一種從禽肉中提取哌嗪殘留的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種禽肉中哌嗪殘留的提取和凈化的方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 在對(duì)動(dòng)物源性食品中的獸藥進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，只有將藥物從樣本中提取出來(lái)，才可能 建立起高效的檢測(cè)方法。哌嗪為白色葉片狀結(jié)晶，弱堿性，在空氣中吸收4〇和C02，易溶于 水，微溶于乙醇。國(guó)內(nèi)外關(guān)于哌嗪的提取方法有一些報(bào)道，提取劑一般為甲醇、乙腈、三氯乙 酸溶液和高氯酸溶液等。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)豬組織、雞蛋、牛組織及蜂蜜中哌嗪提取和凈化的 方法均有報(bào)道，以1%氨水乙腈為提取劑，乙腈飽和正己烷去除脂肪以達(dá)到凈化的效果，但 該方法在本發(fā)明建立的色譜條件下所得色譜峰峰形較差，有嚴(yán)重拖尾現(xiàn)象，且提取回收率 低于60%，不能滿(mǎn)足哌嗪在禽肉中殘留檢測(cè)的要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)不能從禽肉中提取哌嗪殘留的問(wèn)題，本試驗(yàn)建立了一種提取和 凈化的方法，該方法簡(jiǎn)單、方便、快速，有機(jī)試劑用量少，提取回收率高。
[0004] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種從禽肉中提取哌嗪殘留的方法，是以5. 0%三氯乙酸 水溶液和乙腈的混合溶液為提取劑處理禽肉樣品得提取液，提取液中加入乙腈飽和的正己 烷去除脂肪后，用固相萃取法凈化，再通過(guò)UPLC-MS/MS測(cè)定分析。
[0005] 具體地，將禽肉樣品均質(zhì)后，加入5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈混合溶液（體積比 3:1)振蕩、混勻直接提取，離心，將上清液轉(zhuǎn)移。重復(fù)提取1-2次，合并上清液，即得提取液。
[0006] 向提取液中加入乙腈飽和的正己烷去除脂肪后，過(guò)混合陽(yáng)離子固相萃取小柱 (Strata-X-C)，先依次用甲醇、超純水、2. 0%甲酸水溶液將SPE小柱活化平衡，上樣后待 提取液勻速流干后，再依次用2. 0%甲酸水溶液、超純水、甲醇淋洗，待小柱干燥后，最終用 10.0%氨水乙腈進(jìn)行洗脫。最后洗脫液用氮?dú)獯蹈?，上機(jī)前用2.OmL20.0%甲醇水溶液渦 旋振蕩溶解殘?jiān)?，轉(zhuǎn)移2.OmL復(fù)溶液至離心管中，常溫離心lOmin，將上層清液過(guò)0. 22ym濾 膜，濾液供UPLC-MS/MS和HPLC-MS/MS測(cè)定分析。
[0007] 與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明采用5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈混合溶液為提取劑 (體積比3:1)，固相萃取法凈化，所得色譜峰峰形較好，且回收率達(dá)85. 33 %以上。乙腈和三 氯乙酸可以有效地去除蛋白質(zhì)，并將藥物高效地提取出來(lái)，固相萃取法能減少內(nèi)源性雜質(zhì) 的污染，樣品凈化效果較好，明顯優(yōu)于傳統(tǒng)技術(shù)。
[0008] 有益效果：本發(fā)明比較了不同提取劑（甲醇、乙腈、氨水乙腈和三氯乙酸）、不同凈 化方法（液液萃取法和固相萃取法）對(duì)提取回收率的影響，最終選擇5. 0%二氯乙酸水溶液 和乙腈混合溶液為提取劑（體積比3:1)為提取劑，固相萃取法為凈化方法，哌嗪的提取回 收率均達(dá)到90%以上。不同提取試劑、提取方法對(duì)雞肌肉中哌嗪提取回收率的影響見(jiàn)表1。
[0009] 表1不同提取試劑、提取方法對(duì)雞肌肉中哌嗪提取回收率的影響（％ )
[0010]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從禽肉中提取哌嗪殘留的方法，其特征在于，以5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈 的混合溶液為提取劑處理禽肉樣品得提取液，提取液中加入乙腈飽和的正己烷去除脂肪 后，用固相萃取法凈化。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈的混合 溶液，其中5. 0%三氯乙酸水溶液和乙腈的體積比為3 :1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述固相萃取法具體是：過(guò)混合陽(yáng)離子固 相萃取小柱Strata-X-C，先依次用甲醇、超純水、2. 0%甲酸水溶液將SPE小柱活化平衡，上 樣后待提取液勻速流干后，再依次用2. 0%甲酸水溶液、超純水、甲醇淋洗，待小柱干燥后， 最終用10.0%氨水乙腈進(jìn)行洗脫。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及獸藥殘留檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種禽肉中哌嗪殘留的提取和凈化的方法。該方法是以5.0％三氯乙酸水溶液和乙腈的混合溶液為提取劑處理禽肉樣品得提取液，提取液中加入乙腈飽和的正己烷去除脂肪后，用固相萃取法凈化。經(jīng)提取和凈化的樣品可供UPLC-MS/MS和HPLC-MS/MS測(cè)定分析。本發(fā)明哌嗪的提取回收率均達(dá)到90％以上。
【IPC分類(lèi)】G01N30-14, G01N30-06
【公開(kāi)號(hào)】CN104820045
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510231081
【發(fā)明人】謝愷舟, 孫禮瑞, 龐茂達(dá), 王冉, 王劍鋒, 崔璐璐, 劉建宇, 高強(qiáng), 劉亞楠, 王波, 張跟喜, 戴國(guó)俊, 卜仕金, 王金玉
【申請(qǐng)人】揚(yáng)州大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2015年5月7日