專利名稱：一種檢測(cè)胰島細(xì)胞抗體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)胰島細(xì)胞抗體的方法。
糖尿病是一種嚴(yán)重危害人民健康的常見(jiàn)、多發(fā)的內(nèi)分泌代謝病。糖尿病發(fā)生率日益增多，據(jù)報(bào)告目前全世界糖尿病人數(shù)高達(dá)6000萬(wàn)人，另外，還有很多患者未被發(fā)現(xiàn)，估計(jì)約有1.2億以上的糖尿病患者。在我國(guó)，目前估計(jì)有糖尿病患者1500-2000萬(wàn)人。隨著我國(guó)改革開(kāi)放，國(guó)民經(jīng)濟(jì)的繁榮昌盛，人的壽命在不斷延長(zhǎng)，人口老齡化日趨顯著，此病勢(shì)必將進(jìn)一步增多。更為嚴(yán)重的是糖尿病的慢性并發(fā)癥，如視力障礙、晚期腎臟病、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病酮癥酸中毒等等，不僅病人家庭和社會(huì)要為之耗費(fèi)大量的醫(yī)療費(fèi)用，也是造成很多此類病人致殘致死的原因，給國(guó)家和社會(huì)帶來(lái)了巨大的壓力和沖擊。
糖尿病臨床過(guò)程多種多樣，使臨床分型有時(shí)變得十分困難。目前已知胰島細(xì)胞抗體(ICA)是檢測(cè)胰島素依賴型糖尿病(insulin-dependentdiabetes mellitus IDDM)的重要免疫學(xué)指標(biāo)之一。
自Bottazzo等在1974年應(yīng)用間接免疫熒光法，首次發(fā)現(xiàn)胰島素依賴型糖尿病患者血清中有胰島細(xì)胞抗體(ICA)之后，各國(guó)學(xué)者又對(duì)之進(jìn)行了不同程度的改進(jìn)。但因免疫熒光法熒光易猝滅，背景中非特異性熒光較多，常導(dǎo)致結(jié)果判定困難，后來(lái)，又有學(xué)者將免疫酶標(biāo)技術(shù)用于ICA的檢測(cè)中，如ABC法、PAP法、POPA法等。因這些方法敏感性高，特異性強(qiáng)，大大推動(dòng)了ICA測(cè)定的實(shí)際應(yīng)用。但是，由于血型抗體的干擾，常規(guī)的ICA測(cè)定均需用“O”型血人正常胰腺做抗原。因人胰腺來(lái)源十分困難，“O”型血人胰腺來(lái)源則更難，所以，目前ICA的檢測(cè)一直未能成為糖尿病診斷中的常規(guī)檢測(cè)指標(biāo)。
本發(fā)明目的在于改進(jìn)現(xiàn)有技術(shù)之缺點(diǎn)，而拓寬抗原來(lái)源提供一種采用豬的胰腺切片做抗原，檢測(cè)人的胰島細(xì)胞抗體，來(lái)予測(cè)、診斷和鑒別胰島素依賴型糖尿病，為臨床大夫提供重要依據(jù)。
本發(fā)明目的是這樣測(cè)定并實(shí)現(xiàn)的，取10頭健康豬的胰腺切片作抗原；用“O”型血正常人胰腺做抗原測(cè)定的ICA及谷氨酸脫氫酶(GAD，由澳大利亞國(guó)際糖尿病研究所測(cè)定)抗體測(cè)定均為陽(yáng)性并已確診為IDDM患者的血清20份；非糖尿病患者陰性血清10份；同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照切片(用磷酸緩沖液PBS代替血清)。經(jīng)過(guò)多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，用“O”型血正常人胰腺和健康豬胰腺切片檢測(cè)ICA，20例IDDM均為陽(yáng)性，10例非糖尿病患者和陰性對(duì)照組均為陰性。因此我們認(rèn)為用豬胰腺切片替代“O”型血正常人胰腺切片檢測(cè)胰島素依賴型糖尿病患者血清中的ICA是可行的。具體步驟為，取豬的新鮮胰腺組織置于Bouin｀s液中，在1℃-6℃的條件下放置40-56小時(shí)，然后脫水，浸蠟、石蠟包埋，制成1-8μ厚的切片。
本發(fā)明方法由于豬胰腺來(lái)源廣泛，價(jià)格低廉，而為廣泛性進(jìn)行ICA的檢測(cè)開(kāi)辟了一條新的途徑。
下面引用實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法詳述如下。


圖1為人胰腺胰島細(xì)胞陽(yáng)性照片圖2為豬胰腺胰島細(xì)胞陽(yáng)性照片圖3為豬胰腺胰島細(xì)胞陰性照片實(shí)施例1、取健康豬之新鮮胰腺組織，固定于Bouin｀s液中，在4℃冰箱固定48小時(shí)，常規(guī)脫水、浸蠟、石蠟包埋，制成5μ厚的切片；2、取待查患者血清；3、POPA法檢測(cè)ICA(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟，流水沖洗；(2)0.01M PBS PH7.4洗5｀×3次；(3)分別滴加各稀釋度的血清濕盒內(nèi)，置室溫60｀或4℃過(guò)液；(4)PBS洗5｀×3次；(5)滴加POPA液30｀；(6)PBS洗5｀×3次；(7)0.05M Tris-Hcl buffer液洗5｀×2次；(8)0.025％3｀3-2氨基聯(lián)苯胺液顯色1｀-5｀；(9)封片觀察；(10)結(jié)果如IDDM患者血清滴加豬胰腺切片或“O”型血正常人胰腺切片，胰島細(xì)胞漿內(nèi)均有清晰的棕黃色陽(yáng)性顆粒沉著，背影淺淡清晰，如圖1、圖2所示(見(jiàn)附件照片1、2)；如滴加非糖尿病患者的血清，其豬胰腺切片胰島細(xì)胞均未著染如圖3所示(見(jiàn)附見(jiàn)照片3)，和陰性對(duì)照組的人胰腺切片一樣，呈陰性反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)胰島細(xì)胞抗體的方法，其特征在于采用豬的胰腺切片做抗原。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)胰島細(xì)胞抗體的方法，其特征在于取豬的新鮮胰腺組織置于Bouin｀s液中，在1℃-6℃的條件下放置40-56小時(shí)，然后脫水，浸蠟、石蠟包埋，制成1-8μ厚的切片。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)胰島細(xì)胞抗體的方法,它是采用豬的胰腺切片做抗原,檢測(cè)人的胰島細(xì)胞抗體,來(lái)預(yù)測(cè)、診斷和鑒別胰島素依賴型糖尿病,為臨床大夫提供重要依據(jù)。本發(fā)明方法由于豬胰腺來(lái)源廣泛,價(jià)格低廉,而為廣泛性進(jìn)行ICA的檢測(cè)開(kāi)辟了一條新的途徑。
文檔編號(hào)G01N33/53GK1193110SQ97100668
公開(kāi)日1998年9月16日 申請(qǐng)日期1997年3月11日 優(yōu)先權(quán)日1997年3月11日
發(fā)明者潘琳, 李光偉, 彭俊云, 李茜 申請(qǐng)人:中日友好醫(yī)院