一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明是一種測定菜籽油共軛亞油酸（CLA)含量的方法，利用紫外分光光度測定 方法，重點對于經(jīng)過酯化處理后的菜籽油進行吸光度測定，來換算菜籽油中共軛亞油酸的 含量，屬于食品分析領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 共軛亞油酸是一系列碳原子數(shù)為18,含有共軛雙鍵（-C = C-C = C-)的必需脂肪 酸亞油酸的多種幾何與位置異構(gòu)體混合物的總稱，共軛亞油酸的雙鍵在碳鏈上有多種位置 排列方式，共軛雙鍵起始于羧基端的第8, 9, 10, 11位碳原子，由于共軛雙鍵兩端的碳原子 都具有順式和反式兩種幾何構(gòu)型，每種位置異構(gòu)又具有4種幾何異構(gòu)體，故共軛亞油酸的 種類十分豐富，一般認為共軛亞油酸總共有16種同分異構(gòu)體。
[0003] 共軛亞油酸是人和動物不可缺少的脂肪酸之一，卻是自身無法合成的一種具有顯 著藥理作用和營養(yǎng)價值的物質(zhì)，對人體健康有很大益處。大量文獻證明，共軛亞油酸具有 抗腫瘤、抗氧化、抗突變、抗菌，降低人體膽固醇，抗動脈粥樣硬化，提高免疫力，提高骨骼密 度，防治糖尿病及促進生長等多種重要生理功能。近年來又有一些臨床研宄報告證明，共軛 亞油酸進入機體后能夠增加體能消耗，因此在體重控制方面可以有效降低體內(nèi)脂肪沉積。 對共軛亞油酸安全性毒理學(xué)試驗研宄表明，它是一種既無毒又無任何副作用的物質(zhì)，被譽 為"21世紀綠色營養(yǎng)保健食品"。目前，共軛亞油酸已成為食品、藥品、化妝品等行業(yè)的研宄 熱點。
[0004] 共軛亞油酸在自然界中含量較少，主要存在于反芻動物牛、羊等的肉和奶及其制 品中，非反芻動物及其它食品中含量較少。
[0005] 為了充分發(fā)揮共軛亞油酸的特異性功能，人工合成法是獲得大量共軛亞油酸的有 效途徑。在實際生產(chǎn)中，通常利用亞油酸或富含亞油酸的植物油為底物，如大豆油、蓖麻油、 核桃油、紅花油、葵花籽油、玉米胚芽油、花生油、瓜子油等，通過化學(xué)合成、微生物發(fā)酵及酶 異構(gòu)法等將亞油酸轉(zhuǎn)化成共軛亞油酸。
[0006] 隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，各種分析方法不斷涌現(xiàn)，如氣相色譜、高效液相色譜 法、電噴霧電離質(zhì)譜均能有效地對共軛亞油酸含量進行分析。雖然上述方法分析準(zhǔn)確、精度 高，但是對樣品的前期處理要求苛刻，同時由于設(shè)備價格昂貴，對設(shè)施使用環(huán)境要求高，同 時需要配備專業(yè)技術(shù)人員按照操作流程嚴格操作，所需耗材成本高，不適應(yīng)工廠對大批量 產(chǎn)品進行分析檢驗。本發(fā)明利用紫外分光光度儀能對酯化后菜籽油中共軛亞油酸含量進行 有效分析測定，其測試結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，操作方法簡便快捷，所用耗材成本低廉，適合于 中小規(guī)模生產(chǎn)企業(yè)樣品的批量分析。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法。該方法可以簡便快 速檢測菜籽油中共軛亞油酸的含量。
[0008] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0009] ( -）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線 [0010] (1)共軛亞油酸甲酯化
