專利名稱：一種生物技術用于物品防偽的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物防偽技術領域，尤其涉及抗原-抗體反應用于物品防偽的方法。
目前，假冒偽造已成世界范圍內的一大公害。隨之而來，防偽制品也成為保證真品，維護消費者利益必不可少的重要措施。傳統(tǒng)的防偽標識大多是物理或化學性質的制品，如激光全息、光學變色膜、圖象擾頻、熱變油墨、磁條、智能卡、軟件鎖等等。但由于受其本身物理或化學特性的限制，這些防偽標識都有一定的局限性、易仿性和非特異性的缺點，而利用現代分子生物學所具有的特異性、難仿性和難破譯性的特點研制的防偽制品，可彌補物理方法或化學方法的不足。
眾所周知，抗原-抗體反應是生物界廣泛存在的現象，在醫(yī)學、生物學領域里已研究多年，使用廣泛。近代示蹤，標記技術也已趨成熟并廣為使用。自然界存在無法計數的抗原物質，抗原與抗體之間呈現高度的專一性反應，即特異性反應。采用自然界的天然抗原和人工制備的抗原，可以很容易地在動物體內或體外培養(yǎng)細胞中制造出抗體，純化的抗原或抗體均可加以標記，以識別相應的抗體或抗原，用肉眼可見或用儀器檢測，就像鑰匙識別鎖一樣。將這種生物物質(抗原或抗體)加于防偽物品之中或附于其表面，就可以像用已知的鑰匙去識別加密的鎖，以辯真?zhèn)?。這種技術的特點是高度專一、準確、應用廣泛、可選性強，使用方法或簡或繁，依加密目的級別而可調整。既可加于被防偽物品之中，又可附于其外，是一種不可破譯的現代生物隱形防偽技術。
在新型的生物防偽技術方面，已有EP O 327 163 A2。該專利以m-苯氧基苯甲酸(半抗原)為防偽標識物質，和蛋白質連接做成完全抗原而制成單克隆抗體。此種抗體可以加入水溶性或油溶性液體之中，即用于液相物品(標記物和被檢物均混于液相)，檢測方法是用試劑盒。檢測原理為六十年代發(fā)展起來的競爭性酶聯免疫法。本發(fā)明人等在這方面已進行了長時間的研究，并于1996年申請了“核酸密碼分析技術應用于防偽的方法”的專利(申請?zhí)?6109232.7，申請日960802)，現在為了完善和進一步發(fā)展生物防偽技術，特提出“一種生物技術用于物品防偽的方法”。本發(fā)明的方法與上述歐洲專利不同之處是采用固相物品，標記于被檢物的一定位置，檢測方法是采用八十年代發(fā)展起來的非競爭性快速斑點免疫結合反應技術(包括斑點免疫滲濾法、滴金免疫測定法、斑點免疫層析法)、致敏乳膠凝集技術、熒光素標記技術和化學熒光技術等。
本發(fā)明的目的在于，提供一種辨別真?zhèn)胃叨葴蚀_、靈敏、保密性強、難破譯和偽造、用途廣泛、技術性強和使用方便的防偽方法。
為了達到上述目的，本發(fā)明的特征在于利用抗原-抗體反應技術鑒別物品的真?zhèn)危瑢⒖乖蚩贵w及其標識物固定于固相物品上，檢測方法采用非競爭性免疫技術；使用的抗原-抗體為天然存在的或人工合成的，具有免疫原性和反應原性的蛋白質或多肽、核酸或多核苷酸、多糖或寡糖、類固醇以及類脂；抗體制備是采用單克隆抗體技術或多克隆抗體技術；所使用的非競爭性免疫技術的測定方法為免疫斑點結合測定；免疫金屬離子(金、銀)及硒的標記測定；致敏微球(人工、天然