采用sle法分離飼料中的萊克多巴胺的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及動物飼料的檢測領(lǐng)域，特別是一種采用SLE法分離飼料中的萊克多巴 胺的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 樣品前處理是分析檢測過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是濃縮被測定的痕量組分，提高方法的 靈敏度，及除去對分析系統(tǒng)有干擾的物質(zhì)的重要手段。萃取是從樣品集體中分離出目標化 合物的一項技術(shù)，是樣品預(yù)處理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是應(yīng)用最廣泛的 樣品制備方法之一，但是，傳統(tǒng)的液液萃取的操作繁瑣費時、有機溶劑消耗量大，而且容易 出現(xiàn)乳化現(xiàn)象的缺陷，使得在實際應(yīng)用中具有一定的局限性。
[0003] 1998年，科學(xué)家提出了在傳統(tǒng)的液液萃取的基礎(chǔ)上，利用一種具有吸附性和較大 的比表面積的惰性多空填料作為介質(zhì)，建立的一種新型高效樣品的制備方法-介質(zhì)液液萃 ?。╯upportedliquidextraction簡稱SLE)，SLE萃取技術(shù)就是選用一種多孔性惰性材 料-煅燒硅藻土作為介質(zhì)，取代分液漏斗，增大了兩相接觸時的作用面積，實現(xiàn)高效、快速 的萃取過程。
[0004] 當水溶液樣品加樣到固定的聚丙烯注射管中的煅燒硅藻土上后，經(jīng)過一定時間 (一般分為幾分鐘），水相溶液以一層薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，將有機溶劑 從柱管上端加入，當互不相溶的兩相在硅藻土表面接觸的同時萃取立即發(fā)生，最后萃取液 在重力作用下流出，必要情況下，可以施加較小的壓力，而水相保留在介質(zhì)中。盛接的流出 液直接將溶劑吹干，復(fù)溶后，即可用于下一步分析檢測。
[0005] 現(xiàn)有的國標和現(xiàn)有公開的文獻并未涉及動物飼料中的萊克多巴胺的分離方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單的采用SLE法分離飼料中的萊 克多巴胺的方法。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法，包括以 下步驟：
[0008] 步驟1 :取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心 處理，取離心處理后的上清液少量；所述的飼料樣品為lg，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的 上清液為〇. 5ml;
[0009] 步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置2~4分鐘；
[0010] 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，，每次洗脫時所用的洗脫劑為 〇. 5ml，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的洗脫液；
[0011] 其中，所述的緩沖溶液為：Ph范圍為8. 0~10. 0的氨水-氯化銨緩沖液，所述的 二元洗脫劑為異丁醇和乙酸甲酯的混合物，其中異丁醇和乙酸甲酯的重量比為0. 5~1:1。
[0012] 在上述的采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法中，所述的步驟1中，漩渦混 合器混合處理的時間為0. 5~1. 5分鐘。
[0013] 在上述的采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法中，所述的步驟1中，所述的 離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機中以9000~11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度 尚心0? 5~1. 5分鐘。
[0014] 在上述的采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法中，所述的SLE柱為奧秘山 東科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取SLE柱。
[0015] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0016] 采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺分離效率高，本發(fā)明的緩沖溶液能夠有效的 分離樣品中的萊克多巴胺，二元洗脫劑對萊克多巴胺有特別優(yōu)異的萃取效果，可以應(yīng)用于 以96孔板結(jié)構(gòu)為代表的高通量體系。經(jīng)過檢測，本發(fā)明的方案的萃取率為：93. 6%。
【具體實施方式】
[0017] 下面結(jié)合【具體實施方式】，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步的詳細說明，但不構(gòu)成對 本發(fā)明的任何限制。
[0018] 實施例1
[0019] 步驟1:取飼料樣品lg，加入到5ml的緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理處理 1分鐘后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液0. 5ml;離心處理的轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分 鐘，離心時間1分鐘。所述的緩沖溶液為：ph為9. 0的氨水-氯化銨緩沖液。
[0020] 步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置3分鐘；
[0021] 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的 洗脫液；每次消耗的洗脫劑為〇. 5ml，所述的二元洗脫劑為異丁醇和乙酸甲酯的混合物，異 丁醇和乙酸甲酯的重量比為0.8:1。
[0022] 實施例2
[0023] 步驟1 :取飼料樣品lg，加入到5ml的緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理處理 1分鐘后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液0. 5ml;離心處理的轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分 鐘，離心時間1分鐘。所述的緩沖溶液為：ph為8. 0的氨水-氯化銨緩沖液。
