龍加通絡(luò)膠囊中薯蕷皂苷含量的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥制劑含量測定技術(shù)領(lǐng)域，涉及龍加通絡(luò)膠囊中薯蕷皂苷含量的測 定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 龍加通絡(luò)膠囊是天津世紀(jì)天龍藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的中藥六類新藥，該藥具有活血 化瘀、益氣通絡(luò)的功效，臨床用于中風(fēng)?。ㄝp中度腦梗塞）恢復(fù)期氣虛血瘀證，癥見半身不 遂，口舌歪斜，語言蹇澀或不語，偏身麻木，手足腫脹，舌暗或有瘀斑，苔薄白。臨床療效確 切，使用安全。
[0003] 龍加通絡(luò)膠囊，專利【申請?zhí)枴?2156786. 7。發(fā)明名稱：一種治療中風(fēng)的藥物組合 物、其制備方法和應(yīng)用。它是由穿山龍和刺五加或由穿山龍和刺五加浸膏制成。組方中穿山 龍屬為薯截科植物穿龍薯截Makino,以根狀莖入藥，具有舒筋活絡(luò)， 祛風(fēng)止痛功效。刺五加為五加科植物刺五加Jca/?從se/?(ico>sw>s(Rupr.etMaxim.) Harms，以干燥根和根莖或莖入藥，具益氣健脾，補(bǔ)腎安神功效。
[0004]目前龍加通絡(luò)膠囊在質(zhì)量的控制上采用對薯蕷皂苷元進(jìn)行測定，此方法須經(jīng)酸 水解、萃取、調(diào)節(jié)pH等步驟，存在操作繁瑣，檢測時(shí)間長，易產(chǎn)生誤差等問題。尚沒有龍加 通絡(luò)膠囊中薯蕷皂苷的定量測定方法。為了更好的控制龍加通絡(luò)膠囊的質(zhì)量，現(xiàn)對龍加通 絡(luò)膠囊中的薯蕷皂苷含量進(jìn)行測定，摸索建立了薯蕷皂苷的高效液相色譜一蒸發(fā)光散射 (HPLC-ELSD)測定法，從而完成了本發(fā)明。本法預(yù)處理操作簡單，檢測時(shí)間短，更適于大生產(chǎn) 的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明建立了高效液相法測定龍加通絡(luò)膠囊中薯蕷皂苷含量的方法，它是采用 DiamonsilC18 (1) (4.6mmX250mm，5um)色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-水（53-58:45);流 速：1.〇1111，111-1，設(shè)置溫度 ：9〇1：，氣流量：2.4171^11;柱溫：351：。結(jié)果 ：薯蕷皂苷在 1. 03-6. 18吒范圍內(nèi)峰面積呈良好的線性關(guān)系，（r=0. 9998)，平均回收率100. 96%，RSD= 1. 97%。結(jié)論：本方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于龍加通絡(luò)膠囊中薯蕷皂苷的質(zhì)量控制。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開了如下的技術(shù)內(nèi)容： 一種龍加通絡(luò)膠囊的含量測定方法，其特征在于它是采用高效液相色譜一蒸發(fā)光散射 測定法，測定膠囊中薯蕷皂苷的含量，按如下的步驟進(jìn)行： (1) 對照品溶液的制備：取薯蕷皂苷對照品約5mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶 解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用； (2) 供試品溶液的制備：龍加通絡(luò)膠囊內(nèi)容物研細(xì)，取約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量， 搖勻，濾過，取續(xù)濾液，備用； (3) 測定：分別精密吸取步驟（1)得到的對照品溶液10ul、20ul，步驟（2)提取的供試 品溶液7?20ul，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算含量。色譜條件： 反相高效液相色譜儀一蒸發(fā)光散射檢測器檢測，流動(dòng)相乙腈與水的體積比為53-58:45，色 譜柱為DiamonsilC18 (1) (4.6mmX250mm，5ym)，流速為 1. 0 設(shè)置溫度為 90°C，氣體流速設(shè)置為2. 4L/min，柱溫為35°C，理論板數(shù)以薯蕷皂苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000 ; 每粒龍加通絡(luò)膠囊含穿山龍按薯蕷皂苷（C27H42 03)計(jì)不得少于3mg。其中所述的超聲處理指 的是：功率120W，頻率40KHz，30分鐘。
