiǎn)單、快速、敏感性高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單，能準(zhǔn)確快速地檢測(cè)乙型肝炎病毒表面抗體、核心抗體、e抗體所用的檢測(cè)試劑以及方法。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的解決方案是以下述配比的組分為原料制成的檢測(cè)試劑氯金酸 0.01～1g葡萄球菌A蛋白0.004～0.1g蒸餾水 加至1000ml應(yīng)用上述試劑檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的方法按以下次序的幾個(gè)步驟進(jìn)行將乙型肝炎病毒表面抗原、核心抗原、e抗原分區(qū)滴在硝酸纖維或醋酸纖維或醋酸纖維與硝酸纖維混合物的微孔濾膜上，干燥后加血清4～15μl；經(jīng)滲濾，加本發(fā)明檢測(cè)試劑3～15μl；滲濾后，加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液50～500μl，單項(xiàng)陽(yáng)性者出現(xiàn)單個(gè)紅色斑點(diǎn)，多項(xiàng)陽(yáng)性者出現(xiàn)多個(gè)紅色斑點(diǎn)，無(wú)色者為陰性。
采用本發(fā)明試劑及方法可在3至5分鐘內(nèi)同時(shí)檢測(cè)出乙型肝炎病毒表面抗體、核心抗體、e抗體的結(jié)果，也可在3至5分鐘檢測(cè)出乙型肝炎表面抗體、核心抗體、e抗體中的任意一項(xiàng)或任意兩項(xiàng)的結(jié)果，所用的檢測(cè)樣本量比酶聯(lián)檢測(cè)儀少10～100倍，而檢測(cè)結(jié)果與酶聯(lián)檢測(cè)儀相當(dāng)。本發(fā)明與γ記數(shù)儀、與酶聯(lián)檢測(cè)儀，以及檢測(cè)方法相比，具有操作簡(jiǎn)便、快速、特異敏感、重復(fù)性好、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，可在大小醫(yī)療單位廣泛推廣使用。
發(fā)明人給出了本發(fā)明第一個(gè)實(shí)施例(以生產(chǎn)本發(fā)明產(chǎn)品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸0.5g葡萄球菌A蛋白 0.05g蒸餾水 加至1000ml其制備工藝如下1、原材料預(yù)處理對(duì)已購(gòu)買(mǎi)的氯金酸和葡萄球菌A蛋白的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，其中的有效成份含量均應(yīng)符合規(guī)定的范圍，按配比稱(chēng)取各原料。
蒸餾水中應(yīng)無(wú)雜質(zhì)，用蒸餾水器將蒸餾水重新蒸餾一次，或用離子交換樹(shù)脂制成去離子水。
將氯金酸溶解于蒸餾水中，配制成0.05％的氯金酸水溶液，葡萄球菌A蛋白用蒸餾水配制成0.005g/ml的水溶液。
2、氯金酸膠體金溶液的制備采用檸檬酸三鈉還原法制備氯金酸膠體金溶液。取0.01％的氯金酸水溶液100ml，加溫至沸騰，加入4ml1％的檸檬酸三鈉水溶液，用攪拌器充分?jǐn)嚢柚辆鶆蚧旌?，加溫煮沸，制成氯金酸膠體金溶液。
3、成品制作將已配制好的葡萄球菌A蛋白水溶液倒入已制備的氯金酸膠體金溶液，用攪拌器充分?jǐn)嚢柚辆鶆蚧旌希谷氲退匐x心機(jī)，經(jīng)低速離心機(jī)旋轉(zhuǎn)分離后，取上清液，再倒入高速離心機(jī)，經(jīng)高速離心機(jī)旋轉(zhuǎn)分離后，去除上清液，取沉淀物，加入1％的小牛血清白蛋白1～5g，加蒸餾水至1000ml，制成本發(fā)明試劑，經(jīng)質(zhì)量檢查合格后，放入冰箱保存?zhèn)溆谩?br> 發(fā)明人給出了本發(fā)明第二個(gè)實(shí)施例(以生產(chǎn)本發(fā)明產(chǎn)品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸0.015g葡萄球菌A蛋白 0.005g蒸餾水加至1000ml其制備工藝與第一個(gè)實(shí)施例完全相同。
發(fā)明人給出了本發(fā)明第三個(gè)實(shí)施例(以生產(chǎn)本發(fā)明產(chǎn)品1000ml為例)所用的原料及其配比為氯金酸 0.8g葡萄球菌A蛋白0.09g蒸餾水 加至1000ml其制備工藝與第一個(gè)實(shí)施例完全相同。
發(fā)明人給出了采用本發(fā)明試劑檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的方法的一個(gè)實(shí)施例如下將乙型肝炎病毒表面抗原、核心抗原、e抗原分區(qū)滴在硝酸纖維素膜上，干燥后加血清8μl，經(jīng)滲濾，加本發(fā)明第一個(gè)實(shí)施例檢測(cè)試劑10μl，滲濾后，加磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液200μl，單項(xiàng)陽(yáng)性者出現(xiàn)單個(gè)紅色斑點(diǎn)，多項(xiàng)陽(yáng)性者出現(xiàn)多個(gè)紅色斑點(diǎn)，無(wú)色者為陰性。
