一種宮頸癌尿液檢測試劑盒及其使用方法
【專利說明】一種宮頸癌尿液檢測試劑盒及其使用方法
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及體外診斷試劑領(lǐng)域,具體地說,涉及一種宮頸癌尿液檢測試劑盒及其使用方法。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]早期發(fā)現(xiàn)是治療腫瘤的關(guān)鍵,腫瘤的發(fā)展分為五個階段:良性、腫瘤細胞啟動期、腫瘤早期、腫瘤中期、晚期。癌癥的可怕之處,就在于前三個階段,影像學根本無法檢測出來,即便到了腫瘤中期,也只有非常專業(yè)的醫(yī)生用較先進的設備才能測出。世界衛(wèi)生組織的研宄認為:目前1/3的癌癥是可以預防的;1/3的癌癥可以通過積極治療而延長患者生命;1/3的癌癥是可以通過早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療而痊愈的。
[0005]宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤。原位癌高發(fā)年齡為30?35歲,浸潤癌為45?
55歲,近年來其發(fā)病有年輕化的趨勢。目前最常用于宮頸病變篩查的方法是宮頸細胞學檢查,但檢測步驟繁瑣復雜,侵入性高,且收費較高,使宮頸癌的篩查難以普及。有文獻報道了宮頸癌患者尿中存在大量非蛋白巰基,也報道了可以使用子宮頸癌快速自檢試劑盒(FST-SH)來檢測患者尿液中的非蛋白巰基,從而判斷患者是否患有宮頸癌的風險(“檢測尿中巰基篩診宮頸癌與癌前病變的臨床意義”,《臨床腫瘤學雜質(zhì)》,2008年11月底13卷第11期,第974-978頁)。但該篇文獻沒有公開FSH-SH的具體組成和制備方法。
[0006]中國專利CN202092960U和CN104181155A中都公開了檢測巰基的試劑盒,但這兩篇文獻中都使用了具有嚴重健康危害的二氯化汞(即,氯化汞),對操作者的健康具有一定危險性。CN104198404A公開了一種宮頸癌篩查快速定量檢測試劑盒,其中使用DTNB作為顯色劑,但DTNB是檢測蛋白質(zhì)、多肽中的巰基的,而且這種方法需要使用生化儀進行檢測,不適用病人的一般家庭操作。
[0007]
【發(fā)明內(nèi)容】
[0008]本發(fā)明的目的就是提供一種檢測靈敏度高、準確性好的一種宮頸癌尿液檢測試劑盒及其使用方法,用于檢測人體尿液中巰基從而判斷是否患有宮頸癌。
[0009]本發(fā)明的宮頸癌尿液檢測試劑盒,包括容器I和容器2,其中容器I中含有2mlDTNB溶液,容器2中含有2ml磷鎢酸溶液。
[0010]其中DTNB溶液如下配制:首先配制Tris-甘氨酸緩沖溶液,每10ml溶液中含有1.04g Tris (三羥甲基氨基甲烷),0.69g甘氨酸,0.12g EDTA (乙二胺四乙酸),ρΗ=8.0,將
0.4g DTNB (即,5,5’- 二硫代雙(2-硝基苯甲酸))溶解于10ml上述緩沖液中,形成DTNB溶液。
[0011]其中磷鎢酸溶液如下配制:首先配制醋酸鹽緩沖液,2 mol/L醋酸鈉溶液98ml加2mol/L醋酸溶液2ml混合,將4g磷鎢酸溶解于10ml上述緩沖液中,形成磷鎢酸溶液。
[0012]本發(fā)明的宮頸癌尿液檢測試劑盒,其使用方法為:取受試者晨尿1ml,先滴加到含有2ml DTNB溶液的容器中,靜置2_5分鐘,然后加入含有2ml磷鎢酸溶液的容器中,靜置2-5分鐘,觀察溶液是否有顏色變化。
[0013]判斷標準:1、若無顏色變化,判斷為陰性,提示受試者體內(nèi)沒有宮頸癌;2、若顏色轉(zhuǎn)為藍色,判斷為陽性,提示受試者體內(nèi)有宮頸癌。
[0014]DTNB是Ellman反應中用于測試蛋白質(zhì)中游離巰基的試劑,本申請將尿液先與其進行反應,結(jié)合蛋白質(zhì)中的游離巰基。如果受試者患有宮頸癌,則尿液中存在大量非蛋白質(zhì)巰基,巰基為還原劑,可在酸性環(huán)境中使磷鎢酸還原成鎢藍而呈藍色,進而推斷患者患有宮頸癌。因此,本發(fā)明的試劑同樣適合患有蛋白尿的患者,提高了試劑的適用范圍。同時排除了蛋白質(zhì)巰基的干擾,也提高了測試的準確性。
[0015]因此,本發(fā)明提供了一種宮頸癌尿液檢測試劑盒及其使用方法,其通過檢測患者尿液中的巰基,來判斷患者是否患有宮頸癌。該試劑組成簡單,只需兩種主要試劑。操作方便,患者在家即可操作,簡單快捷。而且通過DTNB結(jié)合蛋白質(zhì)類巰基,降低了干擾,因此陽性檢出率和準確率高。
[0016]
【具體實施方式】