[0007] 本發(fā)明在對成品薯蕷皂苷含量測定的方法研究中，參考了 2010年版《中國藥典》 一部（國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥出版社，2010: 250.)收載的穿山龍藥材薯蕷皂苷含量測定方法，但因龍加通絡(luò)膠囊為復(fù)方中藥制劑，以藥 典法203nm的紫外末端作為檢測波長，基線不平，干擾大，使檢測的靈敏度降低。故無法完 全按藥典方法對龍加通絡(luò)膠囊進(jìn)行含量測定。
[0008] 本發(fā)明更加詳細(xì)的制備方法及測定方法如下： 1儀器與試藥 1.1儀器4§116拉1260高效液相色譜(美國安捷倫公司）411仏(* 200(^5￡1^0檢 測器；9860D超聲波清洗器(天津科貝爾光電技術(shù)有限公司）；電子分析天平(梅特勒-托利 多公司）。
[0009] 1.2試藥薯蕷皂苷對照品(供含量測定用，批號(hào)111707-200501)由中國藥品生 物制品檢定所提供；乙腈(色譜純，天津康科德科技有限公司）;其余試劑均為分析純；市售。 龍加通絡(luò)膠囊(本公司生產(chǎn)；規(guī)格：〇.45g/粒；批號(hào)：1312203,1312204,1312205)。
[0010] 2方法與結(jié)果 2. 1 色譜條件反相高效液相色譜儀一蒸發(fā)光散射檢測器檢測，流動(dòng)相為乙腈-水 (53-58:45)，色譜柱為DiamonsilC18( 1 )(4. 6mmX250mm，5um)，流速為 1. 0ml.MinS 設(shè)置溫度為90°C，氣體流速設(shè)置為2. 4L/min，柱溫為35°C，理論板數(shù)以薯蕷皂苷峰計(jì)算應(yīng) 不低于4000。
[0011] 2. 2溶液的制備 2. 2. 1對照品溶液的制備取薯蕷皂苷對照品約5mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇 溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用； 2.2.2供試品溶液的制備龍加通絡(luò)膠囊內(nèi)容物研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量。超聲處理(功率120W，頻率40KHz)30分鐘，放冷，再 稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
[0012] 2. 2. 3陰性對照溶液的制備取缺穿山龍的處方藥，按制備工藝制成陰性樣品，按 供試品溶液處理方法制成陰性對照液。
[0013] 2. 3方法學(xué)考察 2. 3. 1專屬性試驗(yàn)精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液適量，注入液相 色譜儀，按"2. 1項(xiàng)"下色譜條件實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明供試品色譜中薯蕷皂苷色譜峰與其他成分 的色譜峰分離良好，且陰性樣品溶液色譜峰未見干擾(見圖1-3)。
[0014] 2.3.2 線性關(guān)系精密吸取薯蕷皂苷對照品溶液（0. 206mg/ml)5、10、15、 20、25、30yl，注入高效液相色譜儀，測定色譜峰面積，以峰面積對數(shù)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量 (Ug)對數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0015] 其回歸方程：Y=l. 6784X+5. 7976g=0. 9998 結(jié)果表明，薯蕷皂苷在l.〇3~6. 18呢范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
[0016] 2.3.3精密度試驗(yàn)取"2. 2.1項(xiàng)"下配制的對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，得薯蕷皂 苷峰面積RSD=0. 94%，結(jié)果表明本方法精密度較好。
