一種人源性的cd13可溶性蛋白的免疫組化試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是一種人源性的⑶13可溶性蛋白的免疫組 化試劑盒及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC)是全世界常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，不僅手術(shù) 切除率低于50%，而且癌腫切除后易于復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。
[0003] 近年研宄發(fā)現(xiàn)，肝癌與白血病、乳腺癌和結(jié)直腸癌一樣，腫瘤組織和癌細(xì)胞株中均 含有的肝癌干細(xì)胞（cancer stem cells，CSCs)處于休眠或慢增殖的細(xì)胞周期，具有自我更 新、多向分化，對(duì)放化療抵抗特性，可能是肝癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源。因此肝癌病人的發(fā)現(xiàn)與 愈后和肝癌干細(xì)胞的關(guān)系密不可分。目前肝癌干細(xì)胞的標(biāo)記物已經(jīng)報(bào)道的有⑶133、cd44、 cd90、EpCAM和SP，但是對(duì)于識(shí)別肝癌干細(xì)胞的準(zhǔn)確率與最新發(fā)現(xiàn)的⑶13相比稍有不足。
[0004] CD13是一種將氨基酸從寡肽N末端切除的膜結(jié)合糖蛋白（氨基肽酶N)，具有鋅離 子結(jié)合依賴(lài)性金屬蛋白酶活性，可酶解基底膜蛋白，促進(jìn)血管生成，從而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的侵 襲和轉(zhuǎn)移。研宄發(fā)現(xiàn)，CD13的抑制劑可以抑制肝癌細(xì)胞的侵襲和血管生成，在臨床治療中 CD 13抑制劑結(jié)合放化療對(duì)肝癌的治療效果好于單純放化療。因此有必要針對(duì)于臨床開(kāi)發(fā)出 檢測(cè)CD13的方法，從而有望將CD13作為一種新的腫瘤標(biāo)記物，為肝癌的診斷、愈后觀察、個(gè) 性化用藥提供一種輔助判定指標(biāo)。
[0005] 中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)CN102869992A公開(kāi)了一種用于癌癥診斷的方法和試劑盒，涉及用 于對(duì)懷疑患有前列腺癌的對(duì)象進(jìn)行診斷或提供預(yù)后的方法，包括體外檢測(cè)前列腺小體和對(duì) 至少一種選自⑶13、⑶59、⑶10、⑶26、⑶142、⑶143和MHC I的抗原的前列腺小體表達(dá)進(jìn) 行定量，以及將所定量的表達(dá)值與來(lái)源于健康對(duì)象的相應(yīng)抗原的參考值進(jìn)行比較，還提供 用于對(duì)懷疑患有前列腺癌的對(duì)象進(jìn)行診斷或提供預(yù)后的試劑盒。但是關(guān)于一種人源性的 CD13可溶性蛋白的免疫組化試劑盒及其應(yīng)用目前還未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種能夠檢測(cè)人源性的肝癌CD13 表達(dá)量的免疫組化試劑盒，抗原作為肝癌診斷試劑或根據(jù)CD13的表達(dá)量作為肝癌患者愈 后復(fù)發(fā)檢測(cè)指標(biāo)，以減少患者由于盲目用藥造成的損失及病情延誤。
[0007] 本發(fā)明的再一的目的是，提供一種能夠檢測(cè)人源性的肝癌CD13表達(dá)量的免疫組 化試劑盒的應(yīng)用。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種能夠檢測(cè)肝癌CD13表達(dá)量的免 疫組化試劑盒，所述的試劑盒包括：檢測(cè)人源性可溶性CD13抗原的抗體，HRP標(biāo)記的羊抗鼠 IgG，DAB顯色液和蘇木素復(fù)染液。
[0009] 所述的抗體能夠特異性結(jié)合CD13抗原分子。
[0010] 所述的試劑盒的檢測(cè)樣本為腫瘤組織。
[0011] 為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：所述的試劑盒在制備肝癌診 斷試劑中的應(yīng)用。
[0012] 所述的試劑盒在制備肝癌患者愈后復(fù)發(fā)檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：
[0014] 1、本發(fā)明的試劑盒敏感性級(jí)高，⑶13抗體與市面上其它的肝癌標(biāo)志物相比，陽(yáng)性 強(qiáng)度可以達(dá)到++++，符合臨床監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)；
[0015] 2、本發(fā)明的試劑盒準(zhǔn)確性級(jí)高，⑶13抗體與市面上其它的肝癌標(biāo)志物相比，準(zhǔn)確 率較高，符合臨床監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)；