[0011] 量取三氟化硼甲醇溶液8-15mL于250mL燒瓶中，稱取Ig待測樣品加入其中，連接 回流冷凝裝置，水浴加熱，在60-70°C條件下先回流時間1-8分鐘，加入羥甲基胺乙二醇繼 續(xù)回流2-3小時；將燒瓶從回流裝置中取出，冷卻至22-25 °C，加入26 %質(zhì)量濃度的NaCl溶 液，在轉(zhuǎn)速為180-260轉(zhuǎn)/分鐘、溫度為25-37 °C的振蕩培養(yǎng)箱中，反應(yīng)2-6min ;將上述溶液 移入分液漏斗中，靜置2小時后，將上層溶液移至另一燒瓶中，用羥甲基胺乙二醇進一步萃 取1-3次，羥甲基胺乙二醇的加入量為上層液體的1-1. 5倍體積；合并萃取液，并在萃取液 中加入無水Na2SO4試劑，其加入量為每毫升萃取液加入0. 5g，將萃取液中殘留的水分全部 除去，過濾后備用。
[0012] (2)測定共軛亞油酸甲酯吸光值
[0013] 發(fā)明方法中通過測定共軛亞油酸甲酯的含量，對樣品中共軛亞油酸的含量進行輔 助矯正，使用分析天平精確稱取樣品〇. 〇579g置于IOOmL容量瓶中，用羥甲基胺乙二醇定容 至刻度，分別稀釋以下 6 個濃度梯度 0· 01g/L、0. 02g/L、0. 03g/L、0. 04g/L、0. 05g/L、0. 06g/ L作為待測樣品；將UV760CRT型紫外可見分光光度計的波長分別設(shè)定在190、200、210、220、 230、240、250、260、270、280、290、300nm范圍，測定不同濃度梯度下樣品吸光值，通過繪圖計 算得出樣品的最大吸光值對應(yīng)的波長，并在此波長下測定待測批量樣品的吸光度（A)。
[0014] (3)建立回歸方程
[0015] 根據(jù)Bouguer - Lambert光吸收定律，當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勾非散 射的吸光物質(zhì)時，其吸光度與吸光物質(zhì)的濃度（C)及吸收層厚度（D)成正比。本發(fā)明以共 軛亞油酸標(biāo)準(zhǔn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，在232nm波長下，分別對0. 01g/L、 0. 02g/L、0. 03g/L、0. 04g/L、0. 05g/L、0. 06g/L標(biāo)樣測定其吸光度，得出共軛亞油酸質(zhì)量濃 度與吸光度之間存在線性關(guān)系，對在〇. 01-0. 〇6g/L范圍內(nèi)的分析點進行線性回歸。
[0016] 以共軛亞油酸在232nm處的吸光度為縱坐標(biāo)y，其質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)X，采用Excel 進行回歸分析得出回歸方程：y = 54. 089x-0. 3376,斜率R2 = 0. 9822。
[0017] (二）測定共軛亞油酸最適濃度范圍
[0018] 如附圖3所示，在0. 01-0. 06g/L濃度范圍，待測樣品共軛亞油酸甲酯的羥甲基胺 乙二醇溶液濃度與吸光度呈現(xiàn)出線性方程關(guān)系。實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)其溶液濃度小于〇. 〇lg/L或 溶液濃度大于〇. 〇6g/L時，其吸光度的線性關(guān)系喪失。為此0. 01-0. 06g/L是測定共軛亞油 酸的羥甲基胺乙二醇最適濃度范圍。
[0019] (三）建立經(jīng)驗公式
[0020] 依據(jù)本發(fā)明得出，共軛亞油酸的羥甲基胺乙二醇測定最適濃度范圍在 0. 01-0. 06g/L之間，其溶液濃度與吸光度呈現(xiàn)出線性方程關(guān)系，通過上述回歸方程得出如 下經(jīng)驗公式：
[0021]
【主權(quán)項】
1. 一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法，其特征在于，包含以下步驟： (1) 樣品甲酯化 ① 量取三氟化硼甲醇溶液8-15mL，精確稱取10-25g待測樣品加入其中，連接回流冷凝 裝置，水浴加熱，在60-70°C條件下先回流1-8分鐘，加入羥甲基胺乙二醇繼續(xù)回流2-3小 時； ② 反應(yīng)體系冷卻至22-25°C，加入20-26%質(zhì)量濃度的NaCl溶液，在轉(zhuǎn)速為180-260轉(zhuǎn) /分鐘、溫度為25-37°C的振蕩培養(yǎng)箱中，反應(yīng)2-6min; ③ 將上述溶液移入分液漏斗中，靜置1-2小時后，將上層溶液移出，用羥甲基胺乙二醇 進一步萃取1-3次，羥甲基胺乙二醇的加入量為上層液體的1-1. 