同時(shí)檢測(cè)禽畜肉制品中五種有機(jī)錫農(nóng)藥殘留的二級(jí)質(zhì)譜方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是設(shè)及一種同時(shí)檢測(cè)禽畜肉制品中五種有機(jī) 錫農(nóng)藥殘留的二級(jí)質(zhì)譜方法
【背景技術(shù)】
[0002] =挫錫、=環(huán)錫、=苯基氨氧化錫、=苯基氯化錫和苯了錫在農(nóng)業(yè)上常作為殺蛾劑 和殺菌劑，具有一定的毒性，而且在環(huán)境中有較好的穩(wěn)定性。在梨、蘋(píng)果、巧橘、茶樹(shù)、棉花、 小麥、蔬菜、花弁等作物中施用，雞肉、牛肉中的有機(jī)錫農(nóng)藥殘留來(lái)源于飼養(yǎng)過(guò)程中食用了 含有有機(jī)錫農(nóng)藥殘留的飼料，在禽畜肉肉中蓄積，通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，對(duì)人類(lèi)的健康產(chǎn)生 威脅。國(guó)際上對(duì)禽畜肉中有機(jī)錫殘留限量的規(guī)定例如歐盟、日本肯定列表限量規(guī)定雞肉、豬 肉、牛肉中苯了錫的最大殘留量（MRL)為0.05mg/kg，S挫錫不得檢出；歐盟規(guī)定雞肉、豬 肉、牛肉、羊肉中S挫錫和S環(huán)錫的總量不得超過(guò)0. Olmg/kg ;香港食物中除害劑殘余規(guī)例 規(guī)定S苯基氨氧化錫在牛肉、羊肉、馬肉中的MRL為0. 05mg/kg，在豬肉中為0. 06mg/kg。
[0003] 文獻(xiàn)報(bào)道是蔬采、水果、水中的殘留檢測(cè)?；痳istophe Devos等義用NaB化4衍生， 建立了自動(dòng)頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜化eadspace-SPME-GC/M巧檢測(cè)水樣品中的 苯了錫殘留方法。王建華等采用NaB化4衍生、氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜分析蘋(píng)果汁中= 挫錫和S環(huán)錫殘留量?；痶alia Campillo等采用Na邸t4衍生，頂空固相微萃取處理蜂蜜和 葡萄酒樣品，比較了 GC-MS和氣相色譜原子發(fā)射檢測(cè)器（GC-AED)兩種檢測(cè)方法檢測(cè)樣品中 =挫錫、=環(huán)錫、苯了錫、氯化=了基錫、氯化=苯基錫、二氯化二苯基錫、=氯化一苯基錫、 二氯化二了基錫、=氯了基錫的殘留。吳巧等建立了氣相色譜-電子捕獲檢測(cè)器（GC-ECD) 測(cè)定巧枯和±壤中苯了錫殘留量的分析方法，樣品經(jīng)己膳提取，濃鹽酸衍生化，中性氧化侶 柱凈化。李曉玉等采用格氏試劑（己基漠化儀-己離溶液）衍生化，建立了糧谷中S環(huán)錫 和苯了錫同時(shí)測(cè)定的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-M巧測(cè)定方法。
[0004] 目前關(guān)于動(dòng)物源食品中該五種有機(jī)錫農(nóng)藥殘留分析方法的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于利用氣相色譜重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜（MS-M巧的高靈敏度和強(qiáng) 特異性，建立一種同時(shí)檢測(cè)禽畜肉制品中五種有機(jī)錫農(nóng)藥殘留的二級(jí)質(zhì)譜方法，其特點(diǎn)是 該方法包括W下步驟：
[0006] a、提取；首先測(cè)定肉制品樣品中蛋白質(zhì)的含量，然后稱(chēng)取4. Og樣品，再按照下列 對(duì)應(yīng)關(guān)系確定所需添加1%的甲酸-己膳的體積；
[0007] 蛋白質(zhì)低于20%時(shí)，添加20血1%的甲酸-己膳；
[000引 蛋白質(zhì)在20. 0%至24. 0%時(shí)，添加40血1%的甲酸-己膳；
[0009] 蛋白質(zhì)高于24. 0%時(shí)，添加50血1%的甲酸-己膳；
[0010] 均質(zhì)2min，然后加入5mL磯酸鹽緩沖液，加入5g氯化鋼，在水平振蕩器上振蕩 30min，500化/min下離屯、5min，取上清液10ml于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，再用氮?dú)獯蹈桑涣?入2mL甲醇溶解殘留物，用氮?dú)獯抵罥mL，得到待衍生的提取溶液；
[0011] b、衍生；將上述提取溶液加入5血己酸-己酸鋼緩沖溶液（pH = 4. W及1血2% 四己基棚化鋼（Na邸t4)水溶液，迅速旋上瓶蓋，超聲衍生反應(yīng)15min，加入2血正己燒提取 衍生產(chǎn)物，混勻，離屯、后取上層上清液1ml，待凈化；
[001引 C、凈化；先用6血正己燒預(yù)淋洗Florisil固相萃取小柱，待Florisil柱中溶液 的液面降至無(wú)水硫酸鋼層時(shí)，將上述衍生的上層有機(jī)相取ImL轉(zhuǎn)移至Florisil柱上；再用 8mL正己燒/丙酬巧9:l，v/v)溶液進(jìn)行洗脫，收集全部流出液，35°C下氮?dú)獯蹈?，用正己?溶解并定容至1血，供GC-MS/MS測(cè)定；
