專(zhuān)利名稱(chēng)：：測(cè)定抗體的方法及抗體測(cè)定裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及檢測(cè)或定量樣品中抗體的方法，更具體地說(shuō)，涉及這樣一種方法，通過(guò)它可以高度準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便和特異性良好地檢測(cè)或測(cè)定出抗臨床體液樣品，特別是尿樣中存在的感染源(例如細(xì)菌和病毒)的抗體。另一方面，本發(fā)明涉及檢測(cè)或定量樣品中抗體的裝置，更具體地說(shuō)，涉及這樣的裝置，利用它可以高度準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便和特異性良好地檢測(cè)或測(cè)定抗臨床體液樣品，特別是尿樣中存在的感染源(例如細(xì)菌和病毒)的抗體。本發(fā)明還涉及抗體測(cè)定試劑盒，它在上述抗體測(cè)定方法中以及利用所述抗體檢測(cè)裝置的分析方法中有用。
背景技術(shù)：
：對(duì)可能存在于體液中的對(duì)多種感染源(病原體)例如細(xì)菌和病毒具有特異性的抗體的檢測(cè)是一種診斷感染的有用的間接方法。因此，通過(guò)利用病原體或病原體成分作為分析抗原而設(shè)計(jì)的檢測(cè)抗體的免疫測(cè)定技術(shù)和裝置，迄今已經(jīng)在廣泛的診斷領(lǐng)域得以應(yīng)用。這種利用病原體或其成分作為分析抗原的免疫分析法在便捷地建立起必需的分析系統(tǒng)方面具有優(yōu)越性，但是在靈敏度和特異性方面不令人完全滿(mǎn)意，因此存在改進(jìn)的余地。作為用于進(jìn)行免疫測(cè)定的免疫測(cè)定裝置，可以提及的有一種由多孔材料構(gòu)成的條帶，在其上可以進(jìn)行結(jié)合測(cè)定(抗原-抗體反應(yīng))。這種類(lèi)型的分析裝置利用了多孔基質(zhì)所具有的毛細(xì)管性質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，也就是說(shuō)，點(diǎn)樣于多孔條帶一端的體液可以向另一端遷移。因此，當(dāng)含有待測(cè)物質(zhì)的測(cè)試樣品(液體)在承載有以既定位置連續(xù)分布的各種試劑的條帶的一端點(diǎn)樣后，樣品通過(guò)毛細(xì)管作用沿條帶遷移，然后與那些在所述位置上連續(xù)分布的試劑相遇，隨后發(fā)生反應(yīng)?？梢源_定待測(cè)物質(zhì)的存在，并且可以通過(guò)檢測(cè)來(lái)源于包含在配體-受體偶聯(lián)系統(tǒng)中的可檢測(cè)標(biāo)記的信號(hào)來(lái)確定該物質(zhì)的量。應(yīng)用上述原理的免疫測(cè)定技術(shù)通常被稱(chēng)為免疫毛細(xì)管測(cè)定法或免疫色譜測(cè)定法，該技術(shù)已在WO87/02774、EP0306772以及其他出版物中有描述。至于對(duì)該技術(shù)的改進(jìn)，可以提及在日本未審查專(zhuān)利公開(kāi)文件NO.63865/1989、日本未審查專(zhuān)利公開(kāi)文件NO.299464/1989和日本未審查專(zhuān)利公開(kāi)文件NO.167497/1994中描述的發(fā)明。上述裝置的優(yōu)點(diǎn)在于不需要專(zhuān)門(mén)的檢測(cè)設(shè)備以及可以容易地完成測(cè)定，但在靈敏性和特異性方面還存在改進(jìn)的余地。另外，因?yàn)樵撗b置僅能進(jìn)行單項(xiàng)測(cè)試，不能夠平行測(cè)定陰性或陽(yáng)性對(duì)照樣品，所以，存在不能夠判斷該結(jié)果是否是由適當(dāng)檢測(cè)產(chǎn)生的可靠數(shù)據(jù)這一缺陷。通常說(shuō)來(lái)，體液中尿和唾液用作臨床試驗(yàn)樣品為最佳，因?yàn)樗氖占恍枰秩胄猿绦颍⑶冶妊獦雍?jiǎn)便安全。然而，通常這些樣品中存在的抗體濃度非常低，例如是血樣濃度的千分之一到萬(wàn)分之一。另外，從攝入大量水的受試者體內(nèi)收集到的尿樣非常稀薄，結(jié)果，導(dǎo)致樣品間抗體滴度的不可避免的巨大差異。在這種情況下，利用上述常規(guī)測(cè)定裝置，當(dāng)樣品太稀薄而不能檢測(cè)到抗體時(shí)，試驗(yàn)將為陰性，以至于產(chǎn)生這樣的問(wèn)題，即由于低濃度樣品的出現(xiàn)導(dǎo)致“真正陰性”病例不能從“陰性(假陰性)”病例中區(qū)別出來(lái)的。而且，當(dāng)對(duì)抗體貧乏的樣品進(jìn)行測(cè)試時(shí)，需要高度靈敏的分析系統(tǒng)，但在這種情況下存在這樣的問(wèn)題，即由于樣品中的污染物導(dǎo)致的非特異性反應(yīng)形成的副產(chǎn)物易于同時(shí)被檢測(cè)，從而給出假陽(yáng)性結(jié)果。因此，需要一種能夠確保足夠的高度檢測(cè)靈敏度的抗體分析系統(tǒng)，特別是在尿和唾液這類(lèi)體液作為樣品時(shí)，也就是說(shuō)，需要一種由于高度特異性而使假陰性和假陽(yáng)性試驗(yàn)機(jī)率降低的可靠分析系統(tǒng)。本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種抗體分析技術(shù)(抗體測(cè)定方法和抗體測(cè)定裝置)，它能夠高度靈敏和高度特異地檢測(cè)抗存在于試驗(yàn)樣品例如體液中感染源的抗體。本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種抗體分析方法，它能夠通過(guò)抑制樣品中污染物引起的“假陽(yáng)性”反應(yīng)，進(jìn)行高度準(zhǔn)確地測(cè)定，甚至當(dāng)樣品是目標(biāo)抗體相對(duì)較貧乏的尿或其它體液時(shí)。本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種抗體分析方法，作為免疫毛細(xì)管測(cè)定法或免疫色譜測(cè)定法的改進(jìn)，通過(guò)該方法可以區(qū)分出樣品自身性質(zhì)導(dǎo)致的“假陰性反應(yīng)”和“真正陰性”反應(yīng)之間的清楚界限，從而精確地確定作為樣品中檢測(cè)目的物的目標(biāo)抗體是否存在及其存在的量。附圖簡(jiǎn)述圖1是顯示條帶狀固相支持物作為本發(fā)明抗體測(cè)定裝置的組成元件的示意圖。圖1中，標(biāo)號(hào)1表示第一區(qū)，2表示示蹤區(qū)，3表示第二區(qū)，4表示第三區(qū)，5表示檢測(cè)帶，6表示對(duì)照帶。圖2是說(shuō)明用本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置測(cè)定樣品中目標(biāo)抗體的原理圖。其中使用的各標(biāo)號(hào)的含義與圖1的含義相同。圖3是顯示本發(fā)明抗體測(cè)定裝置中包括的固相支持物條帶(A)和容納所述固相支持物的外殼(B)的示意圖。圖3中，標(biāo)號(hào)1-6與圖1中的含義相同，標(biāo)號(hào)7表示所述外殼的上部，8表示其下部，9表示樣品輸入端口，10表示檢測(cè)窗。圖4表示在實(shí)施例1(5)(i)的尿樣中抗-H.pylori抗體檢測(cè)結(jié)果的曲線圖。圖4中，空心圓表示13C-UBT試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性的H.Pylori幽門(mén)螺桿菌感染患者的尿樣數(shù)據(jù)，實(shí)心圓表示得出陰性13C-UBT試驗(yàn)結(jié)果的患者的尿樣數(shù)據(jù)。圖5表示如實(shí)施例1(5)(ii)測(cè)定的尿樣中抗-H.pylori抗體數(shù)據(jù)的曲線圖。圖5中，縱坐標(biāo)表示吸光率(O.D.450nm)，橫坐標(biāo)表示根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)建立H.pylori-陽(yáng)性組和H.pylori-陰性組。圖6表示如實(shí)施例1(6)測(cè)定的尿樣中抗-H.pylori抗體數(shù)據(jù)的曲線圖。圖6中，空心圓表示得出陽(yáng)性13C-UBT試驗(yàn)結(jié)果的患者的尿樣數(shù)據(jù)，空心圓表示得出陰性13C-UBT試驗(yàn)結(jié)果的患者的尿樣數(shù)據(jù)。圖7表示如實(shí)施例2(2)制備的尿樣中抗-HBc抗體數(shù)據(jù)的曲線圖。圖7中，實(shí)心圓表示得出血液抗-HBc抗體陽(yáng)性試驗(yàn)結(jié)果的患者的尿樣數(shù)據(jù)，空心圓表示得出血液抗-HBc抗體陰性試驗(yàn)結(jié)果的患者的尿樣數(shù)據(jù)。圖8顯示測(cè)定尿中抗-HIV抗體時(shí)，得出假陽(yáng)性反應(yīng)尿樣的凝膠滲透層析圖，及其各組份的抗體反應(yīng)性(實(shí)施例3(1))。圖8中，縱坐標(biāo)表示吸光率(O.D.450nm)，橫坐標(biāo)表示凝膠滲透層析組份(組份號(hào))。實(shí)線表示蛋白質(zhì)在280nm的吸收，黑點(diǎn)線表示抗-人(IgG+IgM)抗體產(chǎn)生的數(shù)據(jù)，空心三角線表示抗-人IgG(Fc-特異性)抗體產(chǎn)生的數(shù)據(jù)；實(shí)心三角線表示抗-人IgG(Fab-特異性)抗體產(chǎn)生的數(shù)據(jù)。圖9表示如實(shí)施例5測(cè)定的尿樣中抗-H.pylori抗體數(shù)據(jù)的曲線圖。圖9中，縱坐標(biāo)表示吸光率(O.D.450-650nm)，橫坐標(biāo)表示根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)分類(lèi)建立的H.pylori-陽(yáng)性組(+n＝56)和H.pylori-陰性組(-n＝44)。圖10表示如實(shí)施例6制備的尿樣中抗-風(fēng)疹病毒抗體數(shù)據(jù)的曲線圖。圖10中，縱坐標(biāo)表示吸光率(O.D.450-650nm)，橫坐標(biāo)表示根據(jù)商品化試劑盒測(cè)定的血清水平分類(lèi)建立的抗-風(fēng)疹抗體陽(yáng)性組(+n＝76)和抗-風(fēng)疹抗體陰性組(-n＝23)。圖11是顯示本發(fā)明抗體測(cè)定裝置第二區(qū)的試驗(yàn)帶和對(duì)照帶的圖(實(shí)施例7(3))。圖12顯示利用本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置得到的尿、全血和血漿中抗-H.pylori抗體的分析數(shù)據(jù)與利用對(duì)照裝置(A-E)得到的相應(yīng)數(shù)據(jù)的比較。圖12中，“特異性”表示為，當(dāng)用各分析裝置測(cè)定由13C-UBT試驗(yàn)證明為陰性的患者樣品的每一項(xiàng)試驗(yàn)項(xiàng)目時(shí)，陰性試驗(yàn)相對(duì)于試驗(yàn)總數(shù)的百分?jǐn)?shù)(陰性率)；“靈敏度”表示為，當(dāng)用各測(cè)定裝置測(cè)定由13C-UBT試驗(yàn)證明為陽(yáng)性的患者樣品的每一項(xiàng)試驗(yàn)項(xiàng)目時(shí)，陽(yáng)性試驗(yàn)相對(duì)于試驗(yàn)總數(shù)的百分?jǐn)?shù)(陽(yáng)性率)。對(duì)照裝置A-H表示下列裝置AHelitest(由CortecsDiagnostics生產(chǎn))BH.pylori-Check-1(由Bio-MedicalProducts生產(chǎn))CFirstCheckH.pylori(由WorldwideMedicalCorp生產(chǎn))DBiocardHilicobacterpyloriIgG(由AntiBiotechOy生產(chǎn))EInstaTestH.Pylori(由CortezdiagnosticsInc.生產(chǎn))FOneStepH.PyloriTest(由TecoDiagnostics生產(chǎn))GH.pyloriSPOT(由InternationalImmuno-Diagnostics生產(chǎn))HQuickStripeH.pylori(由DiatechDiagnosticsInc.生產(chǎn))
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行了大量研究，建立了一種分析系統(tǒng)，它將能夠高度精確地測(cè)定目標(biāo)抗體，甚至當(dāng)樣品是例如尿樣等的抗體貧乏型樣品時(shí)，并且發(fā)現(xiàn)分析系統(tǒng)中存在著能在抗原-抗體反應(yīng)中非特異地結(jié)合抗原的抗體成分(以下稱(chēng)為非特異性抗體結(jié)合成分)，從而引起非特異性反應(yīng)，因此產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果，并由此降低了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。基于上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人進(jìn)一步研究并發(fā)現(xiàn)，可以在存在大腸桿菌(E.coli)成分的情況下，在需要測(cè)定的目標(biāo)抗體和對(duì)特定抗體具有特異性的抗原之間引發(fā)抗原-抗體反應(yīng)，來(lái)抑制所述非特異性反應(yīng)，由此假陽(yáng)性率可以降低，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)準(zhǔn)確性的顯著改善。本發(fā)明人進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)所述非特異性結(jié)合的抗體成分包括IgG片段和/或保留了IgG輕鏈(L)或F(ab)區(qū)抗原性的IgG片段變性產(chǎn)物，并發(fā)現(xiàn)這些抗體成分與血清抗體分析系統(tǒng)中使用的常規(guī)抗體分析試劑(例如二級(jí)抗體)發(fā)生交叉反應(yīng)，因此導(dǎo)致假陽(yáng)性試驗(yàn)。基于上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)一步確定可以通過(guò)使用對(duì)待測(cè)目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的試劑作為抗體分析試劑，來(lái)抑制抗體分析系統(tǒng)中的非特異性反應(yīng)，由此可以降低假陽(yáng)性率，從而顯著改善檢測(cè)準(zhǔn)確性。