專利名稱：用免疫測定技術(shù)鑒別和定量聚合物的方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及一種使用免疫測定技術(shù)鑒別和定量水溶液系統(tǒng)中的聚合物的方法。具體地講，單克隆抗體(Mab’s)的制備是針對于用于開始聚合過程的引發(fā)劑(或其片段)；用于在聚合過程中制備預(yù)測定聚合物的鏈轉(zhuǎn)移劑；或是一個能在隨后連接到鏈轉(zhuǎn)移劑上的功能基。本發(fā)明還涉及表達這些MAbs的新的雜交瘤(不死的細胞系)。本發(fā)明對于測定水處理應(yīng)用中的聚合物濃度特別有用。
水溶性聚合物被用于許多水溶液系統(tǒng)，例如作為礦物分散劑；作為鍋爐用水、冷凝塔、反滲透應(yīng)用、糖精制、紙生產(chǎn)、地熱過程、和油井的水處理添加劑；作為去污添加劑，起助洗劑、抗薄膜劑、分散劑、分離劑、包鞘抑制劑的作用。在這些類型的應(yīng)用中，多聚物與礦物質(zhì)或其它物質(zhì)形成配合物使它們從水中消除，以防止在水處理應(yīng)用中產(chǎn)生腐蝕和礦物質(zhì)沉淀(水垢)。一段時間后，隨著聚合物上配合位點的飽和，聚合物開始失活或分解，從而必須加入更多的活性聚合物。特別重要的是，在水處理應(yīng)用中，活性聚合物不足可導(dǎo)致溶解的礦物質(zhì)對水處理的破壞，引起嚴重的腐蝕或水垢沉淀；而維持高于所需的活性聚合物的濃度則昂貴而浪費。因此，希望能夠方便地測定在不同時間下系統(tǒng)內(nèi)的聚合物濃度，以確定是否需要另外加入聚合物。
關(guān)于測定水溶液系統(tǒng)中的聚合物的問題之一在于，傳統(tǒng)的檢測方法(例如比色或熒光分析)缺乏靈敏度，因為聚合物通常以極低的水平存在，從百萬分之(“ppm”)500至5以下。關(guān)于測定水溶液中的聚合物的另一個問題在于，檢測方法常常缺乏選則性，可能對水溶液系統(tǒng)中的非聚合物成分給出錯誤的結(jié)果。
克服這些問題的嘗試包括，針對聚合物產(chǎn)物的鏈節(jié)制造MAbs、然后用這些MAbs通過免疫測定技術(shù)檢測聚合物產(chǎn)物的存在或濃度的方法。在例如EP540314 A1(Wetegrove等)、EP535347 A2(Wetegrove等)、和EP59249 A1(Weatherby等)中公開和討論了這種方法。在所有這些方法中，MAbs結(jié)合于聚合物的選定位點上，但是，由于聚合物鏈內(nèi)有大量的重復(fù)單元，因而MAbs和具體的聚合物鏈之間不可能一一對應(yīng)；此外，由于聚合物具有變動的鏈長度，因而結(jié)合于各聚合物上的MAbs的數(shù)量會有變化。因此，關(guān)于MAbs和聚合物濃度的比例的測定是批次依賴性的(即該比例將依據(jù)所制備的聚合物的具體批次而變化)，并且這種測量的精確度的變化可能相對較大。
PCT US94/09264(Garner等)公開了一種標記產(chǎn)品以用于隨后的鑒別的方法。該方法包括制備一種低分子量半抗原，將該半抗原共價結(jié)合于一個載體化合物上，然后將這種半抗原標記的化合物與產(chǎn)物締合，這樣，半抗原作為標記物可以在隨后用免疫測定技術(shù)測定。載體化合物可以是聚合物，這樣，可以將半抗原連接到已形成的聚合物上，或者將半抗原在聚合之前連接到單體上。如想用于該方法，半抗原標記的化合物(“標記物化合物”)應(yīng)對產(chǎn)物是無影響的，對產(chǎn)物而言是惰性的，并且事先沒有締合在產(chǎn)物上。通常通過將標記物化合物與產(chǎn)物混合使其與產(chǎn)物締合，但它可以在包裝或標記產(chǎn)物時存在。