發(fā)明人采用本發(fā)明第一個(gè)實(shí)施例制備的檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的免疫膠體金試劑，采用本發(fā)明檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的方法的一個(gè)實(shí)施例與用酶聯(lián)檢測(cè)儀采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法對(duì)乙型肝炎病毒表面抗體、核心抗體、e抗體進(jìn)行了對(duì)比檢測(cè)血清標(biāo)本149份，測(cè)試結(jié)果如下用酶聯(lián)檢測(cè)儀采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)得抗乙型肝炎病毒表面抗體陽(yáng)性5份、抗乙型肝炎病毒核心抗體陽(yáng)性30份、抗乙型肝炎病毒e抗體陽(yáng)性11份、抗乙型肝炎病毒核心抗體和e抗體雙陽(yáng)性5份。用本發(fā)明檢測(cè)試劑以及采用本發(fā)明檢測(cè)方法，除抗乙型肝炎病毒表面抗體陽(yáng)性為6份、抗乙型肝炎病毒e抗體陽(yáng)性為10份外，其余結(jié)果均與酶聯(lián)檢測(cè)儀采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)得的結(jié)果相符。采用兩種檢測(cè)手段和兩種檢測(cè)方法的總符合率為98.6％。隨機(jī)抽取20份陽(yáng)性標(biāo)本，用本發(fā)明檢測(cè)試劑以及檢測(cè)方法進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)4次，試驗(yàn)結(jié)果完全相符。若以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法為標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明的檢測(cè)方法的檢測(cè)靈敏度為98％、特異度為98.9％。
本發(fā)明檢測(cè)試劑以及檢測(cè)方法還可用于檢測(cè)其它的病原微生物特異性免疫球蛋白G(IgG)。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的免疫膠體金試劑，其特征在于它是以下述配比的組分為原料制成的檢測(cè)試劑氯金酸 0.01～1g葡萄球菌A蛋白 0.004～0.1g蒸餾水 加至1000ml
2.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述的試劑檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的方法，其特征在于它按以下次序的幾個(gè)步驟進(jìn)行將乙型肝炎病毒表面抗原、核心抗原、e抗原分區(qū)滴在硝酸纖維或醋酸纖維或醋酸纖維與硝酸纖維混合物的微孔濾膜上，干燥后加血清4～15μl；經(jīng)滲濾，加本發(fā)明檢測(cè)試劑3～15μl；滲濾后，加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液50～500μl，單項(xiàng)陽(yáng)性者出現(xiàn)單個(gè)紅色斑點(diǎn)，多項(xiàng)陽(yáng)性者出現(xiàn)多個(gè)紅色斑點(diǎn)，無(wú)色者為陰性。
全文摘要
一種檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的免疫膠體金試劑，在1000ml試劑中含氯金酸0.01～1g，含葡萄球菌A蛋白0.004～0.1g。用本試劑檢測(cè)乙型肝炎病毒抗體的方法為將乙型肝炎病毒表面抗原、核心抗原、e抗原分區(qū)滴在硝酸纖維或醋酸纖維的微孔濾膜上，干燥后加血清，經(jīng)滲濾，加本發(fā)明試劑，滲濾后加磷酸鉀鹽或磷酸鈉鹽或三羥甲基氨基甲烷—鹽酸，出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)者為陽(yáng)性，無(wú)色者為陰性。本試劑及方法具有操作簡(jiǎn)便、快速、敏感、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/576GK1140258SQ9511360
公開(kāi)日1997年1月15日 申請(qǐng)日期1995年7月5日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月5日
發(fā)明者閻小君, 肖樂(lè)義, 陳遠(yuǎn)鑫, 李陜區(qū) 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)