一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測方法，尤其涉及一種快速，簡便，準(zhǔn)確的二乙二醇丙酸甲酯化 修飾劑檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 聚乙二醇（PEG)是迄今為止已知聚合物中蛋白和細(xì)胞吸收水平最低的聚合物，由 于PEG無毒及良好的生物相容性，藥物的PEG修飾是將活化的PEG通過化學(xué)方法偶聯(lián)到藥 物上的過程，PEG化后能改善藥物的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性，改進(jìn)了藥物動(dòng)力學(xué)和藥效等性 質(zhì)，顯著增強(qiáng)藥物的溶解性和穩(wěn)定性，減少免疫原性和抗原性，降低毒副作用，增加了體內(nèi) 生物活性和療效等功效，這種技術(shù)現(xiàn)已開始應(yīng)用于蛋白質(zhì)（肽類）、酶、抗體及小分子藥物 中。
[0003] 該修飾劑廣泛應(yīng)用于各類藥物的修飾研究與應(yīng)用，當(dāng)前國內(nèi)外對(duì)聚乙二醇修飾劑 的檢測分析還未見報(bào)道。本發(fā)明根據(jù)二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑的結(jié)構(gòu)特性，采用離子排 阻高效液相色譜進(jìn)行定量檢測分析。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種快速，簡便，準(zhǔn)確的二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目地，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案： 一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，所述檢測方法包括以下步驟： a) 制備標(biāo)準(zhǔn)品貯備液：稱取二乙二醇丙酸甲酯95-105mg，加水溶解并定容lOOOmL，得 到標(biāo)準(zhǔn)貯備液，在0-4°C下保存； b) 標(biāo)準(zhǔn)液配制：分別吸取步驟1)得到的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液l、2、3、4、5mL于100mL容量瓶中， 加水定容； 3) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：將步驟b)的標(biāo)準(zhǔn)液根據(jù)濃度由低至高依次進(jìn)行離子排阻高效液相 色譜檢測并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 4) 測定：吸取待測樣品lmL加純水稀釋到濃度為1-5yg/mL，然后將待測樣品溶液注入 離子排阻高效液相色譜進(jìn)行檢測，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)定量離子進(jìn)行峰面積定量計(jì)算。本發(fā) 明快速，簡便，準(zhǔn)確，條件溫和易于操作，可用于PEG微量與半微量測定，可以應(yīng)用于PEG修 飾劑及PEG修飾藥物的含量測定與質(zhì)量控制。
[0006] 作為優(yōu)選，二乙二醇丙酸甲酯的結(jié)構(gòu)式為：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步 驟： a) 制備標(biāo)準(zhǔn)品貯備液：稱取二乙二醇丙酸甲酯95-105mg，加水溶解并定容lOOOmL，得 到標(biāo)準(zhǔn)貯備液，在0-4°C下保存； b) 標(biāo)準(zhǔn)液配制：分別吸取步驟1)得到的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液l、2、3、4、5mL于100mL容量瓶中， 加水定容； 3) 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：將步驟b)的標(biāo)準(zhǔn)液根據(jù)濃度由低至高依次進(jìn)行離子排阻高效液相 色譜檢測并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 4) 測定：吸取待測樣品lmL加純水稀釋到濃度為1-5yg/mL，然后將待測樣品溶液注入 離子排阻高效液相色譜進(jìn)行檢測，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)定量離子峰面積大小進(jìn)行定量計(jì)算。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，其特征在于，二 乙二醇丙酸甲酯的結(jié)構(gòu)式）
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，其特征在于，二 乙二醇丙酸甲酯是由二乙二醇與丙烯酸甲酯在催化劑作用下制備而成的，制備條件為：壓 力 0? 1-0. 8Mpa，反應(yīng)溫度 10-220°C。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，其特征在于，二 乙二醇與丙烯酸甲酯的質(zhì)量比為1:1-1.85。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，其特征在于，溶 齊IJ為乙醚、乙醇、丙酮、乙腈中的一種、催化劑為納米金催化齊IJ、納米銀催化齊IJ、氧化鈰、納米 氧化鎂中的一種或幾種，溶劑的用量為二乙二醇與丙烯酸甲酯總質(zhì)量的10-20%。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2或3或4所述的一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，其特征 在于，二乙二醇與丙烯酸甲酯在開始反應(yīng)前，先超聲震動(dòng)1-3小時(shí)，超聲功率為65-85kw，震 動(dòng)半小時(shí)后加入催化劑，催化劑的用量為二乙二醇與丙烯酸甲酯總質(zhì)量的〇. 5-1. 1%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，其特征在于，離 子排阻高效液相色譜的檢測條件為：色譜柱：Bi〇-radHPX-87H(5um，300_x7.8mm);流動(dòng) 相：pHl. 0 - 3. 0硫酸溶液，流速：0. 4-1. 2mL/min;進(jìn)樣量為20uL;柱溫40-60°C;采用紫外 檢測器，檢測波長為190-220nm。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種二乙二醇丙酸甲酯化修飾劑檢測方法，所述檢測方法包括以下步驟：制備標(biāo)準(zhǔn)品；標(biāo)準(zhǔn)液配制；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；測定：將待測樣品溶液注入離子排阻高效液相色譜進(jìn)行檢測，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，依據(jù)定量離子進(jìn)行峰面積定量計(jì)算。本發(fā)明快速，簡便，準(zhǔn)確,條件溫和易于操作，可用于PEG微量與半微量測定，可以應(yīng)用于PEG修飾劑及PEG修飾藥物的含量測定與質(zhì)量控制。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號(hào)】CN104614451
【申請?zhí)枴緾N201410739263
【發(fā)明人】施立欽, 邱從平, 華旭
【申請人】寧波北侖大港科技創(chuàng)新服務(wù)中心
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2014年12月8日