)測定；熒光素標記測定；化學發(fā)光標記測定；本防偽方法可用于下列固相物品的防偽，如文物、衣物、皮革制品、中藥、西藥、食品、保健品、香煙、化肥、農藥、種子、工藝品、汽車、摩托車、建筑材料、電器、磁盤、光盤、計算機、錄像機、攝像機、照相機、通訊器材、音響、電視機、手機、儀表、珠寶首飾、醫(yī)療器械，以及紙張、塑料和尼龍制造的文件、證件、證券、信用卡、發(fā)票、紙幣、商標、海關申報單、字畫、古董、圖書。
本防偽方法也可用于下列流體和半流體物品的防偽，如酒類、飲料、化學試劑、印泥、油墨、墨水、油類、潤滑油、化妝品、有機溶劑、保健食品、發(fā)酵食品、化肥、農藥、石油制品、生物制品、藥物制品。
本防偽方法還可用于所述固相物品、流體和半流體物品的包裝、商標、容器、瓶蓋或任何的其他附屬物。
下面，結合實施例進一步說明本發(fā)明的內容。
實施例1制備作為防偽標識的抗原。用人胎盤丙種球蛋白作防偽標識抗原，其提純方法如下取健康產婦胎盤一個，絞成肉糜，加750mL蒸餾水，懸浮組織，再加NaCl至4％，加苯酚至0.3％防腐，攪勻。浸泡過夜。在10000rpm離心30分鐘，吸出上清，棄沉淀。加等體積飽和硫酸銨，攪勻，放置1小時，離心，收集沉淀。沉淀懸于500mL蒸餾水，加明礬至10％，pH4.2，離心棄沉淀。用1N NaOH調pH 7.7-7.9。此時產生AL(OH)3膠體，過濾。澄清之濾液含丙種球蛋白，加等量飽和硫酸銨，即產生丙種球蛋白沉淀，離心，用0.01mol/L磷酸緩沖液pH7.4透析。
DEAE纖維素離子交換層析用0.01mol/L磷酸緩沖液，pH 7.4，平衡柱體，將上述粗丙種球蛋白上樣過柱，雜質吸附在柱上，丙種球蛋白不吸附，被洗脫下來，然后凍干保存。其純度可達95％以上，足以作為防偽標識用。
將蛋白質抗原稀釋后吸附在固相物體上，干燥后用物理方法(如塑料薄膜、金屬薄膜等)或化學方法(如海藻糖、明膠等)進行密封，其用量極微。每個防偽標識用0.1微克抗原足夠做檢測。
小分子半抗原本例采用半抗原皮質素-21-半琥珀酸偶聯甲狀腺球蛋白制備抗體，其方法如下取700mg皮質素-21-半琥珀酸酯，加15mL二氧六環(huán)使之溶解，然后冷卻至10℃，再加0.35mL三正丁胺和0.91mL氯甲酸異丁酯，生成混合酐，待用。另取130mL二氧六環(huán)/水(1∶1)混合液，加甲狀腺球蛋白2.5g和2.5mL 1N NaOH，在充分攪拌和冷卻下將混合酐溶液加入其中。1小時后加1mL NaOH使pH升至8.5。繼續(xù)攪拌和冷卻3小時，流水透析過夜。再用1N HCl調pH 4.5，冷卻過夜。離心，沉淀物用NaHCO3調至pH5.5，以溶解沉淀。流水透析4小時，凍干，得1.6g皮質素-21-半琥珀酸-甲狀腺球蛋白。該復合物具有很強的免疫原性，而防偽標識抗原則僅用皮質素即可。
實施例2制備防偽標識抗原的特異抗體。
將防偽標識抗原蛋白(或半抗原-大分子蛋白偶合物)5mg/mL與等體積的福氏佐劑混勻加5mg/mL卡介苗充分乳化后，注射雄性綿羊，在二側頜下淋巴結和二側腹股溝淋巴結各注射1mL。每隔10天注射一次共二次。以后每周一次，連續(xù)三次。在最后一次注射后一周，采少量血，制成血清，以測定抗體效價。