盡管Garner等公開了“以與未標記化合物固定的比例使用這種標記的化合物可以示蹤標記的化合物”，但他們的方法的性質(zhì)使其不可能快速而方便地測定聚合物產(chǎn)物的濃度。Garner等指出，可以將半抗原締合于已形成的聚合物上，或在聚合之前締合于單體上；然而，在所有情況下，由于各個聚合物的鏈長度是不固定的，締合于個具體的聚合物鏈上的半抗原數(shù)量會隨之變動，所以，不可能絕對地測定出半抗原聚合物的比例。因此，半抗原聚合物的比例是批次依賴性的，使聚合物的濃度難于測定對于各批的標記聚合物均需作出標準濃度曲線；加入系統(tǒng)中的聚合物不可能與先前加入的聚合物來自同一批次，可能會影響測定的校準和精確度；系統(tǒng)中總的聚合物濃度可能由來自于不同批次而不是僅僅一個批次的聚合物組成，也可能影響測定的校準和精確度。
發(fā)明陳述一種鑒別和定量水溶液系統(tǒng)中的聚合物的方法，其中至少有一部分聚合物含有選自于鏈轉(zhuǎn)移劑、引發(fā)劑或其片段、或連接于鏈轉(zhuǎn)移劑上的基團的可檢測末端，該方法由以下步驟組成a)制備可檢測末端的單克隆或多克隆抗體；b)獲得要測定的水溶液系統(tǒng)的樣品，將該樣品與單克隆或多克隆抗體一起孵育；c)檢測和測量單克隆或多克隆抗體的結(jié)合程度以鑒別聚合物并測定水溶液系統(tǒng)中的聚合的濃度。
附圖簡述

圖1是圖解聚合物的濃度(μg/ml)對反應(yīng)性(％抑制)的曲線，說明不同聚合物在TNT-Tag免疫測定中的反應(yīng)性。曲線的圖標如下-◆-＝TNT-CYS-PAA；-■-＝CYS-PAA；-▲-＝PAA-PAA；-X-＝Acusol445N。
發(fā)明詳述本說明書中使用的下列術(shù)語具有以下定義，除非文中另有明確的指示?！爸旅庖呖乖被颉爸旅庖叻肿印敝敢环N物質(zhì)，當將其引入到免疫系統(tǒng)具有功能的動物體內(nèi)時，可激發(fā)免疫反應(yīng)而導(dǎo)致免疫狀態(tài)?！翱乖瓫Q定蔟”或“表位”指致免疫分子上可被特異抗體鑒別的部分。“半抗原”是一種不能在體內(nèi)致免疫的低分子量分子，但它可以作為致免疫分子上的抗原決定簇的一部分；也就是說，如果事先將這些半抗原偶聯(lián)于一個致免疫抗原，就可以形成抗配合物的不同部分的抗體，包括抗某些可特異性結(jié)合于半抗原的部分的抗體?！皹擞洝敝妇酆衔镦溕弦研纬蓡慰寺』蚨嗫寺】贵w的可檢測末端，其中的可檢測末端選自鏈轉(zhuǎn)移劑、引發(fā)劑(或其片段)、或連接于鏈轉(zhuǎn)移劑上的基團；“標記的”指聚合物，用于表示所指的聚合物含有標記。除非特別說明，指定的范圍均包括端值。
在使用鏈轉(zhuǎn)移劑的自由基聚合過程中，聚合反應(yīng)由鏈轉(zhuǎn)移劑中止。由此產(chǎn)生的自由基成為新聚合物鏈的開端。當僅有有限量的聚合分支時〔例如通常在低分子量(小于50000)聚合物中出現(xiàn)的情況-代表性的是anti-scalants〕，鏈轉(zhuǎn)移劑與聚合物鏈的比例大約是1∶1；因此，檢測標記的聚合物濃度的方法將導(dǎo)致對系統(tǒng)內(nèi)聚合物的總濃度的直接測定。通過使用靈敏和選擇性的免疫測定技術(shù)對標記進行測定，本發(fā)明的方法提供了一種簡便、有效的檢測聚合物的方法。
