一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] -種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，屬于分析化學技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 三聚氰胺（C3H3N6)是一種重要的氮雜環(huán)有機化工原料，其含氮量高達66%，常被 人為添加到牛奶、奶粉以及動物飼料中以虛增蛋白質(zhì)含量。其機構(gòu)如下：
[0003]
【主權(quán)項】
1. 一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，其特征在于利用核酸適配 體與金納米粒子發(fā)生團聚作用檢測食品中三聚氰胺的殘留量，包括以下步驟：金納米粒子 (CS-AuNPs)的制備；通過測定紫外吸收光譜確定核酸適配體與金納米粒子的作用原理；通 過測定吸光度觀察核酸適配體、金納米粒子和三聚氰胺體系的反應(yīng)；運用核酸適配體與金 納米粒子的正負電吸引作用方法檢測三聚氰胺并進行實際樣品的檢測。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，其中 所述金納米粒子（CS-AuNPs)的制備和透射電鏡表征步驟如下： 所有的玻璃器皿都經(jīng)過王水浸泡，雙蒸水清洗，晾干備用；制備時，向潔凈的IOOmL的 三口燒瓶中加入5〇1^1.4禮的氯金酸和50〇1^0.21311的半胱胺鹽酸鹽，室溫下暗處攪拌 20min;在不斷攪拌的情況下，緊接著快速加入12. 5yL新制備的IOmM的硼氫化鈉，繼續(xù)攪 拌30min;最后形成的酒紅色的溶液，用0. 45ym的微孔膜過濾，置于4°C保藏，所制得的金 納米粒子粒徑為40nm; ① 樣品制備 吸取40nm金納米粒子200yL，娃哈哈純凈水1800yL于2mL離心管中，作為對照；另 一離心管中分別吸取40nm金納米粒子200yL，娃哈哈純凈水1600yL和5. 0yg/mL的三聚 氰胺200yL，在25°C下同時培養(yǎng)15min;將兩種樣品分別滴于兩個銅網(wǎng)上，室溫晾干備用； ② 參數(shù) 用TECNAIF20透射電鏡于200kV的加速電壓下掃描樣品①的透射電鏡。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，其中 所述通過測定圓二光譜確定三聚氰胺與核酸適配體的作用原理的步驟如下： 取兩個潔凈的I. 5mL的離心管a，b，在兩管中分別加入200yL核酸適配體，再在b管中 加入200yL的三聚氰胺和200yL核酸適配體；a管中只有三聚氰胺的核酸適配體；b管中 為含有三聚氰胺和核酸適配體的混合體系，然后分別測定其圓二吸收光譜并觀察吸收光譜 的變化。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，其中 所述通過測定金納米粒子與三聚氰胺之間的作用步驟如下： 取兩個I. 5mL的離心管，編號為a,b，分別依次加入，a管（金納米粒子80yL, 420yL娃哈哈純凈水），b管（金納米粒子80yL，三聚氰胺80yL，340yL娃哈哈純凈水），然后分 別測定其紫外吸收光譜并觀察吸收光譜的變化。
5. 如權(quán)利要求1所述的一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，其中 所述通過測定金納米粒子與核酸適配體之間的作用步驟如下： 取兩個I. 5mL的離心管，編號為a,b，分別依次加入，a管（金納米粒子80yL, 420yL娃哈哈純凈水），b管（金納米粒子80yL，核酸適配體65yL，355yL娃哈哈純凈水），然后 分別測定其紫外吸收光譜并觀察吸收光譜的變化。
6. 如權(quán)利要求1所述的一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，其中 所述通過測定紫外吸收光譜觀察核酸適配體、金納米粒子和三聚氰胺的反應(yīng)的步驟如下： 取四個I. 5mL的離心管，編號為a，b，c，d，分別依次加入，a管（金納米粒子 80yL，420yL娃哈哈純凈水），b管（金納米粒子80yL，三聚氰胺80yL，340yL娃哈哈純 凈水），c管（金納米粒子80yL，核酸適配體65yL，355yL娃哈哈純凈水），d管（金納米 粒子80yL，核酸適配體65yL，三聚氰胺80yL，275yL娃哈哈純凈水），然后將混合物在室 溫下反應(yīng)7min，觀察顏色變化并撿測紫外吸收光譜。
7.如權(quán)利要求1所述的一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，其中 所述實際樣品的檢測是取牛奶為代表進行的： 稱取2g(精確至0.Olg)試樣于50mL具塞塑料離心管中，加入15mL三氯乙酸溶液 (3. 2. 8)和5mL乙腈，超聲提取lOmin，再振蕩提取IOmin后，以不低于4000r/min離心 IOmin;上清液經(jīng)三氯乙酸溶液潤濕的濾紙過濾后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL 濾液，加入5mL水混勻后做待凈化液；在樣品加標回收試驗中，在處理過的牛奶樣品中，加 入已知濃度的三聚氰胺標準品，并進行預(yù)處理；其處理方法與實際樣品檢測中的前處理 方法一致；根據(jù)三聚氰胺的濃度建立工作曲線；三聚氰胺的檢出限為3. 54nM，線性范圍為 l-24nM〇
【專利摘要】一種利用核酸適配體和金納米粒子檢測三聚氰胺的方法，屬于分析化學技術(shù)領(lǐng)域，其特征在于利用核酸適配體與金納米粒子發(fā)生團聚作用檢測食品中三聚氰胺的殘留量，包括以下步驟：金納米粒子(CS-AuNPs)的制備；通過測定紫外吸收光譜確定核酸適配體與金納米粒子的作用原理；通過測定吸光度觀察核酸適配體、金納米粒子和三聚氰胺體系的反應(yīng)；運用核酸適配體與金納米粒子的正負電吸引作用方法檢測三聚氰胺并進行實際樣品的檢測。
【IPC分類】G01N21-78, G01N21-31
【公開號】CN104730016
【申請?zhí)枴緾N201510175437
【發(fā)明人】孫春燕, 鄭宏儒, 沈斐, 郭佳佳, 羅葉麗, 許景月, 李瑩, 黃延軍
【申請人】吉林大學
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年4月14日