抗體效價測定方法用雙向免疫擴散法，具體操作如下。用0.5μ巴比妥緩沖液(pH8.6)配制1％瓊脂糖凝膠，在微波爐中令其融化。當融化的瓊脂糖凝膠溫度降至50-55℃時，傾倒在水平放置的載玻片上，室溫放置15分鐘，4℃放置10分鐘。用直徑3mm的打孔器在玻片中央打一孔。圍繞中心孔周圍5mm距離延圓周方向打5-6個孔。將作為防偽標識的抗原配制100μg/mL濃度的水溶液，取10μL加在中心孔中，羊抗血清成倍稀釋，如1∶2，1∶4，1∶16，1∶32，1∶64，各取10μL加在周圍的孔中。加樣后在濕潤的環(huán)境中37℃保溫過夜。檢查抗原孔與抗體孔之間出現的白色沉淀線。如能在1∶32和1∶64孔出現沉淀線，該抗體作為防偽標識的鑒定效果極佳。
當抗體滴度超過1∶32時，可以從免疫效價高的羊進行抗血清制取，方法是從頸動脈抽血。血液先置室溫凝固30分鐘，再放37℃溫箱1小時，最后放4℃冰箱以使血塊收縮凝固。用玻棒將血塊輕輕剝離，收集血清并在5000g4℃離心20分鐘。剝離的血塊攪碎，再置4℃過夜，再次離心，吸取血清。抗血清制成后加0.02％NaN3，在-20℃凍存，供進一步純化IgG及標化用。
實施例3抗體致敏乳膠凝集法檢測防偽標識。
制備作為防偽標識的抗原蛋白或多肽的抗體γ-球蛋白(主要含IgG)或F(ab)2片段。將抗血清與等體積的飽和硫酸銨滴加混合，冰箱過夜。次日在1000rpm冷凍離心，沉淀為γ-球蛋白，溶于生理鹽水，透析后進行DEAE-52離子交換層析，用0.01M磷酸緩沖液(pH＝7.4)洗脫IgG，即可得到其純品。
制備F(ab)2將純化的IgG用胃蛋白酶水解，然后通過Sephadex G-75柱，用0.1mol/LpH8.0硼酸緩沖液洗脫，收集第一峰，得F(ab)2。
制備致敏乳膠取聚苯乙烯乳膠(直徑0.8μm)，用緩沖液洗滌后加提純的IgG或F(ab)2，置37℃反應1小時。離心充分洗滌致敏乳膠，最后懸浮于含1％牛血清白蛋白的0.01mol/L甘氨酸氯化鈉緩沖液(GBS)中(pH＝9.2)。每毫升乳膠致敏后懸于30mL GBS，置4℃?zhèn)溆谩?br> 將含有某種特定抗原的隱形防偽標識取下，用幾滴生理鹽水浸泡數分鐘，將防偽標識中的抗原溶解下來，然后取一滴，點在黑色玻璃板小凹槽內(直徑30mm)，加一滴60％聚乙二醇6000-GBS，最后加一滴致敏乳膠，混勻。同時做一份標準的特定抗原作陽性對照，15分鐘后可用肉眼觀察到在黑色玻璃板背景下，出現清晰的白色凝集顆粒，與標準抗原凝集現象相似。即可判定在防偽標識中存在某種抗原，能與該抗原的抗體所致敏的乳膠反應，形成凝集作用。如防偽標識不存在該種抗原，則不出現白色凝集顆粒，反應液體呈清涼透明既可判定檢測樣屬偽品。如果將上述防偽標識抗原與致敏乳膠的凝集反應置于96孔板中進行，則可以通過自動比濁分析儀進行快速分析記錄。與本法所述化學乳膠凝集技術原理類似，也可用抗體致敏的脂質體、紅血球或明膠顆粒進行凝集試驗檢定防偽標識中的特定抗原，達到辨?zhèn)巫R真的目的。在實用上，化學乳膠顆粒可以吸附在濾紙或薄膜上，進行固相檢測，更為方便。
實施例4快速斑點免疫結合法檢測防偽標識。