同時(shí)，本發(fā)明人努力改進(jìn)抗體測(cè)定硬件(免疫毛細(xì)管測(cè)定裝置和免疫色譜測(cè)定裝置)，并發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)在作為本發(fā)明檢測(cè)裝置的一部分的條帶的反應(yīng)區(qū)(評(píng)價(jià)區(qū))中建立用于測(cè)定目標(biāo)抗體的測(cè)定區(qū)之外，另建立用于測(cè)定樣品中任意抗體的“對(duì)照帶”，以排除“假陰性”反應(yīng)，進(jìn)而準(zhǔn)確測(cè)定“真陰性”反應(yīng)。因此，在這種分析系統(tǒng)中，當(dāng)樣品是由于抗體濃度太低(也就是說(shuō)，抗體的總量太低)等原因而不能被檢測(cè)到的非合適樣品時(shí)，“對(duì)照帶”給出顯示樣品不能夠被檢測(cè)的陰性信號(hào)。反之，當(dāng)樣品中存在合適的抗體濃度，“對(duì)照帶”顯示出樣品適于對(duì)目標(biāo)抗體進(jìn)行預(yù)期分析的陽(yáng)性信號(hào)。然后，按照該“試驗(yàn)帶”的結(jié)果，技術(shù)人員可以明確確定樣品中是否存在或缺乏目標(biāo)抗體，也就是說(shuō)，樣品是“陽(yáng)性”還是“真陰性”。在這一研究系列中，日本未審查專(zhuān)利公開(kāi)文件NO.299464/1989和日本未審查專(zhuān)利公開(kāi)文件NO.167497/1994，均公開(kāi)了對(duì)抗體測(cè)定硬件(免疫毛細(xì)管測(cè)定裝置和免疫色譜測(cè)定裝置)的改進(jìn)，其中描述了除試驗(yàn)帶外還包括對(duì)照帶的裝置。然而，這些裝置中的對(duì)照帶的設(shè)計(jì)是用來(lái)確定分布在條帶上游的標(biāo)記物是否由于毛細(xì)管作用在試驗(yàn)帶內(nèi)轉(zhuǎn)移，因此，該對(duì)照帶與本發(fā)明的對(duì)照帶相去甚遠(yuǎn)。本發(fā)明人進(jìn)一步明確，當(dāng)存在大腸桿菌成分時(shí)，在上述改進(jìn)的抗體測(cè)定裝置中引發(fā)目標(biāo)抗體和相應(yīng)抗原之間的偶聯(lián)反應(yīng)，那么該抗原-抗體反應(yīng)系統(tǒng)中的非特異性反應(yīng)將被抑制，并確定當(dāng)使用對(duì)IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的試劑作為抗體測(cè)定試劑時(shí)，該抗原-抗體復(fù)合物的非特異性反應(yīng)將被抑制，由此使假陽(yáng)性試驗(yàn)的發(fā)生率大幅度降低。本發(fā)明在上述幾個(gè)結(jié)果的基礎(chǔ)上得到進(jìn)一步發(fā)展。其一方面，本發(fā)明提供了測(cè)定抗體的高度精確的方法，它降低了假陽(yáng)性反應(yīng)的幾率。(1-1)作為它的一種方式，上述利用抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)樣品中目標(biāo)抗體的測(cè)定方法的特征在于在存在大腸桿菌成分的情況下，在所述抗體和分析抗原之間引發(fā)所述反應(yīng)。這種測(cè)定抗體的方法包括下列具體方法。(a)該抗體測(cè)定方法中所述大腸桿菌成分至少是選自大腸桿菌的可溶組分和脂多糖組分之一的成分。(b)該抗體測(cè)定方法中使用大腸桿菌成分的比例為每微克分析抗原約0.1-100微克，優(yōu)選約0.5-50微克的大腸桿菌成分。(1-2)作為另一種方式，抗體測(cè)定方法包括用“三明治技術(shù)”(sandwichtechnique)檢測(cè)樣品中的目標(biāo)抗體，其特征在于含有對(duì)目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的二級(jí)抗體的試劑作為抗體分析試劑。這種測(cè)定抗體的方法包括下列具體方法。(a)該抗體分析方法中二級(jí)抗體是Fc-特異性的抗-IgG抗體。(b)在包含抗原-抗體反應(yīng)步驟的該抗體分析方法中，樣品中的目標(biāo)抗體與特異于所述抗體的固定化抗原偶聯(lián)，如同被固定在支持物上一樣，反應(yīng)步驟中由所述固定化抗原捕獲的目標(biāo)抗體再與對(duì)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的二級(jí)抗體反應(yīng)。(c)上述抗體分析方法中，抗原-抗體反應(yīng)是在存在大腸桿菌成分的情況下進(jìn)行的。第二方面，本發(fā)明涉及一種抗體測(cè)定裝置。該裝置包括下列具體方面。(2-1)抗體測(cè)定裝置包括一個(gè)固相支持物，它至少具有(a)一個(gè)用于樣品上樣的第一區(qū)和(b)一個(gè)第二反應(yīng)區(qū)，其中試驗(yàn)樣品中的抗體按照下述預(yù)先安排的順序反應(yīng)樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從第一區(qū)遷移到第二區(qū)的順序，該裝置還包括一種用于檢測(cè)第二區(qū)中反應(yīng)結(jié)果的標(biāo)記工具，所述(b)第二區(qū)具有(i)試驗(yàn)帶，用于捕獲待檢目標(biāo)抗體的配體固定在此處；(ii)對(duì)照帶，捕獲樣品中任意抗體的配體固定在此處。(2-2)抗體測(cè)定裝置，其中固定在試驗(yàn)帶上的配體是樣品中存在的目標(biāo)抗體的抗原。(2-3)抗體測(cè)定裝置，其中固定在對(duì)照帶上的配體是能夠捕獲樣品中任意抗體的抗-人免疫球蛋白抗體。(2-4)抗體測(cè)定裝置，包括作為所述標(biāo)記工具的即將與目標(biāo)抗體和任意抗體結(jié)合的標(biāo)記配體。(2-5)抗體測(cè)定裝置，其中標(biāo)記工具是被可移動(dòng)地承載在固相支持物第二區(qū)上游的被標(biāo)記抗體，該被標(biāo)記抗體將與目標(biāo)抗體和任意抗體以下列方式結(jié)合，即與樣品接觸后，該標(biāo)記配體與目標(biāo)抗體和任意抗體反應(yīng)，從而分別形成目標(biāo)抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物和任意抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物，然后它們通過(guò)毛細(xì)管作用遷移到第二區(qū)，在第二區(qū)它們分別固定在試驗(yàn)帶和對(duì)照帶上。(2-6)抗體測(cè)定裝置，其中標(biāo)記配體固定在固相支持物的第一區(qū)和第二區(qū)之間的中間區(qū)域(示蹤區(qū))。(2-7)抗體測(cè)定裝置，其中即將與目標(biāo)抗體和任意抗體結(jié)合的標(biāo)記配體是被標(biāo)記的抗-人免疫球蛋白抗體。(2-8)抗體測(cè)定裝置，其中抗-人免疫球蛋白抗體是對(duì)免疫球蛋白G的Fc區(qū)具有特異親合力的抗-IgG抗體。(2-9)抗體測(cè)定裝置，其中固相支持物進(jìn)一步具有位于第一區(qū)和第二區(qū)下游的吸收區(qū)，以便從第一區(qū)遷移到第二區(qū)的樣品進(jìn)一步通過(guò)毛細(xì)管作用遷移到吸收區(qū)。(2-10)抗體測(cè)定裝置，其中在第二區(qū)的試驗(yàn)帶上，在存在大腸桿菌成分的情況下，發(fā)生目標(biāo)抗體的偶聯(lián)反應(yīng)。第三方面，本發(fā)明涉及樣品中目標(biāo)抗體的固相測(cè)定方法。該方法包括下列具體方面。(3-1)目標(biāo)抗體的固相測(cè)定方法，包括將樣品在抗體測(cè)定裝置的第一區(qū)點(diǎn)樣，在第二區(qū)的對(duì)照帶顯色的條件下，檢測(cè)第二區(qū)試驗(yàn)帶的顏色形成狀況。(3-3)目標(biāo)抗體的固相測(cè)定方法，其中在抗體測(cè)定裝置第二區(qū)的試驗(yàn)帶上，在存在大腸桿菌成分的情況下，發(fā)生目標(biāo)抗體的偶聯(lián)反應(yīng)。第四方面，本發(fā)明涉及一種抗體測(cè)定試劑盒，用于與所述抗體測(cè)定裝置有關(guān)的應(yīng)用。該抗體測(cè)定試劑盒可以包括下列具體方面。(4-1)一種抗體測(cè)定試劑盒，其特征在于它含有大腸桿菌成分。(4-2)抗體測(cè)定試劑盒進(jìn)一步含有抗原或抗體測(cè)定試劑，該試劑可以任意地被固定或不被固定。(4-3)抗體測(cè)定試劑盒，其特征在于它含有Fc-特異性的抗-IgG抗體作為抗體測(cè)定試劑。(4-4)抗體測(cè)定試劑盒，含有本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置。(1)抗體測(cè)定方法首先，詳細(xì)描述作為本發(fā)明第一方面的抗體測(cè)定方法。本發(fā)明的抗體測(cè)定方法代表對(duì)抗體免疫測(cè)定法的改進(jìn)，其特征在于通過(guò)抑制非特異性反應(yīng)，降低假陽(yáng)性反應(yīng)的發(fā)生率。(1-1)作為上述抗體測(cè)定方法的實(shí)施方案，提及這樣一種方法，即在存在大腸桿菌成分的情況下，在樣品中的目標(biāo)抗體和特異于所述抗體的抗原之間進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)。按照這種方法，抗原抗體反應(yīng)中的非特異性反應(yīng)被顯著抑制，結(jié)果即降低了假陽(yáng)性試驗(yàn)的發(fā)生率。大腸桿菌成分沒(méi)有具體限制，只要它是大腸桿菌成分，因此包括但不限于蛋白質(zhì)成分、碳水化合物成分或其脂類(lèi)成分、或者這些成分的混合物。作為優(yōu)選實(shí)施例，提及E.coli的可溶性部分或脂多糖(LPS)部分。對(duì)于制備這種大腸桿菌成分的方法沒(méi)有具體限制，大量方法可供選擇使用。一種常用方法可以包括在適于E.coli增殖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)任意E.coli菌株、收獲生長(zhǎng)完全的細(xì)胞、用超聲儀物理破碎細(xì)胞或者用表面活性劑等溶解細(xì)胞，制備可溶性部分(抽提物)?？梢杂糜袡C(jī)溶劑例如酚、氯仿或乙醚、或者兩種或三種不同有機(jī)溶劑的混合物通過(guò)抽提方法制備上面提到的LPS。還可以用基因工程技術(shù)人工制備上述物質(zhì)。另外，也可以方面地使用商業(yè)產(chǎn)品(例如，脂多糖E.coli，由Difco或Sigma提供)。本發(fā)明可以應(yīng)用的優(yōu)選樣品是體液樣品。對(duì)于體液沒(méi)有限制，只要它是來(lái)源于人或其它動(dòng)物的、其中可能含有目標(biāo)抗原的體液。因此，術(shù)語(yǔ)“體液”包括廣泛的常規(guī)試驗(yàn)室檢測(cè)中用作樣品的生物體液。更具體地說(shuō)，體液包括血液(包括血清和血漿在內(nèi))、尿液、腦脊液、羊水、唾液、汗液等。本發(fā)明特別解決了與非侵害性樣品有關(guān)的檢測(cè)準(zhǔn)確性低的問(wèn)題，所述非侵害性樣品，例如尿、唾液和汗液，尤其是尿作為抗體檢測(cè)樣品較佳，因此，這些生物材料可以用作體液的優(yōu)選例?！澳繕?biāo)抗體”，即測(cè)定的目標(biāo)，沒(méi)有具體限制，只要它是需要檢測(cè)的抗體，因此包括抗外源生物體引起宿主感染的各種來(lái)源的抗體。因此包括抗各種感染源的抗體，這些感染源對(duì)于宿主來(lái)說(shuō)是外源體。所述感染源沒(méi)有具體限制，但是包括多種感染人類(lèi)和其它動(dòng)物并在宿主體內(nèi)產(chǎn)生抗體的不同病原體。更具體地說(shuō)，所述病原體包括多種病毒例如HIV(人免疫缺陷病毒)，A、B、C和其它型肝炎病毒，風(fēng)疹病毒，流感病毒，麻疹病毒，巨細(xì)胞病毒，單純皰疹病毒，水痘狀-帶狀皰疹病毒，腺病毒，腸道病毒等；細(xì)菌例如幽門(mén)螺旋桿菌(下文簡(jiǎn)稱(chēng)為H.pylori)，Clamydia，結(jié)核分枝桿菌，螺旋體，淋球菌，蒼白密螺旋體，枝原體屬等(不包括大腸桿菌)；原生動(dòng)物例如鼠弓形體，溶組織內(nèi)阿米巴，恙蟲(chóng)熱立克次氏體等。優(yōu)選病毒為例如HIV、肝炎病毒，風(fēng)疹病毒，流感病毒，麻疹病毒，皰疹病毒等，細(xì)菌由幽門(mén)螺旋桿菌等代表，細(xì)菌例如H.Pylori特別優(yōu)選。本發(fā)明的抗體測(cè)定方法中使用的抗原沒(méi)有具體限制，只要它是能夠與需要檢測(cè)的目標(biāo)抗體進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)的抗原。因此，例如，常規(guī)血清抗體測(cè)定系統(tǒng)中使用的任何抗原都可以成功的應(yīng)用。這些抗原不但可以是如所述病毒和細(xì)菌等真正的病原體，還可以是具有各病原體固有抗原決定簇的抗原。因此，例如，抗原可以是熱處理或輻照病原體后提供的滅活病原體、可以是用表面活性劑等提取病原體制備的抗原、以及利用化學(xué)合成或重組DNA技術(shù)人工制備的抗原。順便說(shuō)一句，可以用常規(guī)方法測(cè)定候選抗原與目標(biāo)抗體的反應(yīng)力，容易地確定一種侯選抗原是否可以在本發(fā)明的測(cè)定方法中成功地應(yīng)用。本發(fā)明的測(cè)定方法中，所述抗原可以隨意地預(yù)先固定在任意固相上應(yīng)用。這里提到的固相可以是任何本領(lǐng)域常規(guī)使用的多種固相，因此包括但不限于條狀物、珠狀物、平板(包括微量滴定平板)以及各種材料制成的測(cè)試管，例如玻璃、纖維粉、葡聚糖、瓊脂糖、聚苯乙烯、濾紙、羧甲基纖維素、離子交換樹(shù)脂、右旋糖苷、塑料薄膜、塑料管、尼龍、玻璃珠、絲綢、聚氨甲基乙烯醚-馬來(lái)酸共聚物，氨基酸共聚物，乙烯-馬來(lái)酸共聚物等。固定化的方法也沒(méi)有具體限制，但可以是任何物理結(jié)合和化學(xué)結(jié)合方法。例如，化學(xué)結(jié)合法例如共價(jià)結(jié)合法、例如疊氮法、多肽法(酰胺衍生物法、羧基氯化樹(shù)脂法、碳二亞胺樹(shù)脂法、馬來(lái)酸酐衍生物法、異氰酸鹽衍生物法、溴化氰激活的多糖法、纖維素羧酸鹽衍生物法、濃縮試劑法等)、烴化法、交聯(lián)劑偶聯(lián)法(用戊二醛、環(huán)己烯異氰酸鹽等作為交聯(lián)劑偶聯(lián)到支持物上的方法)、Ugi反應(yīng)偶聯(lián)法等；應(yīng)用離子交換樹(shù)脂等支持物的離子結(jié)合法；以及應(yīng)用玻璃珠或其它多孔玻璃支持物的物理吸附法。