一種適用定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的hplc/ms/ms方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種適用快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的方法，具體涉及一種采用磺化法凈化與鹽析分層前處理的快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS 方法。
【背景技術(shù)】
[0002]由于熱穩(wěn)定性高、高表面活性等優(yōu)良性能，全氟辛酸(PFOA)大量應(yīng)用電子工業(yè)、電鍍等行業(yè)和化妝品、日用洗滌等民用產(chǎn)品。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在1951-2004年期間全球全氟辛酸的總生產(chǎn)量大約在3600-5700噸，其中約有400-700噸全氟辛酸排放到環(huán)境當(dāng)中。由于疏水又疏油的特點(diǎn)，與一般親脂性有機(jī)污染物不同，全氟辛酸進(jìn)入生物體內(nèi)后不在脂肪組織中積蓄，而是優(yōu)先和蛋白質(zhì)結(jié)合，然后通過血液循環(huán)到達(dá)肝臟、脾臟等器官和肌肉組織，因此全氟辛酸是具有全身多臟器毒性的環(huán)境污染物。毒理學(xué)研宄表明，全氟辛酸對(duì)生物可能造成急性毒性、肝臟毒性、神經(jīng)毒性、生殖毒性、遺傳毒性及致癌性等多種復(fù)合毒性效應(yīng)，在生物各個(gè)層次可引起毒性效應(yīng)。美國(guó)國(guó)家環(huán)保局(USEPA)在有關(guān)報(bào)告中將它們認(rèn)定為“可能的(likely)致癌物”或者“提示性(suggestive)致癌物”。由于氟具有最大的電負(fù)性，C-F鍵表現(xiàn)為強(qiáng)極性，全氟辛酸具有很高的化學(xué)穩(wěn)定性和生物惰性，在生物體中很難降解。全氟辛酸進(jìn)入生物體后不易被代謝，可產(chǎn)生生物富集效應(yīng)，同時(shí)可通過食物鏈向包括人類在內(nèi)的高位生物轉(zhuǎn)移。Harada等研宄顯示PFOA在人體腎臟中的排泄過程非常緩慢，它在人類血清半衰期大約為8.67年。Martin等研宄表明PFOA在魚的可食用、不可食用和整個(gè)生物體的生物濃縮系數(shù)(BCF)分別為484、1124、859，半衰期分別為146、133、152d。2002年經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD)認(rèn)定PFOA是一類新型的環(huán)境持久性污染物。因此，動(dòng)物源性食品中全氟辛酸檢測(cè)技術(shù)是保障人們飲食安全與身體健康的必備技術(shù)手段。
[0003]發(fā)明要解決的技術(shù)問題:
[0004]PFOS和全氟辛酸檢測(cè)分析方法研宄始于20世紀(jì)60年代，現(xiàn)已發(fā)展出多種方法，主要有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC/MS/MS或HPLC/MS/MS)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC/MS)、高效液相色譜/四級(jí)桿/飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC/Q-T0F)、氣質(zhì)聯(lián)用(GC/MS)等。HPLC/MS/MS具有分析模式多、靈敏度高、檢測(cè)范圍大、檢測(cè)極限低等優(yōu)點(diǎn)，是目前全氟辛酸最常用檢測(cè)方法之一。然而，由于動(dòng)物性食品中富含的脂肪、蛋白質(zhì)等有機(jī)雜質(zhì)干擾，甲醇等有機(jī)溶劑無法有效地提取出樣品中的全氟辛酸，而且復(fù)雜的樣品基質(zhì)嚴(yán)重干擾HPLC/MS/MS對(duì)全氟辛酸的檢測(cè)分析。因此，針對(duì)這一技術(shù)難題，本發(fā)明結(jié)合磺化法凈化前處理與鹽析分層的方法，建立一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明結(jié)合磺化法凈化前處理與鹽析分層的方法，建立一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法。
[0006]具體技術(shù)方案為:
[0007]本發(fā)明基本原理是利用磺化法凈化去除動(dòng)物性食品中的脂肪、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，以乙腈、丙酮等溶劑為萃取劑，利用鹽析作用分離水相與有機(jī)相有效提取樣品液中的全氟辛酸，然后采用HPLC-MS/MS法對(duì)全氟辛酸進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析。
[0008]一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法，其步驟為:
[0009](I)樣品磺化法凈化處理:稱取5克冷凍干燥的動(dòng)物源性食品放置燒杯，用滴管慢慢滴入5ml濃度為50-80%硫酸溶液。在40_50°C條件下酸液磺化處理20-35分鐘后，樣品與硫酸混合液慢慢轉(zhuǎn)移至裝有30-40ml過飽和氧氧化鈉溶液燒杯中。
[0010](2)有機(jī)溶劑萃取:在裝有混合溶液燒杯中加入40-50mL乙腈或丙酮溶劑，然后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中進(jìn)行振蕩萃取10-15分鐘，再加入過量氯化鈉振蕩2-3分鐘，分取上層有機(jī)層溶劑。
[0011](3)分取出的有機(jī)溶劑在40-45?水浴條件下濃縮近干，然后用甲醇溶解轉(zhuǎn)移到進(jìn)樣瓶中定容至0.2ml，最后進(jìn)樣至HPLC-MS/MS上檢測(cè)分析。
[0012](4)HPLC-MS/MS色譜條件:流動(dòng)相為2mmol/L醋酸銨和乙睛，柱溫30°C，保留時(shí)間40ms，流速0.3ml/min，進(jìn)樣量10.0yL。質(zhì)譜條件:電噴霧電離負(fù)源，霧化溫度450°C，輔助氣(N2)流量5ml/min，毛細(xì)管電壓3500V。
[0013]有益效果
[0014]本發(fā)明提供了一種適用定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC/MS/MS方法。與現(xiàn)有的方法相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0015]1.利用全氟辛酸對(duì)濃硫酸的化學(xué)穩(wěn)定性對(duì)動(dòng)物源性食品樣品進(jìn)行磺化法處理，一方面可消解去除樣品中的脂肪、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)的干擾，另一方面通過酸液消解破壞全氟辛酸與樣品組織的結(jié)合作用，使得溶劑提取更加充分，有利于提高回收率。
[0016]2.利用鹽析作用使有機(jī)相與水相分層，減少了 SPE柱凈化步驟，一方面縮短了每個(gè)樣品的檢測(cè)時(shí)間，同時(shí)極大降低了檢測(cè)成本。
【具體實(shí)施方式】
[0017]以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明
[0018]實(shí)施例1:
[0019](I)樣品磺化法凈化處理:稱取5克冷凍干燥的魚肉樣品放置燒杯，用滴管慢慢滴入5ml濃度為60%硫酸溶液。在50°C條件下酸液磺化處理25分鐘后，樣品與硫酸混合液慢慢轉(zhuǎn)移至裝有30ml過飽和氧氧化鈉溶液燒杯中。
[0020](2)有機(jī)溶劑萃取:在裝有混合溶液燒杯中加入50mL乙腈溶劑，然后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中進(jìn)行振蕩萃取10分鐘，再加入過量氯化鈉振蕩2分鐘，分取上層有機(jī)層溶劑。
[0021](3)分取出的有機(jī)溶劑在40°C水浴條件下濃縮近干，然后用甲醇溶解轉(zhuǎn)移到進(jìn)樣瓶中定容至0.2ml，最后進(jìn)樣至HPLC-MS/MS上檢測(cè)分析。
[0022](4)HPLC-MS/MS色譜條件:流動(dòng)相為2mmol/L醋酸銨和乙睛，柱溫30°C，保留時(shí)間40ms，流速0.3ml/min，進(jìn)樣量10.0yL。質(zhì)譜條件:電噴霧電離負(fù)源，霧化溫度450°C，輔助氣(N2)流量5ml/min，毛細(xì)管電壓3500V。
[0023]實(shí)施例2:
[0024](I)樣品磺化法凈化處理:稱取5克冷凍干燥的火腿腸樣品放置燒杯，用滴管慢慢滴入5ml濃度為70%硫酸溶液。在50°C條件下酸液磺化處理30分鐘后，樣品與硫酸混合液慢慢轉(zhuǎn)移至裝有30ml過飽和氧氧化鈉溶液燒杯中。
[0025](2)有機(jī)溶劑萃取:在裝有混合溶液燒杯中加入50mL丙酮溶劑，然后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中進(jìn)行振蕩萃取10分鐘，再加入過量氯化鈉振蕩2分鐘，分取上層有機(jī)層溶劑。