NC膜預包被將硝酸纖維素膜(NC，0.22μm至0.45μm)用鉛筆劃出3mm×3mm小格，再浸于0.01mol/L磷酸緩沖液-生理鹽水(PBS)pH＝7.4中30分鐘。然后取出NC膜，用濾紙吸干，在每一小格中加稀釋液的特定的多克隆抗體(或單克隆抗體)2微升，室溫干燥后浸入含15％小牛血清-0.05％吐溫-20的PBS中，43℃作用1.5小時，再用PBS洗3次，自然干燥后密封于塑料袋中，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 將防偽標識上的特定抗原用一滴生理鹽水浸泡數分鐘，以洗脫防偽標識上的抗原。
取2μL已洗脫的防偽標識抗原，和2μL已知標準抗原分別加于有抗體的NC膜不同小格中央，37℃反應10分鐘，PBS洗3次，再將NC膜浸于稀釋的辣根過氧化物酶標記的第二抗體溶液中，37℃反應10分鐘，再用前述含小牛血清和吐溫的PBS充分洗滌。
將上述洗滌的NC膜浸入3，3-二氨基聯苯胺底物溶液中再用流水沖洗NC膜。即可根據NC膜小格中央的顏色判定檢測結果與標準抗原相似有深棕色斑塊的為陽性，表明隱性防偽標識中存在待測的特異抗原物質，所標識的物件為真品。若在小格中央仍為白色而無顏色出現，即可鑒別被檢物為贗品。
與本法相關或相似以免疫斑點檢定技術均可包括在本實施例子。如用堿性磷酸酶代替辣根過氧化物酶進行顯色呈現黃色斑點，也可用β-半乳糖苷酶和脲酶代替進行顯色反應；斑點酶聯免疫吸附測定，先將待測防偽抗原點在NC膜上，經BSA封閉，洗凈后，加酶標單克隆抗體反應，再用底物顯色；所用NC膜也可用尼龍膜代替。
本法也可采用近年來發(fā)展的“斑點免疫滲濾法＂或稱＂免疫濃縮法＂進行，其本質均是以微孔薄膜作為載體，利用微孔膜的過濾作用和毛細管作用，使抗體，抗原溶液在滲濾過程中吸附在膜上，多余的水分被膜下吸水墊料吸走，故可在幾分鐘內即可用肉眼觀察結果。
實施例5快速金銀標記免疫斑點技術檢測防偽標識。
制備特定防偽抗原的相應抗體抗血清產生參見實施例1。所得抗血清經50％飽和硫酸銨鹽析，透析等步驟，獲得純凈的γ-球蛋白。
膠體金溶液的制備(檸檬酸還原法)取0.01％氯金酸(HAuCl4.H2O，光譜純，上海試劑一廠)水溶液100mL，加熱至沸騰，在磁力攪拌下迅速加入1％檸檬酸三鈉水溶液1mL，約2分鐘后呈藍紫色，繼續(xù)加熱至變?yōu)槌燃t色為止，冷卻后恢復到原體積，可獲φ＝30nm顆粒的膠體金溶液。以0.1M K2CO3調pH至5.8。
金標記抗體復合物的制備將所需量的純化抗體γ-球蛋白及膠體金(pH調至5.8)在室溫下磁力攪拌混合5分鐘，后加入1％PEG(MW＝20000)使最終濃度為0.05％，即成粗制膠體金結合物。在12000rpm，4℃離心45-60’，沉淀用50mMPBS(pH7.4)洗3次，最后沉淀用含0.1％NaN3和BSA及PEG的PBS(pH7.4)懸浮至A520nm值約2.5的濃度，最后用Sephacryl-S-300柱層析獲純化的金標抗體。