在水溶液系統(tǒng)內(nèi)使用的所有聚合物均可被標記，或者是某一特定部分的聚合物可以被標記。優(yōu)選僅標記系統(tǒng)內(nèi)的一小部分聚合物。當僅有一部分聚合物被標記時，未標記的聚合物無需與標記的聚合物相同，但是優(yōu)選未標記的聚合物和標記的聚合物在系統(tǒng)內(nèi)的性質(zhì)相似，從而使標記的聚合物的排除率能夠精確地反映整個系統(tǒng)的排除率。
本發(fā)明的標記的聚合物可以是可與鏈轉(zhuǎn)移劑聚合的任何類型，一般是乙烯基聚合。在本申請的使用本發(fā)明的標記聚合物來測定水處理聚合物的實施方案中，優(yōu)選使用多元羧酸的聚合物或共聚物，尤其是丙烯酸酯聚合物和其衍生物。特別有用的丙烯酸酯聚合物包括從下列單體制得的聚合物和共聚物，所述單體包括，每個分子含有3-5個碳原子的烯鍵不飽和的一元羧酸、每個分子含有4-8個碳原子的烯鍵不飽和的二元羧酸、以及它們的堿金屬和銨鹽、和順式二元羧酸的酸酐。一元羧酸的例子包括但不僅限于丙烯酸、甲基丙烯酸、乙烯基乙酸、巴豆酸、和丙烯氧基丙酸。其中的丙烯酸和甲基丙烯酸為優(yōu)選。適當?shù)亩人岬睦影ǖ粌H限于馬來酸、衣康酸、甲基富馬酸、富馬酸、檸康酸、四氫化鄰苯二甲酸、四氫化鄰苯二甲酸酐、和馬來酸酐。在這些二元酸單體中，馬來酸酐為優(yōu)選。
起始聚合物還可以由最高為百分之70重量比(“wt％”)的不合酸的單烯鍵不飽和單體構(gòu)成，只要聚合物仍然是水溶性的。這些單體包括但不僅限于丙烯酸或甲基丙烯酸的烷基酯，例如丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸丁酯、和甲基丙烯酸異丁酯；丙烯酸或甲基丙烯酸的羥烷基酯，例如丙烯酸羥乙基酯、丙烯酸羥丙基酯、甲基丙烯酸羥乙基酯、和甲基丙烯酸羥丙基酯；其它類型的丙烯酸或甲基丙烯酸酯，例如(甲)丙烯酸2-硫代乙基酯、(甲)丙烯酸3-硫代丙基酯、(甲)丙烯酸2-硫酸根合乙基酯、丙烯酸二甲氨基乙酯和甲基丙烯酸二氧磷基乙基酯；丙烯酰胺和烷基取代的丙烯酰胺，例如甲基丙烯酰胺、叔丁基丙烯酰胺、N-叔丁基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰胺、N，N-二甲基丙烯酰胺、和3-N，N，-二甲基氨基丙基丙烯酰胺；丙烯腈，例如甲基丙烯腈；烯丙醇；烯丙基磺酸；烯丙基膦酸；乙烯基膦酸；2-乙烯基吡啶；4-乙烯基吡啶；N-乙烯基吡咯烷酮；N-乙烯基甲酰胺；N-丙烯嗎啉；丙烯醛；乙二醇二丙烯酸酯；三羥甲基丙烷三丙烯酸酯；鄰苯二甲酸二烯丙基酯；乙酸乙烯酯；苯乙烯；乙烯基磺酸、對苯乙烯磺酸、和2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸；甲基丙烯基磺酸酯和1-丙烯氧基-2-羥丙基磺酸酯(COPS)；丙烯酰胺基乙二酸；以及上述化合物的鹽。
起始聚合物最為優(yōu)選多元丙烯酸，或丙烯酸和馬來酸和馬來酸酐的共聚物。此外，起始聚合物或共聚物的數(shù)均分子量(“Mn”)優(yōu)選在500-100000，更為優(yōu)選1000-50000，最為優(yōu)選2000-25000的范圍內(nèi)。