[0013] t有機(jī)錫農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的衍生制備；所述的五種有機(jī)錫分別為=挫錫、= 環(huán)錫、=苯基氨氧化錫、=苯基氯化錫和苯了錫，=挫錫會(huì)轉(zhuǎn)化為=環(huán)錫，所W =挫錫、=環(huán) 錫的己基化衍生物為同一種化合物=環(huán)己基己基錫，立苯基氨氧化錫和=苯基氯化錫的己 基化衍生物也為同一種化合物=苯基己基錫，苯了錫的衍生物為=(2-甲基-2-苯基丙基） 己基錫。取五種濃度分別為10、50、100、200、500 y g/L的S環(huán)錫、S苯基氨氧化錫和苯了錫 S種有機(jī)錫混合標(biāo)準(zhǔn)工作液各ImL到五個(gè)15ml離屯、管中，分別加入5ml己酸-己酸鋼緩沖 溶液（抑=4. 5)及1ml 2%四己基棚化鋼水溶液，超聲衍生反應(yīng)15min后，加入1ml正己燒 提取衍生產(chǎn)物，混勻，離屯、后取上清液，即得到有機(jī)錫農(nóng)藥衍生物標(biāo)準(zhǔn)工作液；采用氣相色 譜重四級(jí)桿質(zhì)譜（GC-MS/M巧檢測(cè)，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
[0014] e、采用外標(biāo)法檢測(cè)步驟C得到的待測(cè)溶液中的=種有機(jī)錫農(nóng)藥衍生物殘留量：將 樣品待測(cè)溶液在下進(jìn)行GC-MS/MS檢測(cè)，將得到的S種有機(jī)錫衍生物的峰面積用上述d步驟 中的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析，計(jì)算得到樣品待測(cè)溶液中各有機(jī)錫農(nóng)藥的濃度，從而計(jì)算得 出樣品中各有機(jī)錫農(nóng)藥的殘留量。
[0015] 上述GC-MS/MS分析條件如下，其中，色譜分離的條件：
[0016] 色譜柱；HP-5MS 毛細(xì)管柱（30mX0. 25mm，0. 25 ym);
[0017] 程序升溫；60°C保持2min，W 20°C /min升至280°C，保持lOmin，總運(yùn)行時(shí)間為 23min ；
[001引進(jìn)樣口溫度；27(TC;
[0019] 載氣；氮?dú)猓兌却笥?9. 999% );
[0020] 進(jìn)樣方式；不分流進(jìn)樣；
[002U 進(jìn)樣量 l.OuL;
[0022] 質(zhì)譜檢測(cè)的條件；
[0023] EI源；傳輸線溫度280°C ;離子源溫度250°C ;接收極電流50 y A ;溶劑延遲時(shí)間 5. Omin ;碰撞氣體為氣氣，碰撞壓力為ImTorr ;掃描范圍m/z 50?650 ;
[0024] 五種有機(jī)錫衍生物的保留時(shí)間、母離子、定性離子對(duì)和定量離子對(duì)及其最優(yōu)碰撞 電壓如表1 ;
[0025] 表1 選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下五種有機(jī)錫衍生物的保留時(shí)間、監(jiān)測(cè)離子對(duì)和碰撞電 壓
[0026]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種同時(shí)檢測(cè)禽畜肉制品中五種有機(jī)錫農(nóng)藥殘留的二級(jí)質(zhì)譜方法，其特征是該方法 包括以下步驟： a、 提?。菏紫葴y(cè)定肉制品樣品中蛋白質(zhì)的含量，然后稱(chēng)取4.Og樣品，再按照下列對(duì)應(yīng) 關(guān)系確定所需添加1%的甲酸_乙腈的體積； 蛋白質(zhì)低于20%時(shí)，添加20mL1%的甲酸-乙腈； 蛋白質(zhì)在20. 0%至24. 0%時(shí)，添加40mL1%的甲酸-乙腈； 蛋白質(zhì)高于24. 0%時(shí)，添加50mL1%的甲酸-乙腈； 均質(zhì)2min，然后加入5mL磷酸鹽緩沖液，加入5g氯化鈉，在水平振蕩器上振蕩30min， 5000r/min下離心5min，取上清液10ml于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，再用氮?dú)獯蹈?；加?mL 甲醇溶解殘留物，用氮?dú)獯抵羖mL，得到待衍生的提取溶液； b、 衍生：將上述提取溶液加入5mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（pH= 4. 5)及l(fā)mL2%四乙 基硼化鈉（NaBEt4)水溶液，迅速旋上瓶蓋，超聲衍生反應(yīng)15min，加入2mL正己烷提取衍生 產(chǎn)物，混勻，離心后取上層上清液lml，待凈化； c、 凈化：先用6mL正己燒預(yù)淋洗Florisil固相萃取小柱，待Florisil柱中溶液的液面 降至無(wú)水硫酸鈉層時(shí)，將上述衍生的上層有機(jī)相取lmL轉(zhuǎn)移至Florisil柱上；再用8mL正 己烷/丙酮（99:1，v/v)溶液進(jìn)行洗脫，收集全部流出液，35°C下氮?dú)獯蹈?，用正己烷溶解?