將硝酸纖維素微孔濾膜用鉛筆劃出小方格，然后浸入0.01mol/L的PBS(pH7.4)溶液中，30分鐘后取出，用濾紙吸干多余水分，在小方格中央點4μL按1∶5稀釋的步驟1所純化的γ-球蛋白，干燥后用1％的BSA在37℃封閉兩小時，Tris緩沖液(pH8.0，含0.05％吐溫-20)洗3次，每次10分鐘。濾紙吸干后，將防偽標識抗原樣品用1滴生理鹽水溶解后取25μL點于濾膜小方格中央，待完全吸干后，靜置10分鐘，再在樣品的同一位置點上25μL金標試劑，37℃反應10分鐘，最后用0.05mol/LPBS(pH7.4，含0.35％吐溫-20)洗滌2次，每次2分鐘。含防偽標識抗原的真品顯出粉紅色，不含防偽標識抗原的樣品仍為白色，是為贗品。
實施例6免疫熒光染色技術用于防偽標識檢定。
許多熒光素都可用來標記抗體或蛋白A(或蛋白G)檢測防偽標識中的抗原。這些熒光物質包括異硫氰酸熒光素(FITC，綠色熒光)；異硫氰酸四乙荃羅丹明(RBITC，桔紅色熒光)；藻紅素(紅色熒光)和香豆素(藍色熒光)。本例提供RBITC的標記抗體和檢測防偽抗原的方法如下。①.取純化的γ-球蛋白，用0.005mol/L PBS配制成2％濃度。加入0.2mol/LNa2HCO3溶液，使pH至8.0。稱γ-球蛋白總量1/40的RFITC，總蛋白1/20體積的二甲醛甲酰胺，攪拌下逐滴加入球蛋白溶液中，同時用0.1N NaOH調pH使其維持在9.0-9.5之間。室溫攪拌1-2小時。用SephadexG 50層析柱去除游離的RBITC。第一峰為RBITC結合的抗體，收集。分裝，-70℃凍存。將防偽標識抗原用數滴生理鹽水浸洗下來，然后取10微升點于硝酸纖維素膜上，待充分干燥后，用實施例4中的封閉液封閉，再將濾紙浸入RBITC標記γ-球蛋白的溶液(10μg/mL)中，37℃保溫1小時，用PBS充分洗滌后用X底片曝光。含防偽抗原的樣品應有感光斑點。
實施例7免疫化學發(fā)光檢測防偽標識。
用生理鹽水50微升從防偽標識上洗脫防偽抗原蛋白。取上述樣品10微升(含至少10微微克抗原)點在NC膜上，令其自然干燥。用緩沖液A(含0.1mol/L Tris，pH7.5和0.1mol/L NaCl)配制2％脫脂奶粉，取5ml在室溫處理NC膜60分鐘，以封閉NC膜上非特異的結合位點。加新配制的1∶1000稀釋的防偽抗原的抗血清1ml，在室溫輕搖保溫和60分鐘，再用緩沖液A漂洗三次，每次5ml及15分鐘。傾去抗血清溶液，加新稀釋(1∶5000)的第二抗體-堿性磷酸酶偶合物1ml，室溫輕搖30分鐘。傾去第二抗體溶液，用上述緩沖液A漂洗NC膜三次，每次15分鐘。用5ml緩沖液B(含0.1mol/L Tris，pH9.5，0.1mol/L NaCl和50mmol/L MgCl2)平衡NC膜2分鐘。將NC膜置于疏水的塑料硬透明膜上，加0.5ml發(fā)光試劑CSPD溶液(以能復蓋整個膜為準)，再小心復蓋另一張塑料硬透明膜，室溫放2分鐘。然后從膜上壓擠出多余的發(fā)光試劑，揭去透明膜，用保鮮膜復蓋NC膜，在暗室中壓X光片，曝光20～30分鐘。沖片后，在含防偽標識的樣品上可以觀察到曝光的黑斑信號。偽品無曝光的黑斑信號。
實施例8抗原-抗體反應用于服裝刷品和標簽作為防偽標識物。
例(1)、將抗原裝入一軟聚酯囊中。此包囊造形及外表面顏色精美。內裝抗原無毒、無害、耐溫變、無污跡、易清洗、耐磨損。將抗體及其標記物印制在服裝品牌標簽上。外裝以透明聚酯小袋，標牌縫于衣褲上。檢驗時撕去品牌的聚酯小袋。將裝有抗原的小囊自衣服的飾鏈取下，擰開上口，滴于標牌指定位置上。標牌顯示圖案或數字，消費者自辨真?zhèn)巍?br> 例(2)、將抗體裝入另一飾物。將裝抗原的小囊液體滴于裝抗體的飾物指定位置，飾物顯示圖案。