[0017]下面通過實施例來描述本發(fā)明的實施方式,本領(lǐng)域的技術(shù)人員應當認識到,這些具體的實施例僅表明為了達到本發(fā)明的目的而選擇的實施技術(shù)方案,并不是對技術(shù)方案的限制。根據(jù)本發(fā)明的教導,結(jié)合現(xiàn)有技術(shù)對本發(fā)明技術(shù)方案的改進是顯然的,均屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0018]—種宮頸癌尿液檢測試劑盒,包括容器I和容器2,其中容器I中含有2ml DTNB溶液,容器2中含有2ml磷鎢酸溶液。
[0019]其中DTNB溶液如下配制:首先配制Tris-甘氨酸緩沖溶液,每10ml溶液中含有
1.04g Tris,0.69g 甘氨酸,0.12g EDTA,ρΗ=8.0,將 0.4g DTNB (即,5,5’-二硫代雙(2-硝基苯甲酸))溶解于10ml上述緩沖液中,形成DTNB溶液。
[0020]其中磷鎢酸溶液如下配制:首先配制醋酸鹽緩沖液,2 mol/L醋酸鈉溶液98ml加2mol/L醋酸溶液2ml混合,將4g磷鎢酸溶解于10ml上述緩沖液中,形成磷鎢酸溶液。
[0021]一種宮頸癌尿液檢測試劑盒的使用方法:取受試者晨尿1ml,先滴加到含有2mlDTNB溶液的容器中,靜置2-5分鐘,然后加入含有2ml磷鎢酸溶液的容器中,靜置2_5分鐘,觀察溶液是否有顏色變化。
[0022]經(jīng)腫瘤醫(yī)院的臨床驗證,320例均為經(jīng)組織學確診的宮頸癌病人中檢出298例為陽性患者,準確率(符合率)達到93.1%。
[0023]本發(fā)明的宮頸癌尿液檢測試劑盒制作簡單,成本低廉,只需兩種主要試劑DTNB和磷鎢酸。并且使用DTNB排除了蛋白質(zhì)巰基對檢測結(jié)果的干擾,提高了檢測結(jié)果的準確性。不使用具有嚴重健康危害的試劑,對操作者而言更安全。且無需復雜儀器,顯色明顯,容易觀察結(jié)果。
[0024]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例,并非對本發(fā)明作出任何形式上和實質(zhì)上的限制。本領(lǐng)域的技術(shù)人員,在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi),當可利用以上所揭示的技術(shù)內(nèi)容而作出的更改、修飾與演變的等同變化均為本發(fā)明的等效實施例;同時,凡依據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)技術(shù)對以上實施例所作的任何等同變化的更改、修飾與演變等均在本發(fā)明的由權(quán)利要求界定的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種宮頸癌尿液檢測試劑盒,其特征在于,包括容器I和容器2,其中容器I中含有2ml DTNB溶液,容器2中含有2ml磷鎢酸溶液。
2.權(quán)利要求1所述的宮頸癌尿液檢測試劑盒,其特征在于,其中DTNB溶液的如下配制:首先配制Tris-甘氨酸緩沖溶液,每10ml溶液中含有1.04g Tris,0.69g甘氨酸,0.12gEDTA, pH=8.0,將0.4g DTNB溶解于10ml上述緩沖液中,形成DTNB溶液。
3.權(quán)利要求1或2所述的宮頸癌尿液檢測試劑盒,其特征在于,其中磷鎢酸溶液如下配制:首先配制醋酸鹽緩沖液,2mol/L醋酸鈉溶液98ml加2mol/L醋酸溶液2ml混合,將4g磷鎢酸溶解于10ml上述緩沖液中,形成磷鎢酸溶液。
4.權(quán)利要求1至3中任一項所述的宮頸癌尿液檢測試劑盒的使用方法,其特征在于,取受試者晨尿1ml,先滴加到含有DTNB溶液的容器中,靜置2_5分鐘,然后加入含有磷鎢酸溶液的容器中,靜置2-5分鐘,觀察溶液是否有顏色變化。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種宮頸癌尿液檢測試劑盒,包括容器1和容器2,其中容器1中含有2ml DTNB溶液,容器2中含有2ml磷鎢酸溶液。本發(fā)明還公開了該試劑盒的使用方法,取受試者晨尿1ml,先滴加到含有DTNB溶液的容器中,靜置2-5分鐘,然后加入含有磷鎢酸溶液的容器中,靜置2-5分鐘,觀察溶液是否有顏色變化。通過顯色反應,所述試劑盒可以方便快速地判斷受試者是否患有宮頸癌。
【IPC分類】G01N33-68
【公開號】CN104714030
【申請?zhí)枴緾N201510097778
【發(fā)明人】朱建華
【申請人】杭州欣葉生物科技有限公司
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2015年3月5日