專利名稱：血清低密度脂蛋白測(cè)定試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生化技術(shù)及生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，特別是臨床醫(yī)學(xué)體外診斷及臨床心血管疾病的診斷。
LDL是致動(dòng)脈粥樣硬化因子，LDL增多說(shuō)明具有促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成的作用。LDL是由血漿中VLDL轉(zhuǎn)變而來(lái)的，其功能是由肝將膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到全身各組織細(xì)胞的主要形式，故與高膽固醇血癥的形成密切相關(guān)。測(cè)定LDL臨床常采用Friedewald公式計(jì)算，聚乙烯硫酸沉淀法，電泳法測(cè)定血清低密度脂蛋白(Low densitylipoprotein，LDL)，前者是間接計(jì)算出LDL水平，影響因素多，誤差大；聚乙烯硫酸沉淀法盡管為日常工作中常用方法，但麻煩，誤差大；電泳法不適合在常規(guī)工作中開(kāi)展。臨床檢驗(yàn)中需要一種直接測(cè)定LDL水平的方法。
本發(fā)明的目的是提供一種直接測(cè)定血清LDL的檢測(cè)試劑和使用該試劑之檢測(cè)方法，使其具有不需對(duì)樣品作沉淀、分離操作，簡(jiǎn)便、快捷、價(jià)廉、分析能力強(qiáng)，比沉淀法方便，比采用公式法計(jì)算簡(jiǎn)便，而且準(zhǔn)確度高、精確度好等優(yōu)點(diǎn)，更適于臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的需要。此外，本發(fā)明試劑還適于在自動(dòng)化儀器上操作，可提高分析方法的特異性，消除干擾物影響，提高準(zhǔn)確性。
本發(fā)明檢測(cè)試劑及檢測(cè)方法的原理是聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚(POE-POP copolyether)可阻止血清中HDL、極低密度脂蛋白(VLDL)、乳糜粒(CM)與膽固醇氧化酶(COD)、膽固醇酯酶(CEH)接觸(催化)；而LDL能自由和COD，CEH接觸而催化。LDL在膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶作用下，生成4-膽甾-3-烯酮和H2O2，H2O2在過(guò)氧化物酶作用下與4-氨基安替比啉(4-APP)、二氯苯酚(DCP)反應(yīng)，生成紅色的醌類化合物，利用比色分析原理即可求出樣品中LDL含量。
本發(fā)明提供的血清低密度脂蛋白測(cè)定試劑，包括由α-磺化環(huán)狀糊精、硫酸葡聚糖、MgCl2、N-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺、3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液組成的試劑Ⅰ，和由膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過(guò)氧化物酶、4-氨基安替比啉、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚、3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液組成的試劑Ⅱ。試劑Ⅰ、試劑Ⅱ中各組分含量分別為試劑Ⅰ(每升試劑中各組分含量)α-磺化環(huán)狀糊精 0．1-2．0mmol，硫酸葡聚糖 0．1-1．0g，MgCl21-3mmol二氯苯酚 40-60mmolN-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺 1-4mmol3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液 30-70mmol試劑Ⅱ(每升試劑中各組分含量)膽固醇酯酶 0．5-5．0ku，膽固醇氧化酶 1-10ku，過(guò)氧化物酶 10-100ku，4-氨基安替比林 1-5．0mmol聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚 1-10g3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液 30-70mmolLDL增高是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險(xiǎn)因素。過(guò)去只測(cè)TC估計(jì)LDL水平，但TC水平也受HDL水平的影響，故目前主張最好采用LDL代替TC作為動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的危險(xiǎn)因素指標(biāo)。