該測(cè)定系統(tǒng)中應(yīng)用的抗原的量沒(méi)有具體限制，但是可以根據(jù)具體測(cè)定系統(tǒng)中常規(guī)應(yīng)用的抗原量任意選擇。例如，當(dāng)使用三明治技術(shù)時(shí)，通常應(yīng)用抗原比目標(biāo)抗體過(guò)量。舉例說(shuō)明，在100μl的反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)，可以使用的抗原的比例通常約為0.1-100μg/ml，優(yōu)選約1-10μg/ml。除了本反應(yīng)應(yīng)當(dāng)在存在大腸桿菌成分的情況下進(jìn)行外，所述抗原和目標(biāo)抗體之間的抗原-抗體反應(yīng)條件沒(méi)有具體限制，但可以與傳統(tǒng)免疫測(cè)定法常規(guī)使用的條件一致。典型程序可以包括使所述抗原、抗體和大腸桿菌成分混合在一起，在通常不高于45℃，優(yōu)選約4-40℃，更優(yōu)選約25-40℃的溫度下，保溫或保留約0.5-40小時(shí)，優(yōu)選約1-20小時(shí)。反應(yīng)中使用的溶劑及其pH也沒(méi)有具體限制，只要不干擾反應(yīng)的進(jìn)行。因此，在pH約5-9范圍內(nèi)表現(xiàn)緩沖作用的常規(guī)緩沖液，例如檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、tris緩沖液、乙酸鹽緩沖液等通常可以按照常規(guī)方法使用。該反應(yīng)系統(tǒng)中大腸桿菌成分的比例沒(méi)有具體限制，但該比例通?？梢詾椋绶磻?yīng)系統(tǒng)中每微克抗原約0.1-100μg，優(yōu)選約0.5-50μg大腸桿菌成分。本發(fā)明抗體測(cè)定法的操作程序沒(méi)有具體限制，除了以下基本條件它包括在存在大腸桿菌成分的情況下，使目標(biāo)抗體與相應(yīng)抗原反應(yīng)的抗原-抗體反應(yīng)步驟，所述抗原可以是固定化抗原。然而，優(yōu)選地，該方法最好進(jìn)一步包括對(duì)由所述抗原捕獲的目標(biāo)抗體(抗原-抗體復(fù)合物)的檢測(cè)步驟，那就是說(shuō)，抗原-抗體復(fù)合物與抗體測(cè)定試劑的反應(yīng)步驟。對(duì)經(jīng)所述抗原-抗體反應(yīng)得到的抗原-抗體復(fù)合物的檢測(cè)和定量方法及其條件沒(méi)有具體限制，它們可以是一般免疫測(cè)定法中常規(guī)應(yīng)用的檢測(cè)定量方法和條件。本發(fā)明優(yōu)選使用三明治法進(jìn)行實(shí)踐。在固相三明治法中，例如，典型地可以通過(guò)下列程序測(cè)定樣品中的目標(biāo)抗體。首先，將大腸桿菌成分和懷疑含有目標(biāo)抗體的樣品(體液例如尿液)加到固相抗原上，該固相抗原是能夠與目標(biāo)抗體進(jìn)行特異性抗原-抗體反應(yīng)的固定化抗原，以便進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)。例如，通過(guò)清洗除去沒(méi)有偶聯(lián)到固相抗原上的未結(jié)合物質(zhì)后，加入抗體測(cè)定試劑，使其與偶聯(lián)到固相抗原上的目標(biāo)抗體(抗原-抗體復(fù)合物)反應(yīng)，然后根據(jù)具體的測(cè)定試劑采用具體測(cè)定方法檢測(cè)或定量抗原-抗體復(fù)合物。對(duì)用于這類(lèi)分析的多種方法進(jìn)行選擇和改進(jìn)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是公知常識(shí)，任何這類(lèi)方法都可以用于本發(fā)明的實(shí)踐[例如，“RinshoKensa-houTeiyo(OutlineofClinicalTest)”，KaneharaPublishingCo.，1995]。此處使用的抗體測(cè)定試劑沒(méi)有具體限制，但包括本領(lǐng)域常規(guī)使用的大量試劑。例如，可以包括二級(jí)抗體例如能夠與目標(biāo)抗體(免疫球蛋白)結(jié)合的抗-人免疫球蛋白抗體。上面提到的抗-人免疫球蛋白抗體包括用目標(biāo)免疫球蛋白的免疫球蛋白作為免疫原免疫動(dòng)物，得到的抗血清、其純化產(chǎn)物(多克隆抗體)和單克隆抗體。另外，也可以使用對(duì)目標(biāo)抗體(IgG)的Fc區(qū)具有特異親合力的抗-IgG抗體作為抗體測(cè)定試劑。作為這樣一種抗-IgG抗體，還可以使用不與IgG的輕鏈或IgG的F(ab)區(qū)反應(yīng)的Fc-特異性的抗-IgG抗體，或者蛋白A、蛋白G等或其它只是特異地與IgG的Fc區(qū)反應(yīng)的試劑。當(dāng)目標(biāo)抗體是IgG時(shí)，使用這類(lèi)測(cè)定試劑尤其有利。這種抗體測(cè)定試劑可以按照常規(guī)方法制備，或者從商業(yè)資源中購(gòu)買(mǎi)。為了便于檢測(cè)，可以用常規(guī)標(biāo)記試劑直接修飾抗體測(cè)定試劑，或者通過(guò)附加測(cè)定手段來(lái)間接修飾抗體測(cè)定試劑。對(duì)標(biāo)記試劑沒(méi)有具體限制，可以使用迄今已知的任何試劑，或者未來(lái)期望投入使用的任何試劑。可提到的具體實(shí)例有，可以使用放射性同位素例如125I、3H、14C等；酶例如堿式磷酸酶(ALP)、過(guò)氧化物酶(例如HRP)等；熒光物質(zhì)例如熒光素異硫氰酸酯(FITC)、四甲基若丹明異硫氰酸酯(RITC)等；1N-(2，2，6，6-四甲基-1-氧基-4-哌啶基)-5N-(天冬酰胺)-2，4-二硝基苯(TOPA)等。應(yīng)用上述標(biāo)記試劑的免疫測(cè)定法分別被稱(chēng)為放射免疫測(cè)定法、酶免疫測(cè)定法、熒光免疫測(cè)定法、和自旋免疫測(cè)定法。應(yīng)用由標(biāo)記的膠狀-金染色膠體顆粒制備的抗體測(cè)定試劑的免疫色譜測(cè)定法也可以使用。可以采用實(shí)際上已知的方法，用上述標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記、通過(guò)間接標(biāo)記修飾、以及對(duì)它們進(jìn)行檢測(cè)[TatsuoIwasaki等單克隆抗體，KodanshaScientific，1984；EijiIshikawa等酶免疫分析，第二版，IgakuShoin，1982，amongothers]。對(duì)于本發(fā)明的測(cè)定方法，關(guān)鍵在于在包含待測(cè)目標(biāo)抗體和相應(yīng)抗原的反應(yīng)體系中還包含有大腸桿菌成分，只要滿(mǎn)足這一條件，其余的基本程序沒(méi)有特別限制，它們可以與傳統(tǒng)免疫測(cè)定或者本領(lǐng)域常規(guī)應(yīng)用的方法相同。因此，所述抗原-抗體復(fù)合物和所述抗體測(cè)定試劑之間的反應(yīng)條件也沒(méi)有特別限制，但它們可以與通常使用的免疫測(cè)定法相同。最一般的程序包括在如上述抗原-抗體反應(yīng)的同樣條件下(及，通常溫度不超過(guò)45℃，優(yōu)選約4-40℃，更優(yōu)選約25-40℃，pH值約5-9，保溫時(shí)間約0.5-40小時(shí)，優(yōu)選約1-20小時(shí))，使測(cè)定系統(tǒng)保溫或使其靜置。通過(guò)測(cè)定標(biāo)記物活性，以常規(guī)方式或根據(jù)從測(cè)定值計(jì)算出來(lái)的抗體滴度評(píng)價(jià)樣品中目標(biāo)抗體的存在與否或者評(píng)定出目標(biāo)抗體的含量，所述標(biāo)記物活性依賴(lài)于標(biāo)記抗體測(cè)定試劑時(shí)使用的標(biāo)記試劑(或間接標(biāo)記物)的種類(lèi)。(1-2)作為本發(fā)明抗體測(cè)定方法的替換方式，可以提及一種用于測(cè)定樣品中目標(biāo)抗體的免疫學(xué)方法，它包括用對(duì)目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的試劑作為抗體測(cè)定試劑。按照該方法，能夠顯著抑制非特異性結(jié)合抗體成分和抗體測(cè)定試劑之間的反應(yīng)，從而能夠降低假陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)的幾率。因此，這種抗體測(cè)定法可以認(rèn)為是用于免疫測(cè)定抗體的三明治法的改進(jìn)。本發(fā)明的抗體測(cè)定試劑與目標(biāo)抗體(IgG)具有反應(yīng)性，因此，能夠用來(lái)檢測(cè)抗體，其特征在于該抗體測(cè)定試劑不與目標(biāo)抗體IgG的輕鏈或目標(biāo)IgG的F(ab)區(qū)反應(yīng)，那就是說(shuō)，它與目標(biāo)IgG的Fc區(qū)具有特異親合力。更具體地說(shuō)，所述抗體測(cè)定試劑可以是例如Fc-特異性抗-IgG抗體，它可以用目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)作為免疫原制備，它包括用所述免疫原免疫任意動(dòng)物獲得的抗血清、其純化產(chǎn)物(多克隆抗體)和單克隆抗體。這類(lèi)試劑不限于上述抗體制劑，而可以是與抗體IgG的Fc區(qū)特異性反應(yīng)的蛋白A、蛋白G等。這些抗體測(cè)定試劑可以按照常規(guī)方法制備，或者從商業(yè)來(lái)源購(gòu)買(mǎi)(例如，Sigma，Cappel或JacksonImmunoResearchLaboratories，Inc.)用于檢測(cè)的抗體測(cè)定試劑可以用傳統(tǒng)標(biāo)記試劑直接修飾或用附加檢測(cè)手段進(jìn)行間接修飾。標(biāo)記試劑的種類(lèi)、標(biāo)記方法、以及標(biāo)記物的檢測(cè)方法可以與(1-1)中提到的相同。本發(fā)明的抗體測(cè)定方法包括應(yīng)用上述抗體測(cè)定試劑作為目標(biāo)抗體(即抗原-抗體復(fù)合物)檢測(cè)中的關(guān)鍵因素，只要滿(mǎn)足該需要，其它的基本程序可以與采用三明治技術(shù)的傳統(tǒng)免疫測(cè)定中使用的程序相同。本發(fā)明的抗體測(cè)定方法主要是通過(guò)使能夠與樣品中的目標(biāo)抗體反應(yīng)的抗原發(fā)生反應(yīng)，然后用所述抗體測(cè)定試劑檢測(cè)結(jié)合到抗原上的目標(biāo)抗體(抗原-抗體復(fù)合物)來(lái)實(shí)現(xiàn)。分析樣品和抗原可以分別與(1-1)中提到的那些相同，至于目標(biāo)抗體也可以使用(1-1)中提到的同樣抗體，只要抗體是抗感染原的抗體IgG。在本發(fā)明的方法中，感染原可以包括大腸桿菌。如果需要，本發(fā)明中的抗原或抗體測(cè)定試劑可以固定在任意固相支持物上應(yīng)用。使用的固相支持物和固定化方法可以，例如，如同(1-1)中提到的一樣?？乖湍繕?biāo)抗體之間的抗原-抗體反應(yīng)沒(méi)有特別限制，可以在傳統(tǒng)免疫測(cè)定中應(yīng)用的常規(guī)條件下進(jìn)行反應(yīng)。典型的程序包括使含有抗原和目標(biāo)抗體的反應(yīng)系統(tǒng)在通常溫度不超過(guò)45℃，優(yōu)選約4-40℃，更優(yōu)選約25-40℃條件下保溫或靜置約0.5-40小時(shí)，優(yōu)選約1-20小時(shí)。雖然不是強(qiáng)制規(guī)定，但可以如(1-1)中提到的那樣，使大腸桿菌成分存在于抗原-抗體反應(yīng)中。然后清洗得到的抗原-抗體復(fù)合物，接著使該復(fù)合物與所述特異性抗體測(cè)定試劑反應(yīng)。該反應(yīng)可以在與傳統(tǒng)免疫測(cè)定法(三明治測(cè)定技術(shù))中通常使用的同樣條件下，或者基本上以同樣的方式進(jìn)行。例如，溶劑沒(méi)有特別限制，只要它不干擾反應(yīng)，因此包括但不限于pH約5-9的緩沖液，例如檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、tris緩沖液和乙酸鹽緩沖液，上述僅作為實(shí)例提出。反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度也沒(méi)有特別限制，但可以是，例如，與所述抗原-抗體反應(yīng)中涉及的那些相同?？梢韵笤?1-1)中提到那樣，通過(guò)測(cè)定標(biāo)記物活性，以常規(guī)方式或以用測(cè)量結(jié)果計(jì)算出來(lái)的抗體滴度的方式，評(píng)價(jià)樣品中目標(biāo)抗體的存在或缺乏或者目標(biāo)抗體的含量，所述標(biāo)記物活性依賴(lài)于標(biāo)記抗體測(cè)定試劑過(guò)程中使用的標(biāo)記物質(zhì)(或者間接標(biāo)記物)的種類(lèi)。(2)抗體測(cè)定裝置現(xiàn)在詳細(xì)描述本發(fā)明第二方面的抗體測(cè)定裝置。本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置是一種改進(jìn)的方法，通過(guò)該方法可以通過(guò)固相測(cè)定程序高度精確地確定樣品中待測(cè)目標(biāo)抗體的存在和/或存在量。更具體地說(shuō)，本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置是一種如下的測(cè)定裝置，它包括一個(gè)固相支持物，該支持物至少具有(a)接觸樣品的第一區(qū)和(b)樣品中的抗體進(jìn)行反應(yīng)的第二區(qū)，按照能夠使樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從所述第一區(qū)遷移到所述第二區(qū)的次序安排第二區(qū)，它還包括一種用于檢測(cè)所述第二區(qū)中的反應(yīng)結(jié)果的標(biāo)記工具，其特征在于所述(b)第二區(qū)具有(i)試驗(yàn)帶，待測(cè)目標(biāo)抗體的配體被固定在此處和(ii)對(duì)照帶，用于捕獲樣品中任意抗體的配體固定在此處。