[0017] 2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一制備樣品溶液(批號(hào)1312203)，分別于0、2、4、6、8、 12、24、26、28小時(shí)進(jìn)樣測定，RSD=1. 1% (n=9)，結(jié)果表明供試品溶液在28小時(shí)內(nèi)含量穩(wěn) 定。
[0018] 2. 3. 5重復(fù)性試驗(yàn)取上穩(wěn)定性試驗(yàn)同批樣品，按"2. 2. 2項(xiàng)"下方法制備6份 樣品溶液，按"2. 1項(xiàng)"下色譜條件分別測定，結(jié)果該批樣品每粒中含薯蕷皂苷的平均值為 3. 58mg，RSD=1. 71% (n=6)，表明所用方法重復(fù)性好。
[0019] 2.3.6加樣回收率試驗(yàn)取已知準(zhǔn)確含量的樣品適量，共6份，精密稱定，分別精 密加入對照品，按"2. 2. 2項(xiàng)"下方法，制備供試液，依"2. 1項(xiàng)"下色譜條件測定，計(jì)算加樣回 收率（％ )，試驗(yàn)結(jié)果表明平均回收率為100. 96%，RSD為1. 97%。所采用的測定方法準(zhǔn)確。
[0020] 2. 4樣品含量測定取龍加通絡(luò)膠囊3批，分別按"2. 2. 2項(xiàng)"下方法制備樣品溶 液，依"2. 1項(xiàng)"下方法測定，計(jì)算出每1粒中薯蕷皂苷的平均含量，結(jié)果見下表。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種龍加通絡(luò)膠囊中薯蕷皂苷含量的測定方法，其特征在于它是采用高效液相色譜 一蒸發(fā)光散射測定方法，測定膠囊中薯蕷皂苷的含量，按如下的步驟進(jìn)行： (1) 對照品溶液的制備：取薯蕷皂苷對照品約5mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶 解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用； (2) 供試品溶液的制備：龍加通絡(luò)膠囊內(nèi)容物研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾 過，取續(xù)濾液，備用； (3) 測定：分別精密吸取步驟（1)得到的對照品溶液10ul、20ul，步驟（2)提取的供試 品溶液7?20ul，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算含量； 色譜條件：反相高效液相色譜儀一蒸發(fā)光散射檢測器檢測，流動(dòng)相乙腈與水的體積比 為 53-58:45,色譜柱為 Diamonsil C18(l)(4.6 mmX250 mm，5 iim)，流速為 1.0 設(shè)置溫度為90°C，氣體流速設(shè)置為2. 4L/min，柱溫為35°C，理論板數(shù)以薯蕷皂苷峰計(jì)算應(yīng) 不低于4000 ;每粒龍加通絡(luò)膠囊含穿山龍按薯截阜苷（C27H4203)計(jì)不得少于3mg。
2. 權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于所述的超聲處理指的是：功率120W，頻 率40KHz，30分鐘。
【專利摘要】本發(fā)明公開了龍加通絡(luò)膠囊中薯蕷皂苷含量的測定方法。它是樣品以甲醇超聲提取,采用Diamonsil C18（1）（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相：乙腈-水（53-58:45）；流速：1.0ml?Min-1，設(shè)置溫度：90℃，氣流量：2.4L/min；柱溫：35℃。結(jié)果：薯蕷皂苷在1.03-6.18μg范圍內(nèi)峰面積呈良好的線性關(guān)系，(r=0.9998)，平均回收率100.96%，RSD＝1.97%。本發(fā)明建立了高效液相色譜一蒸發(fā)光散射檢測法(HPLC—ELSD)對成品中薯蕷皂苷進(jìn)行含量測定的方法，克服了在紫外末端檢測時(shí)流動(dòng)相帶來的干擾，所得圖譜基線平直，靈敏度高，與雜質(zhì)有很好的分離度，提高了方法的專屬性，測定結(jié)果更為準(zhǔn)確。
【IPC分類】G01N30-89
【公開號(hào)】CN104614482
【申請?zhí)枴緾N201410726072
【發(fā)明人】任為之, 王現(xiàn)昌, 于麗云, 李云鵬, 段麗萌, 王順先
【申請人】天津世紀(jì)天龍藥業(yè)有限公司
【公開日】2015年5月13日
【申請日】2014年12月4日