方法制備抗原。制備軟囊。制備含有抗原的軟囊飾物。將軟囊飾物掛于適當部位如拉鏈的持手。制備印有抗體及其標記物的品牌。將(4)縫于衣服上。將軟囊取下，擰開上蓋，將含有抗原的液體滴加在涂有抗體的品牌飾物的適當位置，飾物顯示圖案。抗原、抗體及標記物顯示的圖案、編號；顯示的顏色、品牌及裝抗原的軟囊，隨產品批號多變?？乖⒖贵w、飾品及其標記物，由國家有關監(jiān)督部門用儀器實行高級技術監(jiān)督，抽樣追蹤商品及其防偽標識是否被仿造。


圖1A為牛仔褲，后兜蓋上有拉鏈的示意圖，其中裝有抗原的軟囊1；圖1B為裝有抗原的軟囊(放大)的示意圖，其中有拉鏈1、螺口栓2、抗原3；圖1C為品牌示意圖，其中有聚酯套1、空圈2；圖1D為翻折開的品牌的示意圖，其中有印有抗體及標記物圖案1；圖1E為放大的圖案示意圖，其中有滴加抗原后顯示數字及字母隨批號可變，滴加抗原后顯示2正品、中國制造；圖2A為塑料制的、有夾層的頭型飾品標牌的示意圖，其中有鉤環(huán)1、顯色2、試驗3、夾層4、抗原滴加孔紅色5、外層圖案6、對照7、上層8；圖2B為下層的示意圖，其中有印涂抗體及標記物部分1、硝酸纖維膜(Y型)2；圖2C為下層貼面，貼有硝酸纖維膜部分(虛線部分)的示意圖，其中有硝酸纖維膜1、濾紙層2、厚紙層3。
實施例9激光、抗原-抗體反應在商標防偽中的應用。
設計一種商標，由三層薄膜構成。第一層為激光防偽薄膜，帶有多種激光加密特征。第二層為涂有抗原的硝酸纖維薄膜，表面印刷有文字或符號，但抗原隱蔽。檢驗時揭去第一層，暴露印有文字符號的第二層。在第二層上滴加抗原洗脫液，將抗原洗脫下來，并滲入第三層，第三層上印有標記抗體。當第三層的標記抗體與第二層抗原反應時，經免疫化學發(fā)色反應，顯示圖案。各層圖案按商品批號多變。
制備方法制備粘合劑。制備激光印刷、防偽標簽(第一層)。制備浸有抗原的硝酸纖維薄膜，表面印刷文字符號，符號含有加密內涵。制備與3條中的抗原呈特異性反應的抗體及其標記物。標記物質在抗原抗體反應時顯色。抗體及其標記物印跡時按加密要求成特殊圖案或編號。將上述三層用粘合劑粘合。
應用方法如下在特殊波長下識別第一層激光防偽圖案，為第一步防偽。揭去第一層，在第二層上顯示特殊加密符號，為第二步防偽。在第二層上滴加抗原洗脫液或將此薄膜(含有第二、第三層)浸入抗原洗脫液中，經過一定時間。揭去第二層，在第三層上顯有特殊圖案及符號。為第三步防偽。上述全部材料及文字符號、編碼圖案，均需在制造者及監(jiān)督部門登記保存，以備追蹤。第二層與第三層的抗原、抗體及標記物均應受技術監(jiān)督部門管理，并用特殊儀器如酶標儀等，抽樣監(jiān)測。以保證商品及防偽標記不受偽造。
圖3A為商標標簽，由三層薄膜粘合而成的商標標簽示意圖；圖3B為第一層有激光圖象的示意圖；圖3C為印刷符號(肉眼可見)的示意圖，其中有第一層背面1、第二層正面2、第二層硝酸纖維膜3，印跡有抗原，肉眼不可見；圖3D為浸入抗原洗脫液的示意圖，其中有第一層背面1；圖3E為滴加抗原洗脫液于第二層正面的示意圖；圖3F為揭去第二層顯示圖案的示意圖，其中有第一層1、第二層2。