5倍體積； ④ 合并萃取液，并在萃取液中加入無水Na2SO4試劑，其加入量為每毫升萃取液加入 0. 1-0. 5g，將萃取液中殘留的水分全部除去，過濾后備用； (2) 紫外分光光度法測定吸光度 ① 精確稱取甲酯化樣品l_5g，倒入容量瓶，用羥甲基胺乙二醇進行定容，并稀釋至 0. 01-0. 06g/L； ② 在紫外分光光度計中，將稀釋后的樣品在波長為230-234nm處測定吸光度； ③ 根據(jù)公式：共軛亞油酸含量=吸光度X1. 7845/待測樣品羥甲基胺乙二醇溶液的質(zhì) 量濃度，計算待測樣品中共軛亞油酸的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法，其特征在于，步驟（1) 中量取三氟化硼甲醇溶液12mL于250mL燒瓶中，稱取25g待測樣品加入其中，連接回流冷 凝裝置，水浴加熱，在68°C條件下回流3min，而后向其中加入SmL羥甲基胺乙二醇平穩(wěn)回流 1. 5h〇
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法，其特征在于，步驟（1) 中，向經(jīng)①反應(yīng)后的溶液中加入58mL的飽和食鹽水，在轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分鐘、溫度為28°C的 振蕩培養(yǎng)箱中，反應(yīng)4min。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法，其特征在于，步驟（1) 中將經(jīng)②處理后的溶液移入分液漏斗中，靜置2小時后，將上層溶液移至另一燒瓶中，用羥 甲基胺乙二醇進一步萃取3次，每次羥甲基胺乙二醇的加入量為上層液體的1、1. 1、1. 2、 1. 4倍體積。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法，其特征在于，步驟（1) 中合并經(jīng)羥甲基胺乙二醇萃取后的溶液，并在萃取液中加入Na2SO4試劑，其加入量為每毫 升萃取液加入0. 16g，將萃取液中殘留的水分全部出去，真空干燥，過濾后備用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法，其特征在于，步驟（2) 中稱取2g甲酯化后的樣品于500mL容量瓶中，用羥甲基胺乙二醇定容，并稀釋至0. 04g/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法，其特征在于，步驟（2) 中經(jīng)①定容稀釋后的樣品，在紫外分光光度計中，在波長為232nm處測定吸光度。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測定菜籽油共軛亞油酸含量的方法，包括以下步驟：標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立、經(jīng)驗公式的推導(dǎo)、共軛亞油酸最適濃度范圍的確定、待測樣品甲酯化及紫外分光光度法測定共軛亞油酸甲酯吸光度。通過經(jīng)驗公式將紫外分光光度法測得的共軛亞油酸甲酯的吸光度值換算成共軛亞油酸含量。本發(fā)明所述方法與氣相色譜檢測共軛亞油酸含量相比，具有以下優(yōu)點：本發(fā)明所述方法簡化了程序、降低了成本、提高了測定精度和效率，適合于工業(yè)化生產(chǎn)中對批量樣品的快速檢驗；此外，本發(fā)明所述方法的測定結(jié)果與利用氣相色譜方法獲得的結(jié)果無顯著性差異。
【IPC分類】G01N21-33
【公開號】CN104777121
【申請?zhí)枴緾N201510119995
【發(fā)明人】梁峙, 梁驍, 馬捷
【申請人】徐州工程學(xué)院
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年3月18日