本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置的重要特征在于，在第二區(qū)提供有獨(dú)立于試驗(yàn)帶的對(duì)照帶，該對(duì)照帶的作用在于當(dāng)用適當(dāng)方式對(duì)適當(dāng)樣品點(diǎn)樣并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)照帶形成一種表明標(biāo)記物存在情況下陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)的指標(biāo)，而不管樣品中是否存在目標(biāo)抗體，同時(shí)，當(dāng)用不適當(dāng)?shù)姆绞綄?duì)不適當(dāng)樣品點(diǎn)樣并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)照帶形成一種表明標(biāo)記物存在情況下陰性實(shí)驗(yàn)的指標(biāo)，而不管樣品中是否存在目標(biāo)抗體。因此，本裝置第二區(qū)中的對(duì)照帶是給出這樣一種指示的區(qū)域，即不管樣品中是否存在目標(biāo)抗體，都能夠指示試驗(yàn)帶的結(jié)果是否有效。對(duì)于本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置，正因?yàn)榫哂猩鲜鼋Y(jié)構(gòu)，因此能夠高度精確(高度可靠)地定性和定量地測(cè)定樣品中的抗體，清楚地區(qū)分假陰性和真陰性結(jié)果之間的區(qū)別。另外，本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置可以如此設(shè)計(jì)，即試驗(yàn)帶中目標(biāo)抗體的反應(yīng)在存在大腸桿菌成分的情況下進(jìn)行，或者如此設(shè)計(jì)，即對(duì)目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的試劑用做抗體測(cè)定試劑，用來(lái)檢測(cè)試驗(yàn)帶中的反應(yīng)結(jié)果。對(duì)于本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置，正因?yàn)樯鲜鼋Y(jié)構(gòu)，非特異性性反應(yīng)被抑制，從而顯著降低假陽(yáng)性實(shí)驗(yàn)的發(fā)生率，因此能夠在具備優(yōu)良準(zhǔn)確性和高度靈敏性的前提下，定性和定量確定樣品中的目標(biāo)抗體。作為本發(fā)明抗體測(cè)定裝置適用的測(cè)定樣品和目標(biāo)抗體，可以應(yīng)用，例如，(1)中提到的那些測(cè)定樣品和目標(biāo)抗體。本發(fā)明首次提供了一種至少包括第一區(qū)和第二區(qū)的固相支持物。第一區(qū)是所施用的樣品與該裝置接觸的區(qū)域，第二區(qū)是樣品中的抗體(可以是含有目標(biāo)抗體的總抗體)以配體-受體模式或者抗原-抗體模式進(jìn)行反應(yīng)和偶聯(lián)的區(qū)域，反應(yīng)結(jié)果以出現(xiàn)的標(biāo)記體現(xiàn)(反應(yīng)區(qū)和評(píng)價(jià)區(qū))。固相支持物上的上述反應(yīng)以如下方式安排，即點(diǎn)樣并進(jìn)入第一區(qū)的樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從所述第一區(qū)遷移到第二區(qū)。優(yōu)選地上述區(qū)域這樣安排，即進(jìn)入第一區(qū)的樣品全部或至少部分利用毛細(xì)管作用，基本上經(jīng)固相支持物的表面層，遷移到第二區(qū)。固相支持物可以任意地在第二區(qū)下游設(shè)有第三區(qū)，作為通過(guò)毛細(xì)管作用從第一區(qū)遷移到第二區(qū)并進(jìn)一步到達(dá)下游的樣品(液體)的吸收區(qū)。優(yōu)選固相支持物形成條帶狀，所述第一區(qū)和第二區(qū)以如下方式安排在條帶的一個(gè)并且是同一個(gè)平面上，即所施用的樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從第一帶(第一區(qū))遷移到第二帶第二區(qū))，并任意地進(jìn)一步遷移到第三帶(第三區(qū))。雖然所述固相支持物的優(yōu)選形式是如上面提到的條帶，然而也可以使用任何其它形狀或幾何體，只要本發(fā)明的固相支持物的期望功能能夠得以實(shí)現(xiàn)。固相支持物能夠吸收樣品(液體)，并且當(dāng)固相支持物被樣品浸濕時(shí)，至少能夠允許樣品中的抗體通過(guò)毛細(xì)管作用從固相支持物的第一區(qū)遷移到第二區(qū)，并任意地進(jìn)一步遷移到第三區(qū)。而且，固相支持物最好是能夠支持和固定這樣一種配體的支持物，所述配體能夠與樣品中含有的抗體(包括目標(biāo)抗體)反應(yīng)，從而能夠捕獲所述抗體。適當(dāng)?shù)墓滔嘀С治锇ù罅慷嗫撞牧?，例如，聚乙烯、玻璃纖維、纖維素、螺縈(人造絲)、尼龍、交聯(lián)葡聚糖、各種類(lèi)型的色譜紙、硝基纖維素、和濾紙。固相支持物的第一區(qū)、第二區(qū)和第三區(qū)，例如，可以分別由選自上述材料的同種或不同種成分構(gòu)成，材料的選擇依賴(lài)于各區(qū)域的作用和功能。固相支持物的第一區(qū)優(yōu)選由易于將所施用的樣品吸收到其表面并使樣品通過(guò)毛細(xì)管作用遷移到第二區(qū)的多孔材料構(gòu)成。適用于第一區(qū)的多孔材料沒(méi)有特別限制，但通?？梢允褂镁垡蚁?例如POREXPorexTechnologies，F(xiàn)airburn，Georgia)，玻璃纖維、人造絲、尼龍、以及包括紙?jiān)趦?nèi)的纖維素材料。優(yōu)選材料是多孔聚乙烯或例如濾紙等的纖維素材料。固相支持物的第二區(qū)優(yōu)選由滿(mǎn)足下列條件的多孔材料構(gòu)成，該條件是能夠允許樣品(液體)經(jīng)毛細(xì)管作用從第一區(qū)遷移到第二區(qū)，并且能夠承載樣品中存在的抗體(包括目標(biāo)抗體)的配體，而使配體不能通過(guò)毛細(xì)管作用移走。具有這些性質(zhì)的多孔材料包括濾紙、色譜紙、玻璃纖維、交聯(lián)葡聚糖、尼龍、硝基纖維素等。優(yōu)選材料是硝基纖維素，因?yàn)榕潴w能夠輕易地固定在其上。第二區(qū)設(shè)有試驗(yàn)帶，在試驗(yàn)帶固定有易于特異性識(shí)別并捕獲樣品中的目標(biāo)抗體的配體，還設(shè)有對(duì)照帶，在對(duì)照帶固定有易于識(shí)別并捕獲樣品中的任意抗體的配體。對(duì)照帶安排在偏離試驗(yàn)帶一定間隔的位置上，最好在試驗(yàn)帶毛細(xì)管流方向的下游，最好如下安排，以便使這兩個(gè)區(qū)域在同樣條件下被樣品液體的前沿接觸。試驗(yàn)帶中的配體沒(méi)有特別限制，只要它能夠與待測(cè)目標(biāo)抗體特異性偶聯(lián)，但優(yōu)選由目標(biāo)抗體特異性識(shí)別和結(jié)合的抗原(抗原-抗體反應(yīng))。作為上面提到的抗原，可以任意使用傳統(tǒng)血清抗體測(cè)定系統(tǒng)中應(yīng)用的常規(guī)抗原。這些抗原可以是例如病毒和細(xì)菌等的病原體本身，但也可以是含有各病原體固有抗原決定簇的物質(zhì)。因此可以應(yīng)用，例如，熱或輻照滅活的病原體、用表面活性劑等試劑提取病原體得到的抗原、以及化學(xué)合成或重組DNA技術(shù)人工制備的抗原。對(duì)照帶中的配體沒(méi)有特別限制，只要它能夠與樣品中的任意抗體偶聯(lián)，但優(yōu)選能夠特異性識(shí)別和結(jié)合尿中任意抗體的抗體(抗-免疫球蛋白抗體)。這些配體分別固定在試驗(yàn)帶和對(duì)照帶的多孔材料上，以至于它們不能在液體樣品的毛細(xì)管流作用下從各自區(qū)域移動(dòng)。因此，各配體結(jié)合到多孔材料的相應(yīng)位置上，從而當(dāng)?shù)诙^(qū)被含目標(biāo)抗體的樣品浸濕后，各配體將不能夠擴(kuò)散，只是保持固定在各自位置而不被運(yùn)輸?shù)焦滔嘀С治锏牡谌齾^(qū)?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員的公知技術(shù)，即物理結(jié)合或化學(xué)結(jié)合，實(shí)現(xiàn)配體在所述多孔材料上的固定。因此可以使用，例如，化學(xué)結(jié)合法例如共價(jià)結(jié)合法，例如疊氮法、多肽法(酰胺衍生物法、羧基氯化樹(shù)脂法、碳二亞胺樹(shù)脂法、馬來(lái)酸酐衍生物法、異氰酸酯衍生物法、溴化氰激活的多糖法、纖維素羧酸酯衍生物法、濃縮試劑法等)、烴化法、交聯(lián)劑偶聯(lián)法(用戊二醛、環(huán)己烯異氰酸酯等作為交聯(lián)劑偶聯(lián)到支持物上的方法)、Ugi反應(yīng)偶聯(lián)法等；離子結(jié)合法；以及物理吸附法。當(dāng)使用硝基纖維素作為第二區(qū)的多孔材料時(shí)，可以通過(guò)非共價(jià)結(jié)合常規(guī)固定所述配體。在第二區(qū)的試驗(yàn)帶中應(yīng)用的配體(抗原)的量?jī)?yōu)選過(guò)量，以便使可能存在于樣品中的目標(biāo)抗體基本上全部結(jié)合到試驗(yàn)帶上。在第二區(qū)的對(duì)照帶中應(yīng)用的配體(抗-免疫球蛋白抗體)的量也優(yōu)選過(guò)量，以便使樣品中的任意抗體(可以含有目標(biāo)抗體)全部結(jié)合到對(duì)照帶上。試驗(yàn)帶中目標(biāo)抗體和配體(具體地說(shuō)是抗原)之間的偶聯(lián)反應(yīng)優(yōu)選在存在大腸桿菌成分的情況下進(jìn)行?？梢酝ㄟ^(guò)在測(cè)定樣品的稀釋液中加入大腸桿菌成分，然后將混合物在第一區(qū)點(diǎn)樣，實(shí)現(xiàn)大腸桿菌成分介入反應(yīng)系統(tǒng)，或者可以將大腸桿菌成分可移動(dòng)地固定到固相支持物試驗(yàn)帶的上游(例如，所述第一區(qū)或下文將要描述的示蹤區(qū))。大腸桿菌成分沒(méi)有特別限制，只要它來(lái)源于上面提到的大腸桿菌。因此，它可以是細(xì)胞的蛋白質(zhì)組分，碳水化合物組分或脂類(lèi)組分，或者這些組分的混合物。通過(guò)提取細(xì)胞得到的可溶性組分或者脂多糖組分(LPS)作為優(yōu)選實(shí)例提到。隨著樣品在第一區(qū)點(diǎn)樣后，樣品通過(guò)毛細(xì)管作用遷移到第二區(qū)，在第二區(qū)樣品中的目標(biāo)抗體結(jié)合并固定到試驗(yàn)帶上，然后，樣品中其余的任意抗體(包括殘存的沒(méi)有結(jié)合到試驗(yàn)帶上的目標(biāo)抗體)結(jié)合并固定到試驗(yàn)帶下游的對(duì)照帶。本發(fā)明中的標(biāo)記工具用于檢測(cè)樣品中的目標(biāo)抗體和任意抗體是否已經(jīng)分別偶聯(lián)并固定到所述試驗(yàn)帶和對(duì)照帶上。標(biāo)記工具可以由抗體的配體和偶聯(lián)到所述配體上的可檢測(cè)標(biāo)記構(gòu)成?？贵w的配體沒(méi)有特別限制，只要它是能夠識(shí)別和結(jié)合樣品中存在的抗體的分子，在本發(fā)明中，它優(yōu)選是不僅能夠與樣品中存在的待測(cè)目標(biāo)抗體結(jié)合也能夠與任意抗體結(jié)合的分子。作為這種配體的實(shí)例，可以提及與對(duì)照帶中使用的相同的配體，具體地說(shuō)，即是適于用作對(duì)照帶中配體的同樣的抗-免疫球蛋白抗體。上面提到的抗-免疫球蛋白抗體包括用相關(guān)免疫球蛋白例如人免疫球蛋白作為免疫原，免疫任意動(dòng)物得到的抗血清、其純化產(chǎn)物(多克隆抗體)和單克隆抗體。作為對(duì)照帶中的配體的抗-免疫球蛋白抗體可以任意地為抗所有各類(lèi)抗體的抗體，以便它可以捕獲和檢測(cè)樣品中的總抗體，或者可以是抗所需類(lèi)型抗體例如免疫球蛋白G(IgG)的抗體。最好，該配體是這樣一種抗體，它抗與目標(biāo)抗體所屬同一類(lèi)型的抗體，這種安排是優(yōu)選的，因?yàn)楫?dāng)在對(duì)照帶檢測(cè)與目標(biāo)抗體同一類(lèi)型的抗體時(shí)，能夠獲得用于判斷檢測(cè)是否已經(jīng)適當(dāng)進(jìn)行的最佳指示，該分析不僅包括使用尿樣，還包括使用其它體液例如血清作為樣品。如果目標(biāo)抗體是IgG，所述標(biāo)記工具中的配體更優(yōu)選對(duì)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的配體，作為這種配體的優(yōu)選實(shí)例，包括對(duì)抗體IgG的輕鏈或其F(ab)區(qū)不反應(yīng)的抗-IgG抗體，或者對(duì)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的蛋白A、蛋白G等。這種抗-免疫球蛋白抗體或配體可以以常規(guī)方式制備，或者從商業(yè)來(lái)源購(gòu)買(mǎi)?？蓹z測(cè)標(biāo)記成分沒(méi)有特別限制，只要它是已知的或?qū)?lái)可能用到的用于特異性結(jié)合分析(具體地說(shuō)是免疫分析)可檢測(cè)標(biāo)記物[TatsuoIwasaki等單克隆抗體，KodanshaScientific，1984；EijiIshikawa等酶免疫分析，第2版，IgakuShoin，1982等]。優(yōu)選標(biāo)記物是在第二區(qū)的試驗(yàn)帶或?qū)φ諑е邪l(fā)生顏色改變的標(biāo)記物。雖然沒(méi)有限制，但是特別優(yōu)選不需要借助任何裝置即可觀察識(shí)別其顏色改變的標(biāo)記物。例如，涉及如熒光物質(zhì)和吸收染料等的各種色原體。還有，更優(yōu)選的是含有可觀察檢測(cè)的標(biāo)記的粉末狀標(biāo)記物。適當(dāng)?shù)念w粒狀標(biāo)記物包括聚合物顆粒(例如乳膠顆?；蚓郾揭蚁╊w粒)、包封體、脂質(zhì)體、金屬性凝膠(例如膠體銀、膠體金等)、以及聚苯乙烯染料顆粒。其中，優(yōu)選金屬凝膠例如膠體銀和膠體金。可以按照傳統(tǒng)方式，將這種標(biāo)記物化學(xué)偶聯(lián)或物理偶聯(lián)到配體上，制備標(biāo)記配體，也可以使用商業(yè)產(chǎn)品?？梢杂糜诒景l(fā)明的標(biāo)記工具可以是滿(mǎn)足下列條件的任何標(biāo)記物，即當(dāng)將標(biāo)記物提供給固相支持物的第二區(qū)(包括試驗(yàn)帶和對(duì)照帶)后，它可以指示樣品中存在的抗體在第二區(qū)中發(fā)生的反應(yīng)的結(jié)果，只要能夠?qū)崿F(xiàn)這種功能，對(duì)于它的存在方式?jīng)]有特別限制。