實施例10抗原-抗體反應用于密封簽的方法。
除無第一層激光防偽薄膜外，其余均與實施例8相同。
實施例11抗原-抗體反應在珍貴字畫、重要印刷品、有價證券、單據、貨幣中防偽的應用。
珍貴字畫、重要印刷品，有價證券、貨幣、報單等，可利用抗原-抗體反應的高度特異性和多樣性加密防偽。將特制的抗原加于油墨、顏料、墨汁中。在上述需防偽的物品印刷或繪制、書寫過程中，標識在一定部位上。需要檢查時，可用一種薄膜蓋在采樣部位上，用抗原洗脫劑浸潤此種薄膜，將抗原轉印在取樣薄膜上，以保存被檢商品的完整性。將取樣薄膜剪碎，再浸于抗原洗脫液，必要時予以濃縮。利用固相標記的抗體檢測卡，浸于被檢抗原洗脫液中，抗原與標記抗體相反應，則可顯色或呈現圖案。
也可以用其它免疫化學技術標記抗體，用酶標儀、生物發(fā)光計檢測。
為提高檢測靈敏度，還可以用生物擴大反應的方法，如生物素標記，地高辛標記、葡萄球菌蛋白A等，提高檢出率。或用免疫組織學方法，用免疫光鏡或電鏡檢查。
方法如下制備抗原，摻入印刷油墨，染料或專用墨汁之中。制備抗體檢測卡，由抗體及其標記物組成。將含有抗原的染料書寫或繪畫到需加密的文物或印刷品上。取樣時用印跡轉移法將抗原轉到另一載體上。進一步溶解抗原檢測抗原用檢測卡法、特殊儀器法或免疫組化形態(tài)學(光學或電子顯微鏡法)依檢測級別和需要而定。上述制備的抗原、抗體及其標記物混有特殊抗原的油墨、印泥、顏料、墨汁及所書寫、繪制的文件。畫面與印刷品均需編號備案，并保存使用的材料，以備生產者、技術監(jiān)督部門核查、追蹤。根據需要和檢測級別，可用儀器檢查。
圖4A為圖章的示意圖；圖4B為在印泥中沾涂的示意圖；圖4C為加蓋于書畫的示意圖；圖4D為印跡(抗原)轉移的示意圖，其中有浸有抗原洗脫液的薄膜1；圖4E為印跡轉移后的示意圖；圖4F為破碎的示意圖；圖4G為裝入抗原洗脫液洗脫的示意圖；圖4H為離心，上層液轉至另一管的示意圖；圖4I為用鑷子夾持檢測卡浸入抗原液檢測卡印有抗體及標記物的示意圖；圖4J為檢測卡顯示線條，證明抗原真?zhèn)蔚氖疽鈭D，其中有對照抗原線1、被測抗原線2；圖4K為偽品，不含有抗原或含有抗體無特異反應的抗原不顯色的示意圖，其中有對照抗原線(+)1、被測抗原線(-)2。
實施例12酒類及飲品的抗原-抗體防偽。
將按食品法規(guī)規(guī)定的食品添加劑，如寡糖、核酸、核苷酸、多肽等，按允許濃度加入酒類或其它飲品。添加后質量穩(wěn)定。不影響抗原的反應原性。制備出相應的抗體及其標記物。在包裝物(如瓶蓋墊紙)上涂布抗體及其標記物。飲用該飲品前從瓶或罐中滴加一滴被檢品于仰置的瓶蓋中。飲液中的抗原與蓋中墊紙上的抗體立即發(fā)生反應，顯示顏色和圖案，消費者迅速自行辨別真?zhèn)巍?br> 方法如下選擇適用添加劑，如寡糖、核酸、核苷酸、多肽、肽糖，作為加密物。免疫動物制備抗體，純化抗體。制備抗體標記物，如膠體金、膠體硒、乳膠顆粒、包被第一抗體。將標記物及抗體固相化印跡于硝酸纖維膜，并印成一定圖案。印跡的圖案、形狀、顏色隨產品批號多變。所添加的抗原樣品、抗體及標記物樣品均由生產者質量監(jiān)督部門及各級技術監(jiān)督部門登記、留存。所使用的抗原(添加劑)、抗體及其標記物由國家有關監(jiān)督部門用儀器(酶標儀、實行高級技術檢測，抽樣追蹤商品及其防偽標記是否被偽造。
