采集山羊腦垂體及下丘腦的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及生命科學領域，尤其是一種采集山羊腦垂體及下丘腦的方法。
【背景技術】
[0002]山羊垂體是山羊機體最重要的內(nèi)分泌腺，分前葉和后葉兩部分。它分泌多種激素，如生長激素、促甲狀腺激素、促腎上腺皮質(zhì)激素、促性腺素、催產(chǎn)素、催乳素、黑色細胞刺激素等，還能夠貯藏下丘腦分泌的抗利尿激素。這些激素對代謝、生長、發(fā)育和生殖等有重要作用。下丘腦是大腦皮層下調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動的高級中樞，它把內(nèi)臟活動與其他生理活動聯(lián)系起來，調(diào)節(jié)著體溫、攝食、水平衡、血糖和內(nèi)分泌腺活動等重要的生理功能。采集完整無污染的垂體及下丘腦，進行總RNA提取，對其后繼研宄有著至關重要的意義。
[0003]現(xiàn)有的山羊腦部組織樣品的采集，特別是對山羊腦垂體及下丘腦的采集方法，主要是用電鋸或斧頭等縱向劈開頭顱為平均的兩部分，在劈開部分內(nèi)，尋找腦部組織如垂體、下丘腦等。此方法所獲得的垂體及下丘腦由于受到機械損傷較大，且劈半過程中極易將腦部組織混雜(如大腦、下丘腦、小腦、垂體等易碎組織)，在劈半中尋找樣本時由于耗時較長，樣本長時間暴露于空氣中導致污染嚴重，對于如提取腦部組織RNA進行后續(xù)試驗等研宄有著毀滅性的污染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種采集山羊腦垂體及下丘腦的方法，它采集效率高、完整性好、較低污染、易于操作，以克服現(xiàn)有技術的不足。
[0005]本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的:采集山羊腦垂體及下丘腦的方法，包括如下步驟:
1)取已屠宰的山羊頭部，用電鋸或斧頭垂直于山羊鼻的方向，在耳前距離枕髁2-4cm處橫向劈開山羊的頭骨，劈入骨頭0.8-1.5cm，并能看見頭內(nèi)腦組織；
2)再沿劈口將兩邊的骨頭劈開，將劈開的部分分離，直接暴露腦部組織；
3)用眼科鑷撥開小腦，暴露腦干與大腦結合處，使山羊腦垂體及下丘腦可見；
4)用眼科剪沿腦垂體與漏斗的相連處剪下，即得到完整山羊腦垂體；再用眼科剪沿根部剪取下丘腦。
[0006]將取下的腦垂體或下丘腦用DEPC處理水洗滌后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；或在洗滌后用裝有RNA保存液的EP管盛裝后立即放入冰盒。
[0007]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明能快速將山羊頭骨劈開后獲得完整、較低污染的腦垂體及下丘腦組織樣本，保證了腦部組織樣本的采集效率，且克服了現(xiàn)有技術中腦垂體及下丘腦等組織污染程度高、較易丟失等缺陷，并適用于大量樣本采集，且操作簡單快捷。本發(fā)明方法簡單，使用效果好。
【附圖說明】
[0008]附圖1為本發(fā)明的切口位置示意圖； 附圖1中:1-切齒骨，2-上頒骨，3-鼻骨，4-額骨，5-角，6-枕骨髁；
附圖2為不同方法方法采集山羊腦部組織后提取總RNA差異圖；
附圖2中:1_實施例采集的山羊腦部垂體提總RNA ;2_實施例采集的山羊下丘腦提總RNA ； 3-現(xiàn)有技術采集的山羊腦部垂體提總RNA ;4_現(xiàn)有技術采集的山羊下丘腦提總RNA。
【具體實施方式】
[0009]本發(fā)明的實施例:采集山羊腦垂體及下丘腦的方法，包括如下步驟:
1)取已屠宰的山羊頭部，用電鋸或斧頭垂直于山羊鼻的方向，在耳前距離枕髁2-4cm處橫向劈開山羊的頭骨，劈入骨頭0.8-1.5cm，并能看見頭內(nèi)腦組織；
2)再沿劈口將兩邊的骨頭劈開，將劈開的部分分離，直接暴露腦部組織，可見大腦與小腦；
3)用無菌的眼科鑷及眼科剪剪取適量大腦，用DEPC處理水沖洗凈大腦后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；
4)用無菌的眼科剪剪取適量小腦，用DEPC處理水沖洗凈小腦后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；
5)手握山羊頭骨，以枕髁與鼻骨為軸線，將山羊頭部旋轉180°，然后用眼科鑷撥開小腦，暴露腦干與大腦結合處，此時可以看見山羊腦垂體及下丘腦，山羊腦垂體形似薏米，借漏斗連于下丘腦；
6)用無菌的眼科剪沿腦垂體與漏斗相連處剪下，即得到完整山羊腦垂體，用DEPC處理水洗滌腦垂體后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；
7)與山羊腦垂體相連的下丘腦形似相連的凸起，用眼科剪沿根部剪取下丘腦后，用DEPC處理水洗滌腦垂體，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存。
[0010]將實施例山羊的腦垂體及下丘腦與按照現(xiàn)有技術取出的進行對比:分別采集山羊的腦垂體及下丘腦進行總RNA的試劑盒法提取，操作參照康為世紀生物科技有限公司的RNApure Tissue Kit動物組織/細胞RNA提取試劑盒說明書進行，提取后對所提RNA進行完整性檢測對比，對比結果顯示如圖2所示，采用實施例的方案獲得的山羊腦垂體及下丘腦所提總RNA完整性與現(xiàn)有技術的方案相比較好，污染程度明顯減少。
【主權項】
1.一種采集山羊腦垂體及下丘腦的方法，其特征在于:包括如下步驟: 1)取已屠宰的山羊頭部，用電鋸或斧頭在垂直于山羊鼻的方向的額骨位置，在耳前距離枕髁2-4cm處橫向劈開山羊的頭骨，劈入骨頭0.8-1.5cm，并能看見頭內(nèi)腦組織； 2)再沿劈口將兩邊的骨頭劈開，將劈開的部分分離，直接暴露腦部組織； 3)用眼科鑷撥開小腦，暴露腦干與大腦結合處，使山羊腦垂體及下丘腦可見； 4)用眼科剪沿腦垂體與漏斗的相連處剪下，即得到完整山羊腦垂體；再用眼科剪沿根部剪取下丘腦。
2.根據(jù)權利要求1所述的采集山羊腦垂體及下丘腦的方法，其特征在于:將取下的腦垂體或下丘腦用DEPC處理水洗滌后，用滅菌錫箔紙包裹，立即放入液氮保存；或在洗滌后用裝有RNA保存液的EP管盛裝后立即放入冰盒。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采集山羊腦垂體及下丘腦的方法。本發(fā)明能快速將山羊頭骨劈開后獲得完整、較低污染的腦垂體及下丘腦組織樣本，保證了腦部組織樣本的采集效率，且克服了現(xiàn)有技術中腦垂體及下丘腦等組織污染程度高、較易丟失等缺陷，并適用于大量樣本采集，且操作簡單快捷。本發(fā)明方法簡單，使用效果好。
【IPC分類】G01N1-04, G01N1-10
【公開號】CN104655448
【申請?zhí)枴緾N201510063061
【發(fā)明人】陳祥, 馮文武, 龍威海, 許厚強, 李鵬程, 孫振梅, 丁玫, 陳偉
【申請人】貴州大學
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年2月8日