用于控制聚合物成分的分子量的鏈轉(zhuǎn)移劑均可以用作本發(fā)明的標記物。這些鏈轉(zhuǎn)移劑包括但不僅限于硫醇、次膦酸酯(phosphinate)、膦酸酯、亞磺酸(例如苯基亞磺酸和對甲苯基亞磺酸)、和氨基硫醇。適當?shù)拇戊⑺狨グ║.S.5294371(Clubley等)中所公開的分子式I(col.1)的化合物和U.S.5376731(Kerr等)中所公開的分子式III(col.4)的化合物，適當?shù)陌被虼及║.S.5298585(McCallum等)中所公開的類型。再此引入這三篇專利用于參考他們描述這些類型的鏈轉(zhuǎn)移劑和制備它們的方法的范圍。優(yōu)選使用半胱氨酸(“CYS”)、氨基乙基硫醇(“AET”)、或苯基次膦酸(“PPA”)作為鏈轉(zhuǎn)移劑。
用于引發(fā)自由基加成聚合反應(yīng)的然后引發(fā)劑和引發(fā)劑的片段均可以用作本發(fā)明的標記物。這些引發(fā)劑或引發(fā)劑的片段包括但不僅限于過氧酯，例如過氧苯甲酸叔丁酯和過氧苯甲酸叔戊酯；二烷基過氧化物，例如過氧化二枯基；二芳基過氧化物，例如過氧化苯甲酰、氫過氧化物，例如氫過氧化枯烯；偶氮化合物，例如2-苯基偶氮-4-甲氧基-2，4-二甲基戊腈、2，2’-偶氮二-2-甲基-N-苯基丙酰脒二鹽酸鹽、2，2’-偶氮二-2(N-(4-氯苯基)-2-甲基丙酰脒)二鹽酸鹽、2，2’-偶氮二-(2-(5-甲基-2-咪唑啉-2-基)丙烷)二鹽酸鹽、和2，2’-偶氮二(2-(2-咪唑啉-2-基)丙烷)二鹽酸鹽。
當標記物是連接到鏈轉(zhuǎn)移劑上的基團時，可選則的鏈轉(zhuǎn)移劑是氨基硫醇，尤其是CYS或AET?？蛇B接到這些鏈轉(zhuǎn)移劑上的基團是那些可以與所需基團發(fā)生特異性的反應(yīng)、而不與聚合物的其它鏈節(jié)反應(yīng)的基團。當鏈轉(zhuǎn)移劑含有胺的側(cè)基時，優(yōu)選在它們上連接可與胺反應(yīng)的基團作為標記物。優(yōu)選的可與胺反應(yīng)的基團包括但不僅限于1-(二甲胺氨基)-5-萘磺酸和其鹵化物(“丹?；?；4-二甲胺基偶氮苯-4-磺酸和其鹵化物(“dabsyl”)；2，4，6-三硝基苯磺酸和其鹽(“TNT”)；3-苯甲?；?2-甲醛；3-(2-furfoyl)喹啉-2-甲醛；2，4-二硝基氟苯(Sanger’s試劑)；和茚三酮。特別優(yōu)選的基團包括丹?；?、dabsyl、和TNT。
本發(fā)明的單克隆或多克隆抗體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的技術(shù)進行制備。有許多制備多克隆抗體的技術(shù)，包括由B.A.L.Hurn和S.M.Chantler記載的技術(shù)，“試劑抗體的制備”，酶學方法，70104-142(1980)。制備MAbs的技術(shù)首先由G.Kohler和C.Milstein記載，Nature，265495(1975)。在本發(fā)明的免疫測定技術(shù)中優(yōu)選使用MAbs。