圖5A為瓶蓋示意圖；圖5B倒置的蓋的示意圖；圖5C為放大倒置蓋的剖面圖，其中有硝酸纖維膜2、防水紙層3、厚紙或軟木層4、濾紙層；圖5D為現色圖案之一的俯視圖，其中有紅1、蘭2、紅3、蘭4；圖5E為現色圖案之二的俯視圖，其中有紅1、綠2、蘭3；圖5F為現色圖案之三的俯視圖。
用法如下打開瓶蓋，滴加一滴瓶中液體，靜置。然后觀察。
綜上所述，本發(fā)明效果如下依據的原理充實、可信，沿用年久，使用廣泛；辨別真?zhèn)胃叨葴蚀_，靈敏，保密性極強，難破譯和偽造；適用的商品廣泛；應用的是最先進的免疫學技術，方法成熟，使用方便。
權利要求
1.一種生物防偽技術用于物品防偽的方法，其特征在于，利用抗原-抗體反應技術鑒別物品的真?zhèn)危瑢⒖乖蚩贵w及其標識物固定于固相物品或流體和半流體物品上，檢測方法采用非競爭性免疫技術。
2.根據權利要求1所述的防偽方法，其特征在于所使用的抗原為天然存在或人工合成的，具有免疫原性的蛋白質或多肽、核酸或核苷酸、多糖或寡糖以及類脂。
3.根據權利要求1所述的防偽方法，其特征在于抗體制備是采用單克隆抗體技術或多克隆抗體技術。
4.根據權利要求1所述的防偽方法，其特征在于所使用的非競爭性免疫技術的檢測方法為免疫斑點結合測定；免疫金屬離子(金、銀)及硒的標記測定；致敏微球(人工、天然)測定；熒光素標記測定；化學發(fā)光標記測定。
5.根據權利要求1、2、3或4所述的防偽方法，其特征在于所述的固相物品為文物、珠寶、首飾、衣物、皮革制品、藥品、食品、保健品、香煙、化肥、農藥、種子、工藝品、汽車、摩托車、建筑材料、光盤、磁盤、計算機、錄像機、攝像機、錄音機、照相機、音響、電視機、通訊器材、儀表、醫(yī)療器械以及各種紙張、塑料或尼龍制造的文件、證件、證券、信用卡、發(fā)票、紙幣、商標、海關申報單、字畫、古董、圖書。
6.如權利要求1所述的防偽方法，其特征在于所述的流體和半流體物品為酒類飲料、化學試劑、印泥、油墨、墨水、油類、潤滑油、化妝品、有機溶劑、保健食品、發(fā)酵制品、化肥、農藥、石油制品、生物制劑、藥物制劑。
7.如權利要求5或6所述的防偽方法，其特征在于所述的固相物品或流體和半流體物品還包括物品的包裝、商標、容器、瓶蓋或任何形式的其他附屬物。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物防偽技術領域，尤其涉及將固相抗原-抗體反應和非競爭性檢測技術用于固相物品或流體和半流體物品防偽的方法?？乖瓰樘烊淮嬖诨蛉斯ず铣傻?，具有免疫原性和/或反應原性的蛋白質或多肽、核酸或核苷酸、多糖或寡糖以及類脂。抗體由單克隆或多克隆技術制備。標記方法采用的是金標、硒標和酶標等技術。由于抗原-抗體反應所具有的特異性和難仿性，故難以模仿和假冒。該法主要用于任何形狀物品的外部標識，也可用于物品之中。
文檔編號G01N33/00GK1163399SQ97103930
公開日1997年10月29日 申請日期1997年4月16日 優(yōu)先權日1997年4月16日
發(fā)明者郭興華 申請人:郭興華