與現(xiàn)有技術(shù)方法相比較，本發(fā)明提供的試劑及檢測(cè)方法操作方便，不需分離脂蛋白各組分，直接測(cè)定樣本中LDL含量，準(zhǔn)確度、精密度、特殊性及實(shí)用性好，應(yīng)用本發(fā)明檢測(cè)試劑檢測(cè)，其回收率可達(dá)98-102％，精確度達(dá)日內(nèi)cv為0．5-1．0％，日間cv為1．2-2．0％；而現(xiàn)行沉淀法之回收率僅為90-110％，精確度則為日內(nèi)cv為0．8-1．5％。日間cv為2-4％；本發(fā)明還適用于自動(dòng)生化分析儀。本發(fā)明試劑可制成凍干品，適于保存和運(yùn)輸。
膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品的配制膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品(100mg／dL)購(gòu)于Sigma公司，將所需膽固醇溶于10mmol／L Nacl溶液中，加入1‰疊氮鈉作穩(wěn)定劑，以每安瓿中加2．0ml上述標(biāo)準(zhǔn)品，制成凍千品，使用前加2．0ml純水復(fù)溶，放置20分鐘后使用3．計(jì)算及正常值血清低密度脂蛋白
正常值＜3．36mmol／l
4．標(biāo)準(zhǔn)曲線本發(fā)明實(shí)施例標(biāo)準(zhǔn)曲線載于說(shuō)明書附圖
，是在法國(guó)Palcor全自動(dòng)生化分析儀中測(cè)定所作。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件，可選用手工測(cè)定或全自動(dòng)生化分析儀，修改實(shí)驗(yàn)參數(shù)使試劑Ⅰ∶試劑Ⅱ∶樣本=20∶4∶5；．血清VLDL很高時(shí)，有時(shí)結(jié)果會(huì)偏低。故在血清嚴(yán)重混濁時(shí)，可將血清稀釋一倍后測(cè)定。
權(quán)利要求
1．一種血清低密度脂蛋白測(cè)定試劑，包括由α-磺化環(huán)狀糊精、硫酸葡聚糖、二氯苯酚、MgCl2、N-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺、3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液組成的試劑Ⅰ，和由膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、過(guò)氧化物酶、4-氨基安替比啉、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚、3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液組成的試劑Ⅱ。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清低密度脂蛋白測(cè)定試劑，其特征是在所述的試劑Ⅰ、試劑Ⅱ中各組分的含量是(1)每升試劑Ⅰ中各組分含量為α-磁化環(huán)狀糊精 0．1-2．0mmol，硫酸葡聚糖 0．1-1．0g,MgCl21-3mmol二氯苯酚 40-60mmolN-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺 1-4mmol3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液 30-70mmol(2)每升試劑Ⅱ中各組分含量膽固醇酯酶 0．5-5．0ku，膽固醇氧化酶 1-10ku，過(guò)氧化物酶 10-100ku，4-氨基安替比啉 1-5．0mmol聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚 1-10g3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液 30-70mmol
3．根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的血清低密度脂蛋白測(cè)定試劑，其特征是在所說(shuō)的試劑Ⅰ、試劑Ⅱ中各組分的含量為(1)每升試劑Ⅰ中各組分含量α-磺化環(huán)狀糊精 0．5mmol，硫酸葡聚糖 0．5g，MgCl22．0mmol二氯苯酚 35mmolN-乙基-N-(3-甲苯基)-N′-琥珀酰乙烯二胺 1．4mmol3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液 50mmol(2)每升試劑Ⅱ中各組分含量膽固醇酯酶 1ku，膽固醇氧化酶 3ku，過(guò)氧化物酶 30ku，4-氨基安替比啉 2．5mmol聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚 4g3-[N-嗎啡啉]-2-羥丙基磺酸緩沖液 50mmol
4．一種血清低密度脂蛋白測(cè)定方法，其特征在于使用了權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的血清低密度脂蛋白測(cè)定試劑。
全文摘要
一種血清低密度脂蛋白測(cè)定試劑,包括由α－磺化環(huán)狀糊精、硫酸葡聚糖、MgCl
文檔編號(hào)G01N33/52GK1281981SQ9911656
公開(kāi)日2001年1月31日 申請(qǐng)日期1999年7月26日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月26日
發(fā)明者艾學(xué)蛟, 鄒光楣 申請(qǐng)人:武漢?？爽斏锛夹g(shù)有限公司