為了制備抗特殊標記物的MAbs，首先在接種結(jié)合物的小鼠體內(nèi)制備標記物的致免疫結(jié)合物和致免疫載體。在1到300天或更長的時間內(nèi)進行多次接種。接種可以通過許多途徑中的任意一種進行，包括腹腔內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下注射，每次注射劑量為5-50微克(“μg”)結(jié)合物。結(jié)合物可以單獨注射，或與其它物質(zhì)結(jié)合以增強其致免疫性。在免疫作用期結(jié)束時，收集來自脾臟的淋巴細胞，將其與骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤。然后將這些雜交瘤分離、培養(yǎng)并測試，以測定哪種雜交瘤對標記物具有所需的特異性和親和性。然后，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的技術(shù)讓來自于這些選定的雜交瘤的MAbs在體外和體內(nèi)生長。
本發(fā)明的雜交瘤包括所謂的Hybrid 1、Hybrid 2、Hybrid 3，通過瑞士或Balb/c小鼠的免疫作用獲得。通過這些雜交瘤加工的MAbs，可與PPA本身、與2-羧基丙基(苯基)膦酸(本質(zhì)上，PPA加一單位的AA)、或與標記的聚合物(PPA-PAA)在低至1ppm的濃度下反應(yīng)，但是對未標記的聚合物(PAA)僅有少量親和力或沒有親和力。這些MAbs適用于本發(fā)明的免疫測定測定方法中，包括直接夾層、間接夾層和競爭性ELISA測定。優(yōu)選使用直接夾層ELISA。
在競爭性測定中，首先將抗原吸入到塑料載體上，然后加入游離的(未結(jié)合)抗原(通常來自于標準溶液)，隨后加入抗體，然后孵育溶液。在孵育期結(jié)束時，洗去溶液，僅留下附著于結(jié)合抗原上的抗體并對其進行檢測。剩余抗體的濃度與樣品中的半抗原的濃度成反比。
對于非競爭性測定，使用兩個不同的抗體，每一個針對抗原上的不同表位，一個抗體將抗原結(jié)合于固體基質(zhì)，第二個用于檢測抗原并測定其濃度。在直接夾層中，可檢測的標記被直接附著于第二個抗體；而在間接夾層中，使用標記的抗-免疫球蛋白測定第二個抗體本身。
由雜交瘤細胞表達并且對標記物具有所需的特異性和選擇性的MAbs(“抗-標記MAbs”)可用于本發(fā)明的免疫檢測測定方法中。一般地，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的技術(shù)對適當?shù)碾s交瘤系進行選擇、使用這些雜交瘤系所表達的MAbs作為具體的免疫測定中的反應(yīng)物并對其進行優(yōu)化。
在以下的實施例中使用如下縮寫。L＝升；mL＝毫升；μL＝微升；g＝克，μg＝微克；M＝摩爾；mM＝毫摩爾；rpm＝轉(zhuǎn)/分；nm＝納米。KLH＝鑰孔槭血藍素；BSA＝牛血清白蛋白；OVA＝卵白蛋白；AP＝堿性磷酸酶。CFA＝完全弗氏佐劑； IFA＝“不完全”弗氏佐劑。另外，在以下的實施例中使用如下試劑。PBS13.8mMNaCl+2.7mMKCl，pH7.4。10倍PBS(10L)138mMNaCl(800g)+2.7mMKCl(20g)+4.28mMNaPO4，二堿的(dibasic)7H2O(115g)+1.46mMKPO4(20g)，pH7.2。PT(20L)10倍PBS(2L)+5％吐溫20(200ml)+水(足量)。PCT(1L)PBS(990ml)+酪蛋白(10g)+5％吐溫20(10ml)，pH7.2，組織培養(yǎng)液(1L)小牛血清(10％)+L-谷氨酰胺(1％)+2-mercapthanol(6％)+Iscove’s修飾的Dulbecco’s培養(yǎng)液(痕量)。TMB3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺(0.4g/L)在酸性緩沖液中的溶液。本段中所有的％均指體積。