[0024] 步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置4分鐘；
[0025] 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的 洗脫液；每次消耗的洗脫劑為〇. 5ml，所述的二元洗脫劑為異丁醇和乙酸甲酯的混合物，異 丁醇和乙酸甲酯的重量比為1:1。
[0026] 實施例3
[0027] 步驟1 :取飼料樣品lg，加入到5ml的緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理處理 1分鐘后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液0. 5ml;離心處理的轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分 鐘，離心時間1分鐘。所述的緩沖溶液為：ph為10. 0的氨水-氯化銨緩沖液。
[0028] 步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置4分鐘；
[0029] 步驟3:采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的 洗脫液；每次消耗的洗脫劑為〇. 5ml，所述的二元洗脫劑為異丁醇和乙酸甲酯的混合物，異 丁醇和乙酸甲酯的重量比為0.5:1。
[0030] 標準樣的制備
[0031] 稱取萊克多巴胺標準品（純度彡99% )0? 1000g，置于100ml容量瓶中，用重量比 為0.8:1的異丁醇和乙酸甲酯的混合物的溶劑溶解定容，其濃度為1000μg/ml;
[0032] 取上述濃度為1000yg/ml的萊克多巴胺溶液于100ml容量瓶中，配制成為 0? 100yg/ml、0. 200yg/ml、0. 500yg/ml、1. 000yg/ml、2. 000yg/ml的標準樣。
[0033] 對比例1
[0034] 與實施例1大體相同，不同的地方在于，步驟3中，洗脫劑為異丁醇與乙酸乙酯的 混合物，其體積比為40:60。
[0035]分析：
[0036] 檢測方法具體為：
[0037] 儀器：LC-2010型高效液相色譜儀（日本島津）
[0038]色譜柱：C18 柱，150mm*3. 9mmID
[0039] 柱溫：室溫
[0040] 流動相：0. 05%磷酸水溶液：苯胺=40:60 (體積比）；
[0041] 檢測器：uv檢測器；
[0042]檢測波長：226nm;
[0043] 進樣量：5〇yL
[0044] 以 0? 100yg/ml、0. 200yg/ml、0. 500yg/ml、1. 000yg/ml、2. 000yg/ml的標準 樣進行測試，回歸方程為Y= 667X，R2= 0. 9998,X為待測物濃度，Y為峰面積。
[0045] 以實施例1所萃取的樣品為待測樣品，待測樣品的具體組分為70wt%玉米、 3〇wt%蛋白質(zhì)伺料，其中蛋白質(zhì)伺料由柏、棉柏和采柏組成，所述柏、棉柏和采柏的重 量比為4 : 1.5 : 0.5。此外，每千克待測組分中還加入有含有10mg萊克多巴胺的萊克多 巴胺溶液。
[0046] 待測樣品分為10份，每份lg，采用實施例1的步驟1所述的方法進行操作，每份樣 品平行取出2份0. 5ml的溶液，同一樣品的所取得的兩份0. 5ml的溶液為一組，共10組，每 組的溶液分別按照實施例1的步驟2-3進行操作和按照對比例1的步驟2-3進行操作。共 得到按實施例1所取得的10份洗脫液A，編號為A1-A10,和按照對比例1所取得的10份洗 脫液B，編號為B1-B10。
[0047] 按照上述檢測方法進樣檢測，得到如下的檢測結(jié)果：
[0048]
【主權(quán)項】
1. 一種采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1 :取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處 理，取離心處理后的上清液少量；所述的飼料樣品為lg，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的上 清液為0. 5ml; 步驟2 :將上清液加入到SLE柱后，靜置2~4分鐘； 步驟3 :采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，每次洗脫時所用的洗脫劑為0. 5ml，接 收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的洗脫液； 其中，所述的緩沖溶液為：Ph范圍為8. 0~10. 0的氨水-氯化銨緩沖液，所述的二元 洗脫劑為異丁醇和乙酸甲酯的混合物，其中異丁醇和乙酸甲酯的重量比為〇. 5~1:1。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的步驟1中，漩渦混合器混合處理的時間為0. 5~1. 5分鐘。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法，其特征在于，所 述的步驟1中，所述的離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機中以9000~ 11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心0. 5~1. 5分鐘。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法，其特 征在于，所述的SLE柱為奧秘山東科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取SLE柱。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法，包括以下步驟：步驟1：取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液少量；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2～4分鐘；步驟3：采用二元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺的洗脫液。本發(fā)明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單的采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺的方法。
【IPC分類】G01N1-28
【公開號】CN104819882
【申請?zhí)枴緾N201510239886
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 張云平, 賴秀梅, 陳啟釗, 郭振旺
【申請人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月12日