例如，當(dāng)本發(fā)明的測(cè)定裝置是流體通過(guò)裝置的形式，抗體測(cè)定試劑盒中含有的標(biāo)記工具可以獨(dú)立于固相支持物。優(yōu)選標(biāo)記工具可移動(dòng)地固定在固相支持物上，更優(yōu)選標(biāo)記工具可移動(dòng)地固定在固相支持物上的第二區(qū)上游。特別優(yōu)選的方式是標(biāo)記工具固定在固相支持物第一區(qū)和第二區(qū)間的中間區(qū)域(下文稱(chēng)為示蹤區(qū))。在這種應(yīng)用方式中，提供給第一區(qū)的樣品通過(guò)毛細(xì)管作用遷移到示蹤區(qū)，在此處樣品與標(biāo)記配體接觸形成目標(biāo)抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物和任意抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物。通過(guò)示蹤區(qū)之后，含上述復(fù)合物的樣品通過(guò)毛細(xì)管作用繼續(xù)遷移到第二區(qū)。分布在第二區(qū)的試驗(yàn)帶中的配體(抗原)對(duì)目標(biāo)抗體具有特異性，分布在對(duì)照帶中的配體(抗-免疫球蛋白抗體)對(duì)任意抗體具有特異性。因此，通過(guò)毛細(xì)管作用遷移過(guò)來(lái)的目標(biāo)抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物首先被捕獲在試驗(yàn)帶，之后樣品中剩余的任意抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物(包括目標(biāo)抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物)被捕獲在對(duì)照帶。固相支持物的示蹤區(qū)沒(méi)有特別限制，只要它是能夠?qū)⒑心繕?biāo)抗體和任意抗體的測(cè)試樣品從第一區(qū)運(yùn)輸?shù)降诙^(qū)的支持物，并且該支持物能夠支持所述標(biāo)記配體，并使標(biāo)記配體可以隨毛細(xì)管流釋放。通常，它是由聚乙烯、玻璃纖維、人造絲、尼龍、或者包括紙?jiān)趦?nèi)的纖維素材料制成的多孔構(gòu)件。優(yōu)選難以存在非特異性吸附的材料，例如任選地用聚乙烯醇(PVA)處理的玻璃纖維。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中有這樣一個(gè)實(shí)施方案，其中在固相支持物上，第二區(qū)中的所述示蹤區(qū)和所述試驗(yàn)帶之間存在一定間隔。當(dāng)在示蹤區(qū)和試驗(yàn)帶之間安排這樣一個(gè)間隔區(qū)后，使樣品在到達(dá)第二區(qū)的試驗(yàn)帶之前，樣品中即將與示蹤區(qū)中的標(biāo)記配體接觸的抗體在此與標(biāo)記配體混合，由此更有效地保證了抗體和標(biāo)記配體之間的偶聯(lián)反應(yīng)。因此，該區(qū)提供了一種在樣品中目標(biāo)抗體和任意抗體分別與試驗(yàn)帶和對(duì)照帶接觸之前，目標(biāo)抗體和任意抗體與標(biāo)記配體偶聯(lián)的保溫環(huán)境(時(shí)間和空間)。另外，本發(fā)明的固相支持物還可以在第二區(qū)下游安置第三區(qū)。樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從第一區(qū)連續(xù)遷移到任選示蹤區(qū)和第二區(qū)，并進(jìn)一步遷移到第三區(qū)。因此，第三區(qū)的功能在于接受通過(guò)毛細(xì)管作用從第二區(qū)遷移來(lái)的液體。通常第三區(qū)僅需具備接受未結(jié)合到第二區(qū)的液體成分的功能，但也可以進(jìn)一步安置這樣一個(gè)區(qū)域，即能夠當(dāng)樣品毛細(xì)管流(即液體前沿)進(jìn)入固相支持物的預(yù)定終點(diǎn)區(qū)時(shí)提供測(cè)定完成的信息。為實(shí)現(xiàn)上述目的，可以在固相支持物的第二區(qū)下游安置可觀察指示劑區(qū)，該區(qū)含有例如赤蘚紅B、堿性藏紅O、酚紅等水溶性染料。在這種情況下，當(dāng)樣品的液體前沿從第二區(qū)遷移到第三區(qū)，該前沿流過(guò)指示劑區(qū)，分布在該區(qū)的染料隨樣品毛細(xì)管流(液體)向下游移動(dòng)，因此顯示樣品已經(jīng)連續(xù)通過(guò)第一區(qū)、示蹤區(qū)和第二區(qū)(試驗(yàn)帶和對(duì)照帶)的信息，根據(jù)這種信息判斷檢測(cè)剛剛完成。第三區(qū)的材料沒(méi)有特別限制，只要它能夠吸收樣品(液體)，因此包括聚乙烯、人造絲、尼龍和包括紙?jiān)趦?nèi)的纖維素材料構(gòu)成的多孔薄膜或片層。優(yōu)選材料是纖維素材料例如紙。下面結(jié)合顯示本抗體測(cè)定裝置及其組成構(gòu)件的附圖，詳細(xì)描述本發(fā)明。然而應(yīng)該理解舉例說(shuō)明的裝置僅是本發(fā)明的實(shí)施例，而絕不是對(duì)本發(fā)明的限定。圖1是顯示一種條帶狀固相支持物(60×5mm)作為本發(fā)明裝置組件的示意圖。圖1中，標(biāo)號(hào)1表示第一區(qū)(16×5mm，0.92mm厚)，檢測(cè)樣品在此處點(diǎn)樣，并與所述條帶狀物接觸；標(biāo)號(hào)2表示示蹤區(qū)(5×5mm，0.79mm厚)，標(biāo)記配體(例如膠體金標(biāo)記的人IgG抗體)固定在此處；標(biāo)號(hào)3表示第二區(qū)(18×5mm，0.1mm厚)，樣品中的抗體在此發(fā)生反應(yīng)，并顯示結(jié)果；標(biāo)號(hào)4表示第三區(qū)(22×5mm，1.46mm厚)，從第一區(qū)和第二區(qū)遷移過(guò)來(lái)的樣品在此被吸收。第一區(qū)的厚度通常為0.2-2mm，優(yōu)選0.8-1.2mm，示蹤區(qū)的厚度通常為0.2-1.5mm，優(yōu)選0.5-1mm。第二區(qū)的厚度通常為0.03-0.2mm，優(yōu)選0.08-0.12mm，第三區(qū)的厚度通常為0.5-3mm，優(yōu)選1-2mm。然而，上述范圍并不嚴(yán)格。在所述第二區(qū)(3)內(nèi)分布有試驗(yàn)帶(試驗(yàn)線，約1×5mm)(5)，對(duì)目標(biāo)抗體具有特異親合力的配體固定在該位置上，第二區(qū)(3)內(nèi)還分布有對(duì)照帶(對(duì)照線，約1×5mm)(6)，對(duì)任意抗體具有親合力的配體(抗-人免疫球蛋白抗體)固定在此處。試驗(yàn)帶(5)安置在距示蹤區(qū)一定距離(約6mm)的位置上，對(duì)照帶(6)安置在距試驗(yàn)帶(5)一定距離(約6mm)的位置上。試驗(yàn)帶具有特異地與樣品中的目標(biāo)抗體反應(yīng)，以及在存在標(biāo)記物的情況下指示樣品中是否存在目標(biāo)抗體的功能，對(duì)照帶具有在存在標(biāo)記物的情況下指示應(yīng)用的樣品合適與否的功能。構(gòu)成固相支持物條帶第一區(qū)、示蹤區(qū)、第二區(qū)和第三區(qū)的材料(支持物)可以簡(jiǎn)單地沿支持物條帶的縱向即樣品遷移的方向串聯(lián)，連接方式?jīng)]有特別限制。然而優(yōu)選第一區(qū)縱向前端和示蹤區(qū)后端之間的連接、示蹤區(qū)前端和第二區(qū)后端之間的連接、以及第二區(qū)前端和第三區(qū)后端之間的連接分別是相互重疊的。更優(yōu)選的是如圖1所說(shuō)明的那樣，第一區(qū)的縱向前端部分疊加在示蹤區(qū)的后端部分上。第三區(qū)的后端部分可以疊加在第二區(qū)的前端部分上。按照這樣連接方式，點(diǎn)樣于第一區(qū)的樣品可以在條帶的縱向上平滑遷移?？v向上條帶的寬度沒(méi)有特別限制，可以為例如0.5-10mm，優(yōu)選1-2mm，更優(yōu)選0.8-1.2mm。應(yīng)該理解在條帶的重疊結(jié)構(gòu)中各區(qū)的頂端/底端關(guān)系不限于上述提及的關(guān)系，而可以是相反的關(guān)系。為了方便使用，上述固相支持物優(yōu)選裝配成測(cè)試單元的形式。下面參考圖2解釋本發(fā)明測(cè)定裝置的分析原理。(3)固相測(cè)定方法本發(fā)明的第三方面為利用上述裝置的固相測(cè)定方法，尤其是測(cè)定樣品中目標(biāo)抗體的固相測(cè)定方法，它包括使樣品與抗體測(cè)定裝置的第一區(qū)接觸，在第二區(qū)的對(duì)照帶指示顏色的條件下檢測(cè)第二區(qū)試驗(yàn)帶中顏色的形成狀況。該分析中，首先將懷疑含有目標(biāo)抗體的樣品在固相支持物的第一區(qū)(1)點(diǎn)樣。對(duì)于應(yīng)用的樣品，可以應(yīng)用體液例如尿液原樣或做適當(dāng)稀釋后使用。該稀釋液沒(méi)有特別限制，包括pH在約5-9范圍內(nèi)，優(yōu)選約6.5-8.5范圍內(nèi)具有緩沖作用的各種緩沖液(例如檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、tris緩沖液、乙酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液等)、以及表面活性劑等。由于存在大腸桿菌成分的情況下，可以抑制抗原-抗體反應(yīng)中的非特異性反應(yīng)，從而降低假陽(yáng)性試驗(yàn)的發(fā)生率，因此優(yōu)選使用含例如大腸桿菌成分的稀釋液。加入稀釋液的大腸桿菌成分(LPS)的量沒(méi)有特別限制，但最好為，例如，在反應(yīng)系統(tǒng)，即試驗(yàn)帶中，每μg配體(抗原)提供約0.1-10μg，優(yōu)選約0.5-5μg所述成分。加入樣品的大腸桿菌成分(LPS)的量可以為，例如，通常不少于5μg/ml，優(yōu)選5-100μg/ml，更優(yōu)選1)-50μg/ml。盡管不限制應(yīng)用超過(guò)100μg/ml的量，但是大腸桿菌成分的添加量達(dá)到100μg/ml時(shí)，就能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的效果。當(dāng)樣品點(diǎn)樣到第一區(qū)(1)后，第一區(qū)被浸濕。應(yīng)用的樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從第一區(qū)(1)流動(dòng)到示蹤區(qū)(2)，并與可逆地固定在示蹤區(qū)的標(biāo)記配體(膠體金標(biāo)記的抗-人IgG抗體)接觸并反應(yīng)。當(dāng)使用適當(dāng)?shù)臉悠?，并且樣品中含有目?biāo)抗體時(shí)，樣品中含有的目標(biāo)抗體和任意抗體與示蹤區(qū)(2)內(nèi)的所述標(biāo)記配體偶聯(lián)，分別形成目標(biāo)抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物和任意抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物。當(dāng)上述復(fù)合物通過(guò)示蹤區(qū)(2)后，各自的復(fù)合物或沒(méi)有形成這些復(fù)合物的標(biāo)記配體隨樣品一起運(yùn)輸?shù)绞聚檯^(qū)(2)的下游。在一個(gè)優(yōu)選方式中，當(dāng)尚未形成復(fù)合物的標(biāo)記配體隨包含抗體的樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從示蹤區(qū)(2)向第二區(qū)(3)的試驗(yàn)帶(5)移動(dòng)時(shí)，給予其足夠時(shí)間(空間)以形成復(fù)合物。當(dāng)樣品到達(dá)第二區(qū)的試驗(yàn)帶(5)，樣品中的目標(biāo)抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物與固定在試驗(yàn)帶(5)上的配體偶聯(lián)，并被原位固定。樣品通過(guò)毛細(xì)管作用繼續(xù)向下游遷移，到達(dá)對(duì)照帶(6)，在此處任意抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物與該帶中的配體(抗-人免疫球蛋白抗體)偶聯(lián)，并固定于此。然后，根據(jù)標(biāo)記配體的標(biāo)記成分，檢測(cè)固定在試驗(yàn)帶(5)和對(duì)照帶(6)中的復(fù)合物，測(cè)定結(jié)果指示為陽(yáng)性試驗(yàn)。相反，當(dāng)不含目標(biāo)抗體的樣品點(diǎn)樣后，在試驗(yàn)帶(5)中不形成所述固定的目標(biāo)抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物，從而在該試驗(yàn)帶(5)中不能檢測(cè)到標(biāo)記物(陰性試驗(yàn))。在上述研究中，試驗(yàn)帶(5)中指示的陰性試驗(yàn)包括因?yàn)闃悠窛舛忍?即樣品中抗體總量很小)導(dǎo)致的陰性(假陰性)試驗(yàn)和因?yàn)闃悠分腥狈δ繕?biāo)抗體導(dǎo)致的陰性試驗(yàn)(真陰性)。按照試驗(yàn)帶(5)的單獨(dú)結(jié)果還不能將這些陰性試驗(yàn)彼此區(qū)別開(kāi)來(lái)。然而，在假陰性試驗(yàn)中，對(duì)照帶(6)中不形成所述任意抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物，因此對(duì)照帶給出陰性指示，而在真陰性試驗(yàn)情況下，對(duì)照帶(6)形成所述任意抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物，因此對(duì)照帶給出陽(yáng)性指示。因此，根據(jù)對(duì)照帶的指示是陰性還是陽(yáng)性，可以鑒別試驗(yàn)帶(5)中的陰性結(jié)果是假陰性或是真陰性試驗(yàn)。另外，當(dāng)在適當(dāng)系統(tǒng)中使用了失活標(biāo)記配體，或者沒(méi)有進(jìn)行適當(dāng)?shù)臏y(cè)定時(shí)，對(duì)照帶(6)就會(huì)給出陰性指示，從而防止由于這類(lèi)原因?qū)е碌募訇幮栽囼?yàn)結(jié)果。含所有未結(jié)合抗體、標(biāo)記配體等的液體樣品連續(xù)從第二區(qū)(3)下游遷移到第三區(qū)(4)。