實施例1免疫結(jié)合物的制備A.TNT-酶結(jié)合物(DNP-AP)的制備TNT-酶結(jié)合物通過將TNT衍生物(二硝基苯磺酸)以各種(w/w)比例加入到堿性磷酸酶中進行制備。B.PAP-PAA-蛋白結(jié)合物的制備將苯膦酸(PAA)修飾的聚合物(其中PAA用作鏈轉(zhuǎn)移劑)的丙烯酸部分用各種摩爾比的碳二亞胺激活，然后將這些激活的聚合物以各種(w/w)比例加入到載體蛋白(選于KLH，BSA，OVA或AP)中，產(chǎn)生適當?shù)腜PA-PAA-蛋白結(jié)合物。未反應(yīng)的半抗原通過用PBS充分透析去除。為了進行比較，用類似方法制備PPA-蛋白結(jié)合物。
實施例2Mabs的制備根據(jù)如下的免疫作用方法，對于各組的5只小鼠用3個月的時期注射一種實施例1B的免疫結(jié)合物。
在出生大約2個月后，將5只瑞士小鼠放血(尾靜脈放血)，合并血液測定血清。大約2周后，將0.1ml抗原(免疫結(jié)合物)在0.1mlCFA的鹽水溶液中乳化的混合物注射入各小鼠的腹腔內(nèi)。隨后以2周為間隔，將0.1ml抗原的鹽水溶液用0.1mlIFA乳化并注射入小鼠的腹腔內(nèi)，共進行大約3個月。以1個月的間隔、以及在免疫作用期結(jié)束時取血樣，以監(jiān)測抗體水平。
到免疫作用期結(jié)束時，從脾臟獲得致敏的淋巴細胞并將其與骨髓瘤細胞融合以形成雜交瘤細胞?？墒褂萌魏我环N大量的骨髓瘤細胞系，但是優(yōu)選的細胞系為P3x63Ag8.653。這些融合方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的；例如，Kearney等所記載的J.Immunol.，1231548(1979)。簡單地講，將淋巴細胞與骨髓瘤細胞在聚乙二醇的存在下結(jié)合一段時間、培養(yǎng)、檢測對抗原各部分的特異性。
實施例3檢測Mab特性使用以各種末端基團標記的聚合物進行競爭性測定。
TNT-CYS-聚合物(標記的聚合物)通過將半胱氨酸修飾的聚合物的氨基末端與TNBS反應(yīng)進行制備。未反應(yīng)的TNBS通過用Amicron微型濃縮器過濾除去。這種半胱氨酸修飾的聚合物(其中的半胱氨酸用作鏈轉(zhuǎn)移劑)由McCallum等記載，參見前。
將Immulon-2培養(yǎng)皿用純化的抗TNT MAb在0.1M碳酸鹽緩沖液(pH9.6)中的5μg/mL的溶液包被，每孔100μL，將培養(yǎng)皿在4℃下孵育過夜或在37℃下孵育1小時。孵育后，將培養(yǎng)皿用PT沖洗3次，旋轉(zhuǎn)180°，再用PT沖洗3次。此刻，加入125μL/孔PCT，于室溫下將培養(yǎng)皿在設(shè)置在120rpm的培養(yǎng)皿搖動器上孵育1小時。孵育后，將培養(yǎng)皿用PT沖洗3次，旋轉(zhuǎn)180°，再用PT沖洗3次。