[0026](3)分取出的有機(jī)溶劑在40°C水浴條件下濃縮近干，然后用甲醇溶解轉(zhuǎn)移到進(jìn)樣瓶中定容至0.2ml，最后進(jìn)樣至HPLC-MS/MS上檢測(cè)分析。
[0027](4)HPLC-MS/MS色譜條件:流動(dòng)相為2mmol/L醋酸銨和乙睛，柱溫30°C，保留時(shí)間40ms，流速0.3ml/min，進(jìn)樣量10.0yL。質(zhì)譜條件:電噴霧電離負(fù)源，霧化溫度450°C，輔助氣(N2)流量5ml/min，毛細(xì)管電壓3500V。
[0028]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法，其特征在于步驟如下: (1)樣品磺化法凈化處理:稱取5克冷凍干燥的動(dòng)物源性食品放置燒杯，用滴管慢慢滴入5ml濃度為50-80%硫酸溶液。在40_50°C條件下酸液磺化處理20-35分鐘后，樣品與硫酸混合液慢慢轉(zhuǎn)移至裝有30-40ml過飽和氧氧化鈉溶液燒杯中； (2)有機(jī)溶劑萃取:在裝有混合溶液燒杯中加入40-50mL萃取溶劑，然后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中進(jìn)行振蕩萃取10-15分鐘，再加入過量氯化鈉振蕩2-3分鐘，分取上層有機(jī)層溶劑； (3)分取出的有機(jī)溶劑在40-45?水浴條件下濃縮近干，然后用甲醇溶解轉(zhuǎn)移到進(jìn)樣瓶中定容至0.2ml，最后進(jìn)樣至HPLC-MS/MS上檢測(cè)分析； (4)HPLC-MS/MS色譜條件:流動(dòng)相為2mmo I/L醋酸銨和乙睛，柱溫30 °C，保留時(shí)間40ms，流速0.3ml/min，進(jìn)樣量10.0yL。質(zhì)譜條件:電噴霧電離負(fù)源，霧化溫度450°C，輔助氣N2流量5ml/min，毛細(xì)管電壓3500V。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法，其特征在于步驟(I)樣品處理中所用硫酸溶液濃度為60%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法，其特征在于步驟(2)樣品處理中的萃取溶劑為乙腈或丙酮溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法，其特征在于步驟(3)有機(jī)溶劑在40-45°C水浴條件下濃縮近干。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法，其特征在于步驟(3)的定容有機(jī)溶劑為甲醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法，其特征在于步驟(4)的檢測(cè)儀器是HPLC-MS/MS。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種環(huán)境分析化學(xué)領(lǐng)域的全氟辛酸檢測(cè)方法，具體是一種適用定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC/MS/MS方法。針對(duì)動(dòng)物性食品富含脂肪、蛋白質(zhì)等組份導(dǎo)致無法有效地提取出全氟辛酸，以及復(fù)雜樣品基質(zhì)嚴(yán)重干擾定量檢測(cè)等問題，本發(fā)明利用全氟辛酸對(duì)濃硫酸的化學(xué)穩(wěn)定性對(duì)動(dòng)物源性食品樣品進(jìn)行磺化法凈化處理，采用鹽析分層方法有效提取目標(biāo)化合物，建立一種快速定量檢測(cè)動(dòng)物源性食品中全氟辛酸的HPLC-MS/MS方法。與現(xiàn)有的方法相比，本發(fā)明通過硫酸磺化消解樣品的脂肪、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，提高回收率，減少基質(zhì)干擾，縮短了檢測(cè)時(shí)間，降低檢測(cè)成本，非常適用于大量樣品的檢測(cè)工作。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號(hào)】CN104749276
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510121887
【發(fā)明人】魏東洋, 賀濤, 魏良良
【申請(qǐng)人】環(huán)境保護(hù)部華南環(huán)境科學(xué)研究所
【公開日】2015年7月1日
【申請(qǐng)日】2015年3月19日