在這種情況下，可以任意地設(shè)置指示劑區(qū)，這種情況下，當(dāng)液體前沿將指示劑區(qū)的染料運(yùn)載到終點(diǎn)區(qū)，從而指示出液體和染料穿過(guò)第三區(qū)的流動(dòng)軌跡，并且指示測(cè)定的結(jié)束。圖3顯示本發(fā)明抗體測(cè)定裝置在水平位置應(yīng)用的示例。包括第一區(qū)(1)、示蹤區(qū)(2)、第二區(qū)(3)(包括試驗(yàn)帶(5)和對(duì)照帶(6))以及第三區(qū)(4)的固相支持物(A)容納在一個(gè)由適當(dāng)材料制成的外殼(B)中。盡管也可以使用例如玻璃、金屬和紙等其它材料，但是保護(hù)罩材料優(yōu)選可塑性塑料材料，例如聚苯乙烯。保護(hù)罩由具有若干孔隙的上部分(7)和下部分(8)構(gòu)成，固相支持物設(shè)置在保護(hù)罩的下部分(8)上，然后將上部分覆蓋到其上。保護(hù)罩上部分的孔隙(9)和(10)與固相支持物的連續(xù)各區(qū)平行排列，并且在位置上分別對(duì)應(yīng)于固相支持物的第一區(qū)(1)和第二區(qū)(3)。樣品可以從孔隙(9)(進(jìn)樣口)加入支持物的第一區(qū)(1)?？紫?9)優(yōu)選設(shè)置有圍繞該孔向外突出的壁，從而該壁可以幫助液體樣品滴加到支持物的第一區(qū)上。使樣品與固相支持物的第一區(qū)接觸的方法沒(méi)有特別限制，但優(yōu)選使樣品從所述進(jìn)樣口垂直滴加到固相支持物平面上?？紫?10)設(shè)置在能夠觀察評(píng)價(jià)固相支持物第二區(qū)的試驗(yàn)帶和對(duì)照帶的位置上，由此，可以觀察確定試驗(yàn)帶中固定的標(biāo)記配體/目標(biāo)抗體復(fù)合物和對(duì)照帶中固定的標(biāo)記配體/任意抗體復(fù)合物(檢測(cè)窗，評(píng)價(jià)窗)?？紫?10)不必是能夠觀察評(píng)價(jià)試驗(yàn)帶和對(duì)照帶的單一孔隙，可以包括分別用于試驗(yàn)帶和對(duì)照帶的兩個(gè)獨(dú)立窗口。應(yīng)用本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置，將測(cè)定系統(tǒng)靜置幾分鐘到30分鐘，優(yōu)選5-20分鐘，點(diǎn)樣后通常溫度不超過(guò)45℃，優(yōu)選4-40℃，更優(yōu)選約15-30℃，可以高度準(zhǔn)確地確定樣品中是否存在目標(biāo)抗體，以及目標(biāo)抗體的存在量。(4)抗體測(cè)定試劑盒當(dāng)使用一種包含全套各種試劑和抗體測(cè)定必須裝備的抗體測(cè)定試劑盒時(shí)，可以更便捷地進(jìn)行(1)中描述的抗體測(cè)定方法或利用(2)中描述的抗體測(cè)定裝置的固相測(cè)定法。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種抗體測(cè)定試劑盒，以便簡(jiǎn)化所述抗體測(cè)定法和所述固相測(cè)定法的操作。按照本發(fā)明的抗體測(cè)定試劑盒可以用于通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)和定量樣品中抗體，作為一個(gè)優(yōu)選方式，本發(fā)明抗體測(cè)定試劑盒包括所述大腸桿菌成分作為試劑盒成分之一的試劑盒。這種試劑盒進(jìn)一步含有任選固定的適合與待測(cè)目標(biāo)抗體進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)的抗原、抗體測(cè)定試劑等。另外，為了方便檢測(cè)，該試劑盒可以進(jìn)一步包括適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)介質(zhì)、稀釋液、清洗緩沖液、反應(yīng)終止劑和/或標(biāo)記活性檢測(cè)試劑。而且，作為另一種實(shí)施方式，本發(fā)明的抗體測(cè)定試劑盒可以包括對(duì)目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親和力的試劑，優(yōu)選Fc-特異性抗-IgG抗體。作為另外一種替換方式，本發(fā)明的抗體測(cè)定試劑盒可以包括所述抗體測(cè)定裝置。該試劑盒可以進(jìn)一步含有所述大腸桿菌成分或所述對(duì)目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親和力的物質(zhì)或者二者均含有。而且，該試劑盒除了包含所述反應(yīng)介質(zhì)、稀釋液、清洗緩沖液、反應(yīng)終止劑、和標(biāo)記活性檢測(cè)試劑外，還可以進(jìn)一步含有例如移液管和安瓿(管)等用于樣品稀釋附件。發(fā)明的最佳實(shí)施方式下列實(shí)施例的目的在于進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，決不應(yīng)該構(gòu)成對(duì)本發(fā)明技術(shù)范圍的限定。應(yīng)該理解本領(lǐng)域技術(shù)人員在本發(fā)明上述公開(kāi)內(nèi)容的基礎(chǔ)上，可以進(jìn)行不偏離本發(fā)明技術(shù)范圍的任意改變和修飾。實(shí)施例1H.pylori的測(cè)定(1)H.pylori抗原的制備H.pylori(臨床分離株)在Brucella瓊脂培養(yǎng)基(Becton)上培養(yǎng)48小時(shí)(10％CO2，5％O2，37℃)，收獲成熟細(xì)胞放入冷PBS。細(xì)胞用冷PBS離心清洗5次，加入冷PBS制備100mg/ml的細(xì)胞濃縮液。攪拌情況下，加入等量冷的0.2％TritonX-100/PBS?；旌衔飻嚢?分鐘，離心，收集上清液即H.pylori抗原溶液，-80℃儲(chǔ)藏。(2)H.pylori抗原平板的制備將上述H.pylori抗原溶液(2.5μg蛋白質(zhì)/ml)加入96-孔平板，每孔100μl，4℃保溫過(guò)夜。用PBS清洗各孔一次后，加入封閉液(Dulbecco-PBS[D-PBS]，1％BSA，5％山梨醇，0.05％NaN3[pH7.4])，每孔300μl，然后使平板在4℃保溫過(guò)夜。棄去封閉液后，平板在25℃干燥過(guò)夜，與干燥劑一起密封在鋁袋中，4℃儲(chǔ)藏備用。(3)E.coli成分的制備大腸桿菌(pvc18/JM109，TakaraShuzo)在含安芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基(Luria-Bertani培養(yǎng)基，NipponSeiyaku)中于37℃培養(yǎng)18小時(shí)。離心培養(yǎng)物收集細(xì)胞，然后用2份PBS清洗。將冷PBS加入清洗過(guò)的細(xì)胞，使?jié)舛葹?00mg/ml，用超聲儀(10秒×3)破碎并提取混合物。回收上清液作為大腸桿菌成分，于-80℃儲(chǔ)藏(下文稱(chēng)為E.coli提取物)。(4)尿中抗-H.pylori抗體的測(cè)定使用尿作為樣品，測(cè)定樣品中的抗-H.pylori抗體。在(2)中制備的H.pylori抗原平板的各孔中，加入含20μg蛋白質(zhì)/mlE.coli提取物的第一緩沖液(200mMTris-HCl緩沖液，0.14MNaCl，2％酪蛋白，0.5％BSA，0.05％Tween20，0.1％NaN3[pH7.3])25μl和尿樣100μl?；旌衔镎鹗?0秒，在37℃靜置1小時(shí)。用6份PBST(PBS中含有0.05％Tween20和0.1％NaN3)清洗各孔，加入100μl用第二緩沖液(50mMTris-HCl緩沖液，0.14MNaCl，0.5％BSA，5％山羊血清，0.05％Tween20，0.1％XL-II[pH7.3])稀釋11,000倍的酶(HRP)標(biāo)抗-人IgG抗體(過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的同源純山羊抗-人IgG(Fc)，JacksonImmunoResearch)稀釋液。平板在37℃靜置1小時(shí)，然后用6份PBST清洗。然后，加入100μl顯色液(50mM檸檬酸鹽-Na2HPO4，50％TMB溶液，0.0075％H2O2)，室溫下反應(yīng)20分鐘，隨后加入100μl反應(yīng)終止劑(50％TMB終止溶液，50％1N-H2SO4)，然后測(cè)定吸光率。(5)結(jié)果(i)通過(guò)13C-UBT試驗(yàn)(它被認(rèn)為是目前應(yīng)用的所有診斷幽門(mén)螺旋桿菌感染方法中最準(zhǔn)確的方法)診斷為H.pylori陽(yáng)性的5例病例和H.pylori陰性的5例病例中，以尿作為樣品，用(4)中描述的程序檢測(cè)尿中的抗-H.pylori抗體。作為對(duì)照試驗(yàn)，用不加E.coli提取物的同樣的尿樣進(jìn)行同樣的程序，基于得到的結(jié)果，評(píng)價(jià)本發(fā)明附加E.coli提取物的效果。數(shù)據(jù)如圖4所示。圖4中，縱坐標(biāo)代表吸光率(O.D.450-650nm)，橫坐標(biāo)代表加(+)和不加(-)E.coli提取物。另外，空心圓代表經(jīng)13C-UBT試驗(yàn)判定為幽門(mén)螺旋桿菌陽(yáng)性病人的尿樣結(jié)果。實(shí)心圓代表經(jīng)13C-UBT試驗(yàn)判定為幽門(mén)螺旋桿菌陰性病人的尿樣結(jié)果。從圖4可以看出，按照本發(fā)明在存在E.coli提取物的情況下進(jìn)行測(cè)定，可以清楚地區(qū)別幽門(mén)螺旋桿菌陽(yáng)性和陰性病例，并與13C-UBT試驗(yàn)保持一致，因此本發(fā)明方法的高度精確性得以認(rèn)可。(ii)利用99個(gè)沒(méi)有幽門(mén)螺旋桿菌根除治療史的健康志愿者的尿樣，按照(4)中描述的程序在存在E.coli提取物的情況下測(cè)定尿樣中的抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體。結(jié)果如圖5所示。圖5中，縱坐標(biāo)代表吸光率(O.D.450nm)，橫坐標(biāo)代表根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)建立的組(陽(yáng)性和陰性病例)。結(jié)果表明，含E.coli提取物的測(cè)定系統(tǒng)中，所有來(lái)自陰性病例的尿樣給出確切的陰性結(jié)果，而不存在假陽(yáng)性結(jié)果。(iii)用商品化的ELISA試劑盒確定參與試驗(yàn)(ii)的相同受試者血清中的抗幽門(mén)螺旋桿菌抗體的量，在靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性方面，將得到的結(jié)果與用本發(fā)明方法測(cè)定尿樣得到的結(jié)果相比較。上述各受試者的血清和尿樣都是同步收集和制備用于檢測(cè)的。商品ELISA試劑盒如下HM-CAPTM試劑盒，腸道產(chǎn)品(HM-CAP)；HelicoGTM試劑盒，ShieldDiagnostic(HelicoG)；以及HEL-PTM試劑盒，AmradBiotech(HEL-p)。按照各試劑盒上標(biāo)明的方案進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果如表1所示。表1</tables>關(guān)于表1，“靈敏度”指用各試劑盒檢測(cè)幽門(mén)螺旋桿菌-陽(yáng)性受試者(根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)的陽(yáng)性感染n＝70)產(chǎn)生的陽(yáng)性率，“特異性”指用各試劑盒檢測(cè)幽門(mén)螺旋桿菌-陰性受試者(根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)的陰性感染n＝49)產(chǎn)生的陰性率，“準(zhǔn)確性”指各試劑盒的準(zhǔn)確結(jié)果占總量(70+49＝119位患者)的百分比。顯然，與傳統(tǒng)血液抗體測(cè)定試劑盒相比，盡管使用僅含痕量抗體的尿樣，用本發(fā)明的方法測(cè)定抗幽門(mén)螺旋桿菌抗體仍得到較高的檢測(cè)靈敏度和特異性以及明顯較高的準(zhǔn)確性。(6)尿中的抗幽門(mén)螺旋桿菌抗體的測(cè)定用含E.coliLPS(Difco)(LPS濃度為5μg/孔)的第一緩沖液替換E.coli提取物，其余重復(fù)程序(4)，測(cè)定尿樣中抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體，按照(5)(i)中的同樣方式評(píng)價(jià)結(jié)果。結(jié)果如圖6所示。從圖中可以清楚地看到，應(yīng)用E.coliLPS替換所述E.coli提取物得到相似結(jié)果。實(shí)施例2抗-乙肝病毒(HBc)抗體的測(cè)定(1)抗-乙肝病毒(HBc)抗體的測(cè)定按照實(shí)施例1(2)的程序，用HBc抗原(ChemiconInternational)制備抗原平板，按照實(shí)施例1(4)測(cè)定尿樣中抗-乙肝(核心)(Hbc)抗體。據(jù)此，將25μl含不同濃度E.coli提取物的第一緩沖液和100μl尿樣加入HBc抗原平板的各孔，振蕩10秒鐘后，將平板在37℃靜置1小時(shí)。用6份PBST清洗平板后，加入100μl用第二緩沖液稀釋11000倍的酶(HRP)-標(biāo)抗-人IgG抗體稀釋液，將平板在37℃靜置1小時(shí)，然后清洗(6倍量PBST)。然后，加入100μl顯色劑，室溫下反應(yīng)20分鐘，加入100μl反應(yīng)終止劑后，測(cè)定吸光率。(2)結(jié)果對(duì)于用商品化抗-HBc抗體測(cè)定試劑盒(Dinabott)確定的5例血液抗-HBc抗體陽(yáng)性和5例血液抗-HBc抗體陰性病例，再用(1)中描述的程序測(cè)定尿中的抗-HBc抗體。反應(yīng)混合物中E.coli提取物的濃度分別定為0，0.78，1.56，3.13，6.25，和12.5μg/ml，評(píng)價(jià)附加上述提取物的效果。結(jié)果如圖7所示。在圖7中，縱坐標(biāo)代表吸光率(O.D.450-650nm)，橫坐標(biāo)代表附加E.coli提取物的濃度。另外，實(shí)心圓表示血液抗-HBc抗體陽(yáng)性患者尿抗體的數(shù)據(jù)。空心圓表示血液抗-HBc抗體陰性患者尿抗體的數(shù)據(jù)。從圖中可以看出，甚至當(dāng)使用尿樣時(shí)，與附加E.coli提取物時(shí)測(cè)定的水平相比，血液抗-HBc抗體陽(yáng)性患者組和抗-HBc抗體陰性患者組之間的抗-HBc抗體檢測(cè)水平的差異更顯著。實(shí)施例3利用由已知測(cè)定方法[CalypteTMHIV-1UrineEIAArch.Pathol.Lab.Med.，119，139-141(1995)；臨床感染性疾病，19，1100-1104(1994)]測(cè)定尿中抗-HIV抗體時(shí)為假陽(yáng)性試驗(yàn)的尿樣，進(jìn)行考察試驗(yàn)以鑒別在上述測(cè)定系統(tǒng)中可能導(dǎo)致非特異性反應(yīng)的成分。(1)用1M磷酸鹽緩沖液(pH7.7)將上述各尿樣調(diào)整到pH7.4，經(jīng)5.0，0.8和0.2μm-截留濾器過(guò)濾。從上述濾液中取20ml經(jīng)超濾濃縮(10kDa-截留膜)至2ml。濃縮的尿液進(jìn)行凝膠滲透層析(SephacrylS-300，Pharmacia)，檢測(cè)各組分對(duì)HIV抗原的反應(yīng)力。通過(guò)將各組分與用固定化HIV抗原(gp160)制備的HIV抗原-固定化平板反應(yīng)，并用ALP-標(biāo)記的山羊抗-人(IgG+IgM)抗體、ALP-標(biāo)記的山羊抗-人IgG(Fc-特異性)抗體或HRP-標(biāo)記的山羊抗-人IgG(Fab-特異性)抗體(均由JacksonImmunoResearchLabs提供)檢測(cè)結(jié)合體(非特異性結(jié)合成分)，從而確定HIV抗原的反應(yīng)力。結(jié)果如圖8所示。在圖8中，縱坐標(biāo)表示吸光率(O.D.)，橫坐標(biāo)表示凝膠滲透層析組分(組分號(hào))。實(shí)線代表蛋白質(zhì)在280nm的吸光率，實(shí)心圓代表用所述抗-人(IgG+IgM)抗體檢測(cè)的結(jié)果，空心三角線代表用所述抗-人IgG(Fc-特異性)抗體檢測(cè)的結(jié)果，實(shí)心三角線代表用所述抗-人IgG(Fab-特異性)抗體檢測(cè)的結(jié)果。從圖8可以觀察到，在用抗-人IgG(Fab-特異性)抗體檢測(cè)過(guò)程中，反應(yīng)模式(與非特異性結(jié)合成分的反應(yīng)力)與用抗-人(IgG+IgM)抗體檢測(cè)過(guò)程中的反應(yīng)模式相同，而用抗-人IgG(Fc-特異性)抗體檢測(cè)卻沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何反應(yīng)。該結(jié)果意味著上述非特異性結(jié)合成分是人IgG的片段或失活產(chǎn)物，其保留與沒(méi)有Fc區(qū)的抗-人IgG(Fab-特異性)抗體的反應(yīng)力。因此，顯然，當(dāng)使用不與上述非特異性結(jié)合成分反應(yīng)的抗-人IgG(Fc-特異性)抗體作為測(cè)定試劑時(shí)，抗體測(cè)定系統(tǒng)中的非特異反應(yīng)能夠被抑制，因此也抑制了基于這種非特異反應(yīng)的假陽(yáng)性試驗(yàn)的發(fā)生率，這樣就提供了一種高度特異和非常準(zhǔn)確的抗體測(cè)定法。實(shí)施例4尿中抗-HIV抗體的測(cè)定將25μl第一緩沖液(CalypteTMHIV-IUrineEIA的樣品緩沖液)和200μl尿樣加入HIV抗原平板(CalypteTMHIV-IUrineEIA，CalypteBiomedicalCorp.)的每一個(gè)孔中，振蕩10秒鐘后，將平板在37℃靜置1小時(shí)。清洗平板6次(清洗緩沖液D-PBS，0.05％Tween20)后，加入100μl用第二緩沖液(50mMTris-HCl緩沖液，0.14MNaCl，0.5％BSA，5％山羊血清，0.05％Tween20，0.1％XL-II[pH7.3])稀釋11,000倍的HRP標(biāo)山羊抗-人IgG(Fc-特異性)抗體(過(guò)氧化物酶-結(jié)合的同源純山羊抗-人IgG，F(xiàn)c片段特異性，JacksonResearchLab.)稀釋液，平板在37℃靜置1小時(shí)，然后以上述同樣方式清洗(6次)。然后，加入100μl顯色液(50％TMB溶液，50mM檸檬酸鹽-Na2HPO4，0.0075％H2O2)，室溫下反應(yīng)10分鐘，隨后加入100μl反應(yīng)終止劑(50％TMB終止溶液，50％1N-H2SO4)，然后測(cè)定吸光率。作為對(duì)照試驗(yàn)，用已知測(cè)定法[CalypteTMHIV-IUrineEIAArch.Pathol.Lab.Med.，119，139-141(1995)；臨床感染性疾病，19，1100-1104(1994)](對(duì)照方法)分析上述樣品，該對(duì)照法使用ALP-標(biāo)記的山羊抗-人免疫球蛋白作為第二抗體。另外，通過(guò)本發(fā)明的上述分析方法測(cè)定上述分析試劑盒的陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。因?yàn)閷?duì)這樣建立的吸收值和用上述試劑盒建立的吸收值進(jìn)行了比較，所以按照上述同樣試劑盒的臨界點(diǎn)計(jì)算法，本發(fā)明方法的臨界點(diǎn)確定為在上述陰性對(duì)照的平均吸收值上加0.180得到的值。血清抗-HIV抗體陽(yáng)性(2例)和血清抗-HIV抗體陰性(98例)共100個(gè)受試者的樣品(尿液)的測(cè)定結(jié)果如表2所示。表2>*4個(gè)受試者中，2個(gè)受試者為血清抗-HIV抗體陽(yáng)性。從表2可以看出，雖然本發(fā)明方法的靈敏度和對(duì)照方法的靈敏度均為100％(2/2)，然而對(duì)照方法的特異性為71.4％(70/98)，本發(fā)明方法的特異性為98％(96/98)。上述結(jié)果表明，與對(duì)照方法相比，本發(fā)明抗體測(cè)定方法的假陽(yáng)性發(fā)生率顯著較低，且特異性非常高。實(shí)施例5尿中抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體的測(cè)定(1)幽門(mén)螺旋桿菌抗原平板的制備在用振蕩器不斷振蕩的條件下，將等體積0.2％的冷Triton-X溶液加入按照常規(guī)方法[臨床微生物雜志，292587-2589(1991)]制備的100mg/ml幽門(mén)螺旋桿菌(臨床分離體)冷Dulbecco-PBS溶液，混合物繼續(xù)振蕩5分鐘，離心(3000rpm，20分鐘)。將上清液轉(zhuǎn)移到新試管中，用作提取物(1-1.5mg/ml蛋白質(zhì))。用D-PBS稀釋提取物至2.5μg/ml，將稀釋液加入96-孔平板的各孔，每孔100μl，25℃保溫過(guò)夜。清洗各孔后，加入300μl封閉液(D-PBS，0.5％酪蛋白，5％山梨醇，0.05％NaN3[pH7.4])，然后將平板在25℃保溫過(guò)夜。棄去封閉液后，平板在25℃干燥過(guò)夜，與干燥劑一起密封在鋁袋中，4℃儲(chǔ)藏備用。(2)測(cè)定使用如上制備的固定化抗原(平板)，如實(shí)施例4的方式測(cè)定尿樣中的抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體。因此，將25μl第一緩沖液(200mMTris-HCl緩沖液，0.14MNaCl，2％酪蛋白，0.5％BSA，0.05％Tween20，0.1％NaN3，20μg/mlE.coli提取物[pH7.3])和100μl尿樣加入各孔，振蕩10秒后，將平板在37℃靜置1小時(shí)，然后清洗6此。如實(shí)施例4，加入100μl用第二緩沖液稀釋的所述HRP標(biāo)山羊抗-人IgG(Fc-特異性)抗體稀釋液，然后將平板在37℃靜置1小時(shí)用于檢測(cè)抗體。得到的結(jié)果如圖9和表3所示。表3</tables>圖9中，縱坐標(biāo)代表吸光率(O.D.450-650nm)，橫坐標(biāo)代表根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)[腸胃病學(xué)雜志，33pp.6-13(1998)]建立的陽(yáng)性幽門(mén)螺旋桿菌感染組(+；n＝56)和陰性幽門(mén)螺旋桿菌感染組(-；n＝44)。在表3中，“靈敏度”指在根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)確定的陽(yáng)性病例中，檢測(cè)為陽(yáng)性病例的百分?jǐn)?shù)；“特異性”指在根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)確定的陰性病例中，檢測(cè)為陰性病例的百分?jǐn)?shù)；“準(zhǔn)確性”指在根據(jù)13C-UBT試驗(yàn)確定的陽(yáng)性和陰性病例中，檢測(cè)為陽(yáng)性和陰性病例分別所占的百分?jǐn)?shù)，各數(shù)值相對(duì)于平均為M+3SD或M+5SD的臨界點(diǎn)。作為對(duì)照試驗(yàn)，用血清抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體測(cè)定試劑盒[HM-CAP；EPI/KyowaMedics(K.K.)]測(cè)定同一受試者的尿樣，結(jié)果同樣顯示在表中(對(duì)照法)。上述結(jié)果表明本發(fā)明的方法在靈敏度和準(zhǔn)確性方面尤其優(yōu)于對(duì)照法。實(shí)施例6尿中抗-風(fēng)疹病毒抗體的測(cè)定(1)風(fēng)疹病毒抗原平板的制備除使用濃度為1μg/ml的商品風(fēng)疹病毒抗原[BIO-DESIGN提供]和含D-PBS，1％BSA，5％山梨醇，0.05％NaN3[pH7.4]的封閉液之外，其余重復(fù)實(shí)施例5(1)的程序，制備風(fēng)疹抗原平板。(2)測(cè)定用上述抗原平板，按照實(shí)施例5(2)同樣的方式測(cè)定尿樣中的風(fēng)疹抗體。結(jié)果如圖10和表4所示。表4在圖10中，縱坐標(biāo)表示吸光率(O.D.450-650nm)，橫坐標(biāo)表示按照商品試劑盒(RubellaIgG(II)-EIA，SEIKEN；由DenkaSeiken提供)建立的血清抗-風(fēng)疹抗體-陽(yáng)性組(n＝76)和-陰性組(n＝23)。表4給出的數(shù)據(jù)表明用本發(fā)明方法在尿中得到的結(jié)果與用對(duì)照方法在血清中得到的結(jié)果完全一致。根據(jù)上述數(shù)據(jù)，本發(fā)明方法與對(duì)照方法之間的一致化程度達(dá)100％(99/99)，因此表明本發(fā)明甚至能夠高度靈敏和高度特異地測(cè)定安全方便的尿液中的抗體，因此可以很好地應(yīng)用于試驗(yàn)室檢查。實(shí)施例7抗體測(cè)定裝置的構(gòu)建(1)幽門(mén)螺旋桿菌抗原的制備如實(shí)施例1(1)中的同樣程序制備幽門(mén)螺旋桿菌抗原溶液，儲(chǔ)存于-80℃。(2)含標(biāo)記抗-人IgG抗體的干玻璃纖維的制備將用40nm(直徑)膠體金-標(biāo)記的抗-人IgG(Fc-特異性)抗體溶液1ml加到玻璃纖維片層(5.0mm×260mm×0.8mm厚；Whatman)上，片層干燥過(guò)夜。將這種片層和干燥劑一起室溫儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?3)膜的制備將上述(1)中制備的幽門(mén)螺旋桿菌抗原溶液(3mg/ml)和抗-人IgG抗體溶液(0.3mg/ml)分別線形噴灑到硝酸纖維素膜(26.5mm×260mm×0.1mm厚；AdvanceMicroDevice)的如圖11指示的的預(yù)定位置上，37℃干燥120分鐘。干燥后，將膜浸入含脫脂奶的Borax緩沖液(pH8.2)中漂洗30分鐘。漂洗后的膜在37℃干燥1小時(shí)，與干燥劑一起室溫儲(chǔ)存。(4)組合(固相支持物)如圖3(A)的說(shuō)明，將上述膜(3)、吸收性濾紙板(4)(22×260mm×1.5mm厚；Whatman)、所述含標(biāo)記抗體的玻璃纖維片層(2)和樣品板(1)(15×260mm×1.0mm厚；濾紙，Whatman)用粘合劑粘合起來(lái)，然后切成5mm寬。這樣制備的固相支持物置于塑料保護(hù)罩的底部(8)，將具有進(jìn)樣口(9)和檢測(cè)窗(10)的頂部(7)蓋在固相支持物的上面，使頂部(7)穩(wěn)定地置于底部(8)上面。實(shí)施例8尿中抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體的測(cè)定用實(shí)施例7構(gòu)建的裝置，測(cè)定3種尿樣中的抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體，這三種尿樣分別是幽門(mén)螺旋桿菌感染受試者的尿樣、未感染幽門(mén)螺旋桿菌受試者的尿樣、以及來(lái)自幽門(mén)螺旋桿菌感染受試者的抗體含量極度貧乏的尿樣。首先，將500μl尿樣加入500μl樣品稀釋液[200mMTris-Hcl緩沖液，0.14MNaCl，2％酪蛋白，0.5％BSA，0.05％Tween20，0.1％NaN3(pH7.3)，E.coliLPS(Difco)50μl/ml]，然后混合。將六滴(約150μl)制得的稀釋液從實(shí)施例7構(gòu)建的裝置的進(jìn)樣口(9)滴入，使樣品稀釋液吸附到支持物上，然后靜置20分鐘。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用有效尿樣時(shí)，檢測(cè)窗(10)的對(duì)照區(qū)域出現(xiàn)粉紅色或紅色色帶。相反，當(dāng)使用抗體含量極度貧乏的無(wú)效尿樣時(shí)，檢測(cè)窗(10)的試驗(yàn)帶和對(duì)照帶都不出現(xiàn)顏色變化，表明該樣品不能被評(píng)價(jià)。當(dāng)樣品是來(lái)自未感染幽門(mén)螺旋桿菌的受試者的有效尿樣時(shí)，僅在檢測(cè)窗(10)的的對(duì)照帶出現(xiàn)粉紅-紅色色帶，表明幽門(mén)螺旋桿菌感染的陰性試驗(yàn)(真陰性)，而當(dāng)存在幽門(mén)螺旋桿菌感染時(shí)，在檢測(cè)窗(10)的試驗(yàn)帶和對(duì)照帶均出現(xiàn)粉紅色-紅色的色帶，表明幽門(mén)螺旋桿菌的陽(yáng)性試驗(yàn)。實(shí)施例9尿中抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體的測(cè)定(1)大腸桿菌成分的制備將大腸桿菌(pvc18/JM109，TakaraShuzo)在含安芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基(Luria-Bertani培養(yǎng)基，NihonSeiyaku)中于37℃培養(yǎng)18小時(shí)，離心收集成熟細(xì)胞，然后用2份PBS清洗。然后，加入冷PBS至細(xì)胞終濃度為100mg/ml，用超聲儀(10秒×3次)破碎并提取細(xì)胞。得到的上清液作為E.coli提取物蛋白。(2)用上述(1)中制備的E.coli提取物蛋白替換E.coliLPS，加入實(shí)施例8的樣品稀釋液，重復(fù)實(shí)施例8的其它程序，測(cè)定尿樣中抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體。結(jié)果得到如實(shí)施例8中描述的同樣結(jié)果。實(shí)施例10取經(jīng)13C-UBT試驗(yàn)[腸胃病學(xué)雜志，336-13(1998)]確定為幽門(mén)螺旋桿菌感染-陽(yáng)性的21位受試者和同樣數(shù)目的幽門(mén)螺旋桿菌感染-陰性受試者(共42個(gè)病例)的全血、血漿和尿液，用實(shí)施例8中描述的程序測(cè)定樣品中的抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體。作為對(duì)照試驗(yàn)，用測(cè)定全血或血漿中幽門(mén)螺旋桿菌抗體的商品化的測(cè)定試劑盒分別測(cè)定上述同樣受試者的樣品，從得到的數(shù)據(jù)評(píng)價(jià)本發(fā)明裝置的有效性。結(jié)果如圖12所示。在圖12中，對(duì)照試劑盒A到H分別如下AHelitest(由CortecsDiagnostics生產(chǎn))BH.pylori-Check-1(由Bio-MedicalProducts生產(chǎn))CFirstCheckH.pylori(由WorldwideMedicalCorp生產(chǎn))DBiocardHilicobacterpyloriIgG(由AntiBiotechOy生產(chǎn))EInstaTestH.Pylori(由CortezdiagnosticsInc.生產(chǎn))FOneStepH.PyloriTest(由TecoDiagnostics生產(chǎn))GH.pyloriSPOT(由InternationalImmuno-Diagnostics生產(chǎn))HQuickStripeH.pylori(由DiatechDiagnosticsInc.生產(chǎn))在圖12中，“特異性”指用各相應(yīng)試劑盒測(cè)定經(jīng)13C-UBT試驗(yàn)測(cè)定為陰性樣品的陰性試驗(yàn)的百分?jǐn)?shù)(陰性率)，“靈敏度”指用各相應(yīng)試劑盒測(cè)定經(jīng)13C-UBT試驗(yàn)測(cè)定為陽(yáng)性樣品的陽(yáng)性試驗(yàn)的百分?jǐn)?shù)(陽(yáng)性率)。從圖12的數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明的抗體測(cè)定裝置和固相測(cè)定方法不必說(shuō)測(cè)定血液(全血，血漿)樣品，甚至為應(yīng)用尿樣的測(cè)定提供了一種具有高度檢測(cè)特異性和準(zhǔn)確性的優(yōu)秀測(cè)定系統(tǒng)。從上述結(jié)果還可以清楚地看到，甚至當(dāng)樣品是安全方便的尿樣時(shí)，本發(fā)明仍然能夠高度靈敏、高度特異地檢測(cè)抗體，因此在試驗(yàn)室檢查中十分有用。實(shí)施例11大腸桿菌成分在尿抗體測(cè)定中的效果(1)用實(shí)施例8中構(gòu)建的測(cè)定裝置評(píng)價(jià)大腸桿菌成分在尿抗體測(cè)定中的效果。因此，取13C-UBT試驗(yàn)選定的幽門(mén)螺旋桿菌感染陽(yáng)性和陰性受試者的尿樣，用不含E.coliLPS(稀釋液1)的樣品稀釋液系統(tǒng)和加入如表5所示的各種濃度的E.coliLPS的同樣稀釋液系統(tǒng)檢測(cè)尿樣中的抗-幽門(mén)螺旋桿菌抗體。通過(guò)光密度計(jì)(由ATTO制造)測(cè)量色帶強(qiáng)度，評(píng)價(jià)試驗(yàn)帶和對(duì)照帶的色帶形成狀況。結(jié)果如表5所示。表5發(fā)現(xiàn)當(dāng)樣品中加入11.1μg/ml或更高水平的E.coliLPS后，使用稀釋液1時(shí)觀察到的非特異性反應(yīng)消失，因此排除了假陽(yáng)性試驗(yàn)(檢測(cè)誤差)的可能。工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明提供了一種抗體測(cè)定方法，甚至在用抗體相對(duì)貧乏的尿樣作為試樣時(shí)，通過(guò)該方法都可以高度靈敏和高度特異地檢測(cè)其中的特異于感染源的目標(biāo)抗體。根據(jù)本發(fā)明的抗體測(cè)定方法，由于樣品中的污染物造成的“假陽(yáng)性”反應(yīng)被顯著抑制，從而獲得高度準(zhǔn)確可靠的測(cè)定結(jié)果。另外，本發(fā)明提供了對(duì)免疫毛細(xì)管分析法或免疫色譜分析法的改進(jìn)，由此通過(guò)清楚地區(qū)分“假陰性”和“真陰性”之間的界限，準(zhǔn)確地檢測(cè)樣品中是否存在目標(biāo)抗體和目標(biāo)抗體的含量。權(quán)利要求1.一種包括通過(guò)應(yīng)用抗原-抗體反應(yīng)檢測(cè)樣品中目標(biāo)抗體的抗體測(cè)定方法，其特征在于在存在大腸桿菌成分的情況下，進(jìn)行所述抗體和分析抗原之間的所述抗原-抗體反應(yīng)。2.按照權(quán)利要求1的抗體測(cè)定方法，其中所述大腸桿菌成分是選自大腸桿菌的可溶性組分和脂多糖組分中的至少一種。3.按照權(quán)利要求1的抗體測(cè)定方法，其中所述大腸桿菌成分的應(yīng)用的比例約為0.1-100μg/μg分析抗原。4.測(cè)定抗體的方法，包括用三明治技術(shù)檢測(cè)樣品中的目標(biāo)抗體，其特征在于使用對(duì)目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的物質(zhì)作為抗體測(cè)定試劑。5.按照權(quán)利要求4的抗體測(cè)定方法，其中抗體測(cè)定試劑是Fc-特異性的抗-IgG抗體。6.按照權(quán)利要求4的抗體測(cè)定方法，包括樣品中的目標(biāo)抗體與固定在支持物上的所述抗體的固定化抗原偶聯(lián)的抗原-抗體反應(yīng)步驟，和由所述固定化抗原捕獲的目標(biāo)抗體與對(duì)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的抗體測(cè)定試劑反應(yīng)的反應(yīng)步驟。7.按照權(quán)利要求6的抗體測(cè)定方法，其中抗原-抗體反應(yīng)是在存在大腸桿菌成分的情況下進(jìn)行的。8.按照權(quán)利要求1或4的抗體測(cè)定方法，其中所述樣品是尿樣。9.按照權(quán)利要求1或4的抗體測(cè)定方法，其中目標(biāo)抗體是抗感染源的抗體。10.按照權(quán)利要求1或4的抗體測(cè)定方法，其中感染源選自下列成分人免疫缺陷病毒、肝炎病毒、風(fēng)疹病毒、流感病毒、麻疹病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、Clamydiaspp.、淋球菌、幽門(mén)螺旋桿菌和鼠弓形體。11.按照權(quán)利要求1或4的抗體測(cè)定方法，其中抗原選自下列成分細(xì)菌、病毒、原生動(dòng)物和至少含有所述細(xì)菌、病毒或原生動(dòng)物的抗原決定簇的細(xì)菌、病毒或原生動(dòng)物組分。12.按照權(quán)利要求1或4的抗體測(cè)定方法，其中抗原是微生物一幽門(mén)螺旋桿菌或至少含有所述微生物抗原決定簇的幽門(mén)螺旋桿菌組分。13.一種抗體測(cè)定裝置，包括固相支持物，該固相支持物至少具有(a)第一區(qū)，樣品點(diǎn)樣于其上，以及(b)第二區(qū)，試驗(yàn)樣品中的抗體按照一定的順序，即樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從第一區(qū)遷移到第二區(qū)的順序在此反應(yīng)；和用于檢測(cè)第二區(qū)中的反應(yīng)結(jié)果的標(biāo)記工具，所述(b)第二區(qū)具有(i)一個(gè)試驗(yàn)帶，其中用于捕獲待測(cè)目標(biāo)抗體的配體固定在此處；和(ii)一個(gè)對(duì)照帶，其中用于捕獲樣品中任意抗體的配體固定在此處。14.按照權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置，其中固定在試驗(yàn)帶中的配體是針對(duì)樣品中存在的目標(biāo)抗體的抗原。15.按照權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置，其中固定在對(duì)照帶中的配體是能夠捕獲樣品中任意抗體的抗-人免疫球蛋白抗體。16.按照權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置，包括作為所述標(biāo)記工具的將與目標(biāo)抗體和任意抗體結(jié)合的標(biāo)記配體。17.按照權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置，其中標(biāo)記工具是將與目標(biāo)抗體和任意抗體結(jié)合的被標(biāo)記配體，所述配體以如下方式可移動(dòng)地承載在固相支持物第二區(qū)的上游，即在與樣品接觸后，該標(biāo)記配體與目標(biāo)抗體和任意抗體反應(yīng)，分別形成目標(biāo)抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物和任意抗體/標(biāo)記配體復(fù)合物，然后這些復(fù)合物通過(guò)毛細(xì)管作用遷移到第二區(qū)，在此它們分別被固定在試驗(yàn)帶和對(duì)照帶上。18.按照權(quán)利要求17的抗體測(cè)定裝置，其中標(biāo)記配體被承載在固相支持物第一區(qū)和第二區(qū)之間的區(qū)域上(示蹤區(qū))。19.按照權(quán)利要求17的抗體測(cè)定裝置，其中與目標(biāo)抗體和任意抗體結(jié)合的標(biāo)記配體是被標(biāo)記的抗-人免疫球蛋白抗體。20.按照權(quán)利要求19的抗體測(cè)定裝置，其中抗-人免疫球蛋白抗體是對(duì)免疫球蛋白G的Fc區(qū)具有特異親和力的抗IgG抗體。21.按照權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置，其中固相支持物進(jìn)一步在第一區(qū)和第二區(qū)的下游設(shè)有吸收區(qū)，以便從第一區(qū)遷移到第二區(qū)的樣品進(jìn)一步通過(guò)毛細(xì)管作用遷移到吸收區(qū)。22.按照權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置，其中在第二區(qū)試驗(yàn)帶上的目標(biāo)抗體的偶聯(lián)反應(yīng)在存在大腸桿菌成分的情況下進(jìn)行。23.按照權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置，其中所述樣品是尿樣。24.權(quán)利要求13到22中任一項(xiàng)的抗體測(cè)定裝置用于測(cè)定在樣品中存在的針對(duì)于感染源的目標(biāo)抗體的應(yīng)用。25.按照權(quán)利要求24的應(yīng)用，其中所述樣品是尿樣。26.一種測(cè)定樣品中目標(biāo)抗體的固相檢測(cè)方法，包括將樣品施加到權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置的第一區(qū)，并在第二區(qū)的對(duì)照帶顯色的條件下，檢測(cè)第二區(qū)試驗(yàn)帶的顏色形成狀況。27.一種測(cè)定樣品中的目標(biāo)抗體的固相檢測(cè)方法，包括將樣品施加到權(quán)利要求20的抗體測(cè)定裝置的第一區(qū)，并在第二區(qū)的對(duì)照帶顯色的條件下，檢測(cè)第二區(qū)試驗(yàn)帶的顏色形成狀況。28.按照權(quán)利要求26或27的測(cè)定目標(biāo)抗體的固相檢測(cè)方法，其中在抗體測(cè)定裝置第二區(qū)試驗(yàn)帶上進(jìn)行的目標(biāo)抗體的偶聯(lián)反應(yīng)是在存在大腸桿菌成分的情況下進(jìn)行的。29.按照權(quán)利要求26的測(cè)定目標(biāo)抗體的固相檢測(cè)方法，其中所述樣品是尿樣。30.一種通過(guò)抗原-抗體反應(yīng)來(lái)測(cè)定樣品中抗體的抗體測(cè)定試劑盒，其特征在于所述抗體測(cè)定試劑盒含有大腸桿菌成分。31.一種抗體測(cè)定試劑盒，其特征在于其中含有對(duì)目標(biāo)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親和力的物質(zhì)作為抗體測(cè)定試劑。32.一種含有權(quán)利要求13的抗體測(cè)定裝置的抗體測(cè)定試劑盒。全文摘要本發(fā)明涉及一種高度準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便和特異地測(cè)定體液中特異于感染源的抗體的方法。更具體地說(shuō),本發(fā)明提供了一種抗體免疫測(cè)定法,其中在存在大腸桿菌成分的情況下,引發(fā)樣品中的目標(biāo)抗體和測(cè)定抗原之間的抗原－抗體反應(yīng),還提供了一種抗體測(cè)定方法,它包括用對(duì)抗體IgG的Fc區(qū)具有特異親合力的試劑作為抗體測(cè)定試劑。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種抗體測(cè)定裝置,它包括一個(gè)固相支持物,該固相支持物至少具有(a)一個(gè)第一區(qū),樣品應(yīng)用于其上,以及(b)一個(gè)第二區(qū),樣品中的抗體按照事先安排的順序,即樣品通過(guò)毛細(xì)管作用從第一區(qū)遷移到第二區(qū)的順序在此反應(yīng),還含有一種標(biāo)記工具用于檢測(cè)第二區(qū)中的反應(yīng)結(jié)果,其特征在于(b)第二區(qū)具有(i)一個(gè)試驗(yàn)帶,捕獲待測(cè)目標(biāo)抗體的配體固定在此處:和(ii)一個(gè)對(duì)照帶,捕獲樣品中任意抗體的配體固定在此處。文檔編號(hào)G01N33/543GK1263599SQ99800547公開(kāi)日2000年8月16日申請(qǐng)日期1999年4月9日優(yōu)先權(quán)日1998年4月14日發(fā)明者立川哲也,織田哲彌,高橋重雄,野田溫也,赤松優(yōu),葛城肅典,町川房市申請(qǐng)人:大塚制藥株式會(huì)社