制備TNT-CYS-聚合物、CYS-PAA、PPA-PAA、和Acusol的不同濃度的抑制溶液，將各種抑制溶液和DNP-AP的1∶75的稀釋液同時加入孔中。然后于室溫下將培養(yǎng)皿在設(shè)置在120rpm的培養(yǎng)皿搖動器上孵育1小時。孵育后，將培養(yǎng)皿用PT沖洗3次，旋轉(zhuǎn)180°，再用PT沖洗3次。然后向各孔中加入100μL對硝基苯基磷酸鹽(PNPP)的硫酸二乙醇胺緩沖液的稀釋液。然后于室溫下將培養(yǎng)皿在設(shè)置在120rpm的培養(yǎng)皿搖動器上另外孵育15分鐘。最后，將培養(yǎng)皿在設(shè)置在405nm的熒光計上讀數(shù)。
圖1顯示該實驗的結(jié)果。圖解數(shù)據(jù)清楚地證明TNT-CYS-PAA在0.1到10μg/ml的濃度范圍下易于檢測，而相同濃度下的CYSPAA、PPA-PAA、和Acusol445N反應(yīng)微小。而且，圖1的數(shù)據(jù)顯示，至少在檢測的濃度范圍內(nèi)，在反應(yīng)性和聚合物濃度之間存在著線性關(guān)系。
權(quán)利要求
1.一種鑒別和定量水溶液系統(tǒng)中的聚合物的方法，其中至少有一部分聚合物含有選自于鏈轉(zhuǎn)移劑、引發(fā)劑(或其片段)、或連接于鏈轉(zhuǎn)移劑的基團的可檢測末端，該方法包括以下步驟a)獲得要檢測的水溶液系統(tǒng)的樣品，將該樣品與適當?shù)膯慰寺』蚨嗫寺】贵w一起孵育；并且b)檢測并測量單克隆或多克隆抗體的結(jié)合程度以鑒別聚合物并測定水溶液系統(tǒng)中的聚合的濃度。
2.權(quán)利要求1的方法，進一步包括制備適當?shù)目箍蓹z測末端的單克隆或多克隆抗體的步驟。
3.權(quán)利要求1的方法，其中的可檢測末端包括鏈轉(zhuǎn)移劑，所述鏈轉(zhuǎn)移劑選自硫醇、次膦酸、膦酸、亞磺酸、氨基硫醇、及其鹽。
4.權(quán)利要求3的方法，其中的鏈轉(zhuǎn)移劑包括氨基硫醇。
5.權(quán)利要求1的方法，其中的可檢測末端包括引發(fā)劑或引發(fā)劑片段，所述引發(fā)劑或引發(fā)劑片段選自過氧酯、二烷基過氧化物、二芳基過氧化物、氫過氧化物、和偶氮化合物。
6.權(quán)利要求1的方法，其中的可檢測末端包括連接于鏈轉(zhuǎn)移劑上的可與胺反應(yīng)的基團，且其中的鏈轉(zhuǎn)移劑包括氨基硫醇。
7.權(quán)利要求6的方法，其中的可與胺反應(yīng)的基團選自1-(二甲胺氨基)-5-萘磺酸和其鹵化物；4-二甲胺基偶氮苯-4-磺酸和其鹵化物；2，4，6-三硝基苯磺酸和其鹽；3-苯甲酰基喹啉-2-甲醛；3-(2-furfoyl)喹啉-2-甲醛；2，4-二氟硝基苯；和茚三酮。
8.權(quán)利要求1的方法，其中使用ELISA測定來檢測并測量單克隆或多克隆抗體的結(jié)合程度。
全文摘要
公開了一種使用免疫測定技術(shù)定量鑒別水溶液系統(tǒng)中的聚合物的方法，其中至少有一部分聚合物含有可檢測末端。這對水處理系統(tǒng)特別有用。還公開了表達可特異性識別該可檢測末端的MAbs的新的雜交瘤細胞系。
文檔編號G01N33/18GK1165298SQ9710227
公開日1997年11月19日 申請日期1997年1月17日 優(yōu)先權(quán)日1996年1月18日
發(fā)明者L·H·凱勒, B·溫斯坦 申請人:羅姆和哈斯公司