[0016] 3、本發(fā)明的能夠檢測(cè)人源性的肝癌CD13表達(dá)量的免疫組化試劑盒，可以應(yīng)用于 人的肝癌細(xì)胞CD13抗原的檢測(cè)，根據(jù)CD13的表達(dá)量作為肝癌患者愈后復(fù)發(fā)檢測(cè)指標(biāo)；本發(fā) 明以病人腫瘤組織為檢測(cè)樣本具有快捷，敏感性好，特異性高，易于推廣應(yīng)用等特點(diǎn)?？捎?于指導(dǎo)肝癌術(shù)后點(diǎn)輔助治療，降低高?；颊咝g(shù)后復(fù)發(fā)率。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1.本發(fā)明用于肝癌患者免疫組化實(shí)驗(yàn)的圖片（20x):圖示結(jié)果顯示⑶13在肝 癌患者中表達(dá)呈陽(yáng)性。
[0018] 圖2.本發(fā)明用于肝癌患者癌旁免疫組化實(shí)驗(yàn)的圖片（20x):圖示結(jié)果顯示⑶13 在肝癌患者中表達(dá)呈陰性。
[0019] 圖3. Western blot驗(yàn)證⑶13在上述肝癌患者癌組織及癌旁組織中的表達(dá)。結(jié)果 顯示與圖1和圖2的結(jié)果相符合。
[0020] 圖4.肝癌患者⑶13陽(yáng)性與愈后，復(fù)發(fā)的關(guān)系：根據(jù)實(shí)施例1和2篩選出的肝癌患 者⑶13陽(yáng)性患者，通過(guò)與治療愈后數(shù)據(jù)比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，⑶13陽(yáng)性患者愈后差，復(fù)發(fā)率高，因此 可以作為腫瘤愈后查，復(fù)發(fā)率高的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，具有顯著性差異。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說(shuō)明。
[0022] 本發(fā)明使用的能夠檢測(cè)人源性的肝癌CD13表達(dá)量的免疫組化試劑盒，由人源性 可溶性CD13抗原的抗體，HRP (辣根過(guò)氧化物酶）標(biāo)記的羊抗鼠 IgG，DAB顯色液和蘇木素 復(fù)染液組成。
[0023] 實(shí)施例1
[0024] 試劑盒組成：
[0025] 肝癌個(gè)體化診斷檢測(cè)試劑盒（10人份）
[0026]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種能夠檢測(cè)肝癌CD13表達(dá)量的免疫組化試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包 括：檢測(cè)人源性可溶性CD13抗原的抗體，HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG，DAB顯色液和蘇木素復(fù)染 液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的抗體能夠特異性結(jié)合CD13抗原 分子。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒的檢測(cè)樣本為腫瘤組織。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒在制備肝癌診斷試劑中的應(yīng)用。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒在制備肝癌患者愈后復(fù)發(fā)檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種人源性的CD13可溶性蛋白的免疫組化試劑盒及其應(yīng)用，該免疫組化試劑盒可以應(yīng)用于人的肝癌細(xì)胞CD13抗原的檢測(cè)，根據(jù)CD13的表達(dá)量作為肝癌患者愈后復(fù)發(fā)檢測(cè)指標(biāo)。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明以病人腫瘤組織為檢測(cè)樣本，具有快捷，敏感性好，特異性高，易于推廣應(yīng)用等特點(diǎn)；可用于指導(dǎo)肝癌術(shù)后點(diǎn)輔助治療，降低高?；颊咝g(shù)后復(fù)發(fā)率。
【IPC分類(lèi)】G01N33-68, G01N33-574
【公開(kāi)號(hào)】CN104678109
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510098791
【發(fā)明人】徐泱, 胡博, 楊欣榮, 孫云帆, 樊嘉, 周儉
【申請(qǐng)人】復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院
【公開(kāi)日】2015年6月3日
【申請(qǐng)日】2015年3月6日