定容至lmL，供GC-MS/MS測(cè)定； d、 有機(jī)錫農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的衍生制備：所述的五種有機(jī)錫分別為三唑錫、三環(huán)錫、 三苯基氫氧化錫、三苯基氯化錫和苯丁錫，三唑錫會(huì)轉(zhuǎn)化為三環(huán)錫，所以三唑錫、三環(huán)錫的 乙基化衍生物為同一種化合物三環(huán)己基乙基錫，三苯基氫氧化錫和三苯基氯化錫的乙基化 衍生物也為同一種化合物三苯基乙基錫，苯丁錫的衍生物為三（2-甲基-2-苯基丙基）乙 基錫。取五種濃度分別為10、50、100、200、500yg/L的三環(huán)錫、三苯基氫氧化錫和苯丁錫三 種有機(jī)錫混合標(biāo)準(zhǔn)工作液各lmL到五個(gè)15ml離心管中，分別加入5ml乙酸-乙酸鈉緩沖溶 液（pH= 4. 5)及l(fā)ml2%四乙基硼化鈉水溶液，超聲衍生反應(yīng)15min后，加入lml正己燒 提取衍生產(chǎn)物，混勻，離心后取上清液，即得到有機(jī)錫農(nóng)藥衍生物標(biāo)準(zhǔn)工作液；采用氣相色 譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜（GC-MS/MS)檢測(cè)，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。 e、 采用外標(biāo)法檢測(cè)步驟c得到的待測(cè)溶液中的三種有機(jī)錫農(nóng)藥衍生物殘留量：將樣品 待測(cè)溶液在下進(jìn)行GC-MS/MS檢測(cè)，將得到的三種有機(jī)錫衍生物的峰面積用上述d步驟中的 標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析，計(jì)算得到樣品待測(cè)溶液中各有機(jī)錫農(nóng)藥的濃度，從而計(jì)算得出樣 品中各有機(jī)錫農(nóng)藥的殘留量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的GC-MS/MS分析條件如下，其中， 色譜分離的條件： 色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱（30mX0. 25mm，0. 25ym); 程序升溫：60°C保持2min，以20°C/min升至280°C，保持lOmin，總運(yùn)行時(shí)間為23min; 進(jìn)樣口溫度：270°C; 載氣：氦氣（純度大于99. 999% ); 進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣； 進(jìn)樣量1.0UL; 質(zhì)譜檢測(cè)的條件： EI源；傳輸線溫度280°C;離子源溫度250°C;接收極電流50yA;溶劑延遲時(shí)間5.Omin;碰撞氣體為氬氣，碰撞壓力為lmTorr;掃描范圍m/z50?650 ; 五種有機(jī)錫衍生物的保留時(shí)間、母離子、定性離子對(duì)和定量離子對(duì)及其最優(yōu)碰撞電壓 如表1 ; 表1選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下五種有機(jī)錫衍生物的保留時(shí)間、監(jiān)測(cè)離子對(duì)和碰撞電壓
【專(zhuān)利摘要】同時(shí)檢測(cè)禽畜肉制品中五種有機(jī)錫農(nóng)藥殘留的二級(jí)質(zhì)譜方法，按樣品中蛋白質(zhì)含量確定所需添加甲酸-乙腈的體積以進(jìn)行有機(jī)錫提取、衍生與凈化；進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)工作液的衍生制備，五種有機(jī)錫為三唑錫、三環(huán)錫、三苯基氫氧化錫、三苯基氯化錫和苯丁錫，衍生物有三種，采用氣相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜檢測(cè)，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；采用外標(biāo)法檢測(cè)三種有機(jī)錫農(nóng)藥衍生物殘留量：用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析，得到樣品有機(jī)錫農(nóng)藥濃度與殘留量。本發(fā)明利用了具有極高的靈敏度的GC-MS/MS檢測(cè)方法，確立了以蛋白質(zhì)為提取液添加量的依據(jù)，對(duì)三種有機(jī)錫衍生物的一級(jí)和二級(jí)質(zhì)譜斷裂途徑進(jìn)行了解析，并確立了具體的質(zhì)譜條件，是一種快速高效的動(dòng)物性食品中有機(jī)錫農(nóng)藥檢測(cè)方法。
【IPC分類(lèi)】G01N30-88
【公開(kāi)號(hào)】CN104569272
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510028293
【發(fā)明人】王建華, 張慧麗
